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2025-05-01 02:33 本頁面
【正文】 1975年設(shè)計出 DNA測序法 ， 1980年獲諾貝爾化學獎 。 （ 3）分子雜交實例 ① Southern Blotting 可用于 DNA之間同源性分析，確定特異性 DNA序列的大小和定位。L1， t 為時間，以秒表示。 ② DNA濃度：濃度較高，復性較快 。 2. 核酸的復性 （ 1）復性（ renaturation）的概念 又稱退火（ annealing），指變性 DNA在一定條件下如溫度逐步恢復到生理范圍內(nèi)，兩條互補鏈重新恢復天然的雙螺旋構(gòu)象。經(jīng)驗公式： Tm=+(G+C)% ? 介質(zhì)離子強度：離子強度低， Tm低；離子強度高， Tm高。 在 Tm時， DNA內(nèi) 50%的雙鏈結(jié)構(gòu)被解開。 （ 2）變性因素 熱變性： 80℃ 幾分鐘，螺旋 → 線團 酸堿變性（ pH小于 4或大于 11） 變性劑（尿素、鹽酸胍、甲醛） （ 3）變性表征 ① 黏度下降、比旋光度下降、沉降系數(shù)增加、浮力密度增大、酸堿滴定曲線改變、生物活性喪失。 DNA在堿中雖變性，但不被水解，所以 DNA更穩(wěn)定。 2. RNA純品是白色的粉末， DNA為疏松的石棉一樣的纖維狀固體。 真核生物有 18S、 、 28S和 5S四種 ， 前 3種組成 45S的轉(zhuǎn)錄單位 ， 5S rRNA單獨轉(zhuǎn)錄 。 功能：蛋白質(zhì)合成模板（遺傳密碼）。 TψC環(huán) 4. tRNA的三級結(jié)構(gòu) 倒“ L”形，是所有 tRNA折疊后形成大小相似及三維構(gòu)象相似三級結(jié)構(gòu)，這有利于攜帶的氨基酸的tRNA進入核糖體的特定部位。 （ 4）修飾堿基（修飾核苷酸）：轉(zhuǎn)錄后加工而形成， 219個， 70多種，占 10%。 2. tRNA一級結(jié)構(gòu) （ 1）組成： 7090個核苷酸（標準： 76nt）。 （ 2）種類： 5060種， 真核可達 100多種（同工 tRNA：運載同一氨基酸的幾種 tRNA）。 ③ 核苷酸連接方式： 3′, 5′ 磷酸二酯鍵。 ③ 超螺旋數(shù)（ writhing number） W L = T + W W = 0 松弛環(huán) W 0 負超螺旋 （右手扭曲） W 0 正超螺旋 （左手扭曲 ） （二）雙鏈線性 DNA（ dsDNA）分子 存在于真核生物的染色質(zhì)和一些病毒中。 （一） 雙鏈環(huán)狀 DNA分子（ dcDNA） 存在于某些細菌的染色體、質(zhì)粒、病毒、真核生物的線粒體和葉綠體中。 ADNA BDNA ZDNA （四） DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型的意義 該模型揭示了 DNA作為遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性特征 ， 最有價值的是確認了堿基配對原則 ， 這是是 DNA復制 、 轉(zhuǎn)錄和反轉(zhuǎn)錄的分子基礎(chǔ) ， 亦是遺傳信息傳遞和表達的分子基礎(chǔ) 。 RNARNA、 RNADNA雜交分子具有這種結(jié)構(gòu)。為螺旋穩(wěn)定的主要作用力。 5′ 3′ 3. 螺旋直徑 2nm，相鄰堿基平面垂直距離,螺旋結(jié)構(gòu)每隔 10個堿基對（ base pair, bp）重復一次，間隔為 。 磷酸與脫氧核糖通過 3′, 5′ 磷酸二酯鍵相連接 ， 構(gòu)成 DNA分子的主鏈骨架 。 DNA的 Na鹽纖維和 DNA晶體的 X光衍射圖譜 Franklin （ 3） DNA的滴定曲線 DNA分子中的磷酸基可被滴定，堿基的可解離基團不能被滴定。 ⑤ 同一物種不同組織、器官有相同 DNA堿基 組成，不受生長發(fā)育、營養(yǎng)狀況及環(huán)境影響。 （ 2）簡寫式 pApCpGpUpC p表示為磷酸基團， p在堿基的左側(cè)表示與戊糖的 5′OH結(jié)合，右側(cè)表示與戊糖的 3′OH結(jié)合。磷酸二酯鍵 2. 確定： 339。 N cAMP cGMP 二、核酸的一級結(jié)構(gòu) 指核苷酸殘基沿多核苷酸鏈的排列次序。 水解核酸得到 539。和 539。、 339。 由戊糖（核糖或脫氧核糖）的第 1位 C碳原子與嘌呤堿的第 9位 N原子或嘧啶堿的第 1位 N原子通過 N糖苷鍵相連。兩類核酸中所含的主要堿基都是 4種： 1. 嘌呤堿（ purine ） 為嘌呤的衍生物，兩種： 腺嘌呤 （ adenine Ade or A ） 鳥嘌呤 （ guanine Gua or G ） 嘌呤環(huán) 腺嘌呤 鳥嘌呤 N9是成苷位置 （ pyrimidine ） 胞嘧啶 （ cytosine Cyt or C ） 尿嘧啶 （ uracil Ura or U ） 胸腺嘧啶 （ thymine Thy or T ） RNA中的堿基為胞嘧啶和尿嘧啶； DNA中的堿基為胞嘧啶和胸腺 嘧啶 。 ②噬菌體侵染細菌實驗。細胞核的核仁區(qū)域進行旺盛的 RNA合成（占 RNA總
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