【正文】 再進行光學定位 ，針刺或冰凍切片采樣分析 。 ?利用物質(zhì)密度的不同 ， 經(jīng)超速離心后 ， 分布于不同的液層而分離 。 氨基酸的洗脫順序與陽離子交換柱相反 。 ?主要的層析技術有離子交換層析 ， 凝膠層析 ， 吸附層析及親和層析等 。 二維電泳 （雙向電泳） 一維方向用等電聚焦進行電泳，將不同等電點的蛋白質(zhì)分開。 ?蛋白質(zhì)與多肽一樣 ， 能夠發(fā)生兩性離解 ，也有等電點 。 G2 有機溶劑沉淀 163 透析與超濾 透析法是利用半透膜將分子大小不同的蛋白質(zhì)分開。 ? 鹽析沉淀蛋白質(zhì)時，通常不會引起蛋白質(zhì)的變性。 再經(jīng)離心或鹽析、等電點沉淀、有機溶劑沉淀等方法制得蛋白質(zhì)粗制品。故也有人把極低密度脂蛋白和低密度脂蛋白稱為致動脈粥樣硬化脂蛋白。與動脈粥樣硬化發(fā)病有關。 血脂與血漿中的蛋白質(zhì)結(jié)合形成水溶性復合物 LP形式存在和運輸 。乳糜微粒 90％是甘油三酯，其余為磷脂、蛋白質(zhì)和膽固醇。 ?利用這個性質(zhì)，可以對蛋白質(zhì)進行定性鑒定。 因此 ， 凡凝固的蛋白質(zhì)一定發(fā)生變性 。 ?蛋白質(zhì)變性的可逆性： a)蛋白質(zhì)在體外變性后，絕大多數(shù)情況下是不能復性的； b)如變性程度淺，蛋白質(zhì)分子的構(gòu)象未被嚴重破壞；或者蛋白質(zhì)具有特殊的分子結(jié)構(gòu)，并經(jīng)特殊處理則可以復性。這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)的變性 (denaturation)。 ?由于沉淀過程發(fā)生了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的變化，所以又稱為變性沉淀。 （3）蛋白質(zhì)的沉淀作用 145 ?在溫和條件下，通過改變?nèi)芤旱?pH或電荷狀況，使蛋白質(zhì)從膠體溶液中沉淀分離。蛋白質(zhì)溶液具有膠體溶液的典型性質(zhì)，如丁達爾現(xiàn)象、布郎運動等。這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)電泳 (Electrophoresis)。 F2 蛋白質(zhì)的兩性解離與等電點 141 ?蛋白質(zhì)與多肽一樣，能夠發(fā)生兩性離解，也有等電點。 亮氨酸Leu以及其它疏水性氨基酸水解速度較快 。 ?最常見的蛋白水解酶有以下幾種： F13酶水解 135 ? Trypsin ： R1=賴氨酸 Lys和精氨酸 Arg側(cè)鏈（專一性較強，水解速度快）。 ?該法的優(yōu)點是 色氨酸 在水解中不受破壞 。 缺點是 色氨酸 被沸酸完全破壞； ?含有羥基的氨基酸如絲氨酸或蘇氨酸有一小部分被分解；門冬酰胺和谷氨酰胺側(cè)鏈的酰胺基被水解成了羧基 。 由于 CO與血紅蛋白結(jié)合的能力是 O2的 200倍， 因此，人體吸入少量的 CO即可完全抑制血紅蛋白與 O2的結(jié)合，從而造成 缺氧 死亡。 ?血紅蛋白中，血紅素 Fe原子的第六配價鍵可以與不同的分子結(jié)合：無氧存在時，與水結(jié)合，生成去氧血紅蛋白 (Hb)；有氧存在時，能夠與氧結(jié)合形成氧合血紅蛋白 (HbO2)。 一個蛋白質(zhì)與它的配體或其它蛋白質(zhì)結(jié)合后 ， 蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生變化 ， 使它更適合于功能需要 。 蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu) 由兩條或兩條以上具有三級結(jié)構(gòu)的多肽鏈聚合成特定構(gòu)象的蛋白質(zhì)分子 ，又稱為寡聚蛋白，其中每一條多肽鏈稱為 亞基 ，亞基單獨存在時無活力性 . 維持四級結(jié)構(gòu)的主要力量是 疏水力，還有范德華力、氫鍵、鹽鍵、二硫鍵等。 血紅蛋白 是由 4條肽鏈組成 。 ?維系蛋白質(zhì)四級結(jié)構(gòu)的是 氫鍵 、 鹽鍵 、范氏引力 、 疏水鍵 等非共價鍵 。有的蛋白質(zhì)分子有一個結(jié)構(gòu)域 ,有的有多個，如纖連蛋白含有 6 個結(jié)構(gòu)域。 105 鋅指結(jié)構(gòu) (螺旋 折迭 折迭模序 ) 106 E32 蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu) ?蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu) 是指蛋白質(zhì)分子或亞基內(nèi)所有原子的空間排布 ， 也就是一條多肽鏈的完整的三維結(jié)構(gòu) 。 102 無規(guī)卷曲： ?無規(guī)卷曲是指多肽鏈主鏈部分形成的無規(guī)律的卷曲構(gòu)象 。 回折部分所形成的一種二級結(jié)構(gòu) ， 其結(jié)構(gòu)特征為： ⑴ 主鏈骨架本身以大約 180176。 ?折疊 97 ?β 折迭包括平行式和反平行式兩種類型 98 β折迭： 99 E313 ?轉(zhuǎn)角 ?在 ?轉(zhuǎn)角部分，由四個氨基酸殘基組成 。幾乎所有肽鍵都參與鏈內(nèi)氫鍵的交聯(lián)，氫鍵與鏈的長軸接近垂直。同樣多個堿性氨基酸殘基在一段肽段內(nèi) ,正電荷相斥 ,也防礙 α 螺旋的形成 。 ?肽鏈內(nèi)形成氫鍵，氫鍵的取向幾乎與軸平行，第一個氨基酸殘基的酰胺基團的 CO基與第四個氨基酸殘基酰胺基團的 NH基形成氫鍵。 ， 稱為 肽單元或肽鍵平面 。 84 細胞色素 c的一級結(jié)構(gòu)與生物進化的關系 85 E3 蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu) ?蛋白質(zhì)的二級 (Secondary)結(jié)構(gòu) 是指肽鏈的主鏈在空間的排列 ,或規(guī)則的幾何走向、旋轉(zhuǎn)及折疊。 許多先天性疾病是由于某一重要的蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)發(fā)生了差錯引起的 。 82 ?胰島素 （ Insulin） 由 51個氨基酸殘基組成 ， 分為A、 B兩條鏈 。 Sanger由此 1958年獲Nobel 化學獎。 ? 維系蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的主要化學鍵為肽鍵。 77 E13. 離子鍵 （ 鹽鍵 ） ?離子鍵 (salt bond)是由帶正電荷基團與帶負電荷基團之間相互吸引而形成的化學鍵 。 ?氫鍵在維系蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)穩(wěn)定上起著重要的作用。 除一級結(jié)構(gòu)外 ， 蛋白質(zhì)的二 、 三 、 四級結(jié)構(gòu)均屬于空間結(jié)構(gòu) ， 即 構(gòu)象 。 抗原 69 多肽類激素 ?種類較多，生理功能各異。如果它們與大分子緊密結(jié)合，則 能刺激抗體的產(chǎn)生。 ?高度特異性就是一種抗體一般只能與引起它產(chǎn)生的相應抗原發(fā)生反應 。IgG含有兩條相同的高分子量的重鏈 (heavy chain)和兩條相同的低分子量的輕鏈 (light chain)。 抗體就是免疫球蛋白 。 ?免疫球蛋白是被脊椎動物作為抗體合成的。血紅蛋白含有四條肽鏈，每一條肽鏈各與一個血紅素相連接。分子的外層多為親水性殘基，內(nèi)部主要為疏水性氨基酸殘基。 ?膠原蛋白至少包括四種類型，稱膠原蛋白 I、H、 HI和 IV。 58 肌動蛋白 以兩種形式存在， 球狀肌動蛋白 (G—肌動蛋白 )和 纖維狀肌動蛋白 (F—肌動蛋白 )。這六肽的氨基酸順序為： ? （ GlySerGlyAlaGlyAla） n 55 56 (3) 肌球蛋白和肌動蛋白 肌纖維膜 微管 肌漿 腱 橫小管 57 肌肉的構(gòu)成 ?纖維狀或絲狀結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)： 肌球蛋白和肌動蛋白 。絲心蛋白是典型的反平行式疊片。 ?這是因為 a—角蛋白的 側(cè)鏈 R基一般都比較大，不 適于處在 ?—構(gòu)象狀態(tài) ，此外a—角蛋白中的螺旋多肽鏈間有著很多的二硫鍵交聯(lián)，這些 交聯(lián)鍵 也是當外力解除后使肽鏈恢復原狀 (a—螺旋構(gòu)象 )的重要力量。皮層細胞橫截面直徑約為20?m。 ?a角蛋白主要由 a螺旋構(gòu)象的多肽鏈組成。 46 D3 幾種重要的蛋白質(zhì)類型 D31 纖維狀蛋白 ? 纖維狀蛋白質(zhì) (fibrous protein)廣泛地分布于脊椎和無脊椎動物體內(nèi)，它是動物體的基本支架和外保護成分， 占脊椎動物體內(nèi)蛋白質(zhì)總量的一半成一半以上。 ?脂蛋白：由簡單蛋白與脂類結(jié)合而成。 45 結(jié)合蛋白 ?由簡單蛋白與其它非蛋白成分結(jié)合而成， ?色蛋白：由簡單蛋白與色素物質(zhì)結(jié)合而成。清蛋白易溶于水，球蛋白微溶于水，易溶于稀酸中。 ?纖維狀蛋白質(zhì) ： fibrous protein分子類似纖維或細棒。 G lu C ys G l y G lu C ys G ly S H S S G l u C ys G ly 38 谷胱甘肽的生理功用： ?解毒作用 ：與毒物或藥物結(jié)合 ， 消除其毒性作用； ?參與氧化還原反應 ：作為重要的還原劑 ， 參與體內(nèi)多種氧化還原反應； ?保護巰基酶的活性 ：使巰基酶的活性基團 SH維持還原狀態(tài)； ?維持紅細胞膜結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定 ：消除氧化劑對紅細胞膜結(jié)構(gòu)的破壞作用 。這類多肽通常都具有特殊的生理功能，常稱為活性肽。 33 肽鍵 ?肽鍵中的 CN鍵具有部分雙鍵性質(zhì) ， 不能自由旋轉(zhuǎn) 。 ?多肽鏈具有方向性 ， 頭端為 氨基端 （ N端 ） ， 尾端為 羧基端 （ C端 ） 。 29 30 C C N C C N C C N C C N CC H 2 C H C H 2 C H 2 C H 2C O OO H C O 2 H C H 2C O N H 2O HC H 3H 3 N+O O O OH H H H HH H H HS e r V a l T y r A sp G l nC H 3N 端 C 端肽鍵? 在多肽鏈中，氨基酸殘基按一定的順序排列，這種排列順序稱為氨基酸順序 ? 通常在多肽鏈的一端含有一個游離的 a氨基，稱為氨基端或 N端；在另一端含有一個游離的 a羧基，稱為羧基端或 C端。 一個氨基酸分子的 α羧基與另一個氨基酸分子的 α氨基在適當?shù)臈l件下經(jīng)脫水縮合即生成肽 。 C O OC HH 2 NRPH 1 7 10 凈電荷 +1 0 1 正離子 兩性離子 負離子 等電點 PI 25 ? 當溶液濃度為某一 pH值時 ， 氨基酸分子中所含的 NH3+和 COO數(shù)目正好相等 ， 凈電荷為 0。 OH O H R — CH — C OOH R — CH — C OO R —