引物設(shè)計(jì)實(shí)例分析ppt課件-wenkub.com
2025-04-26 01:58 本頁面
【正文】 實(shí)際上 ， 設(shè)計(jì)引物時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況而定 ， 盡量滿足引物設(shè)計(jì)原則 ， 但與理想情況會有偏差 。 5. 引物自身 引物間 3’ 端的互補(bǔ)、二聚體或發(fā)夾結(jié)構(gòu)也可能導(dǎo)致 PCR反應(yīng)失敗 。引物設(shè)計(jì)實(shí)例分析 引物設(shè)計(jì)基本原則 ? 引物長度（ primer length） ? 產(chǎn)物長度（ product length） ? 序列 Tm值 (melting temperature) ? G+C含量（ position） ? 引物二聚體及發(fā)夾結(jié)構(gòu) （ duplex formation and hairpin） ? 閱讀框 1. 引物的長度 一般為 1830bp，常用的是20bp左右，但不能大于 38bp，因?yàn)檫^長會導(dǎo)致其延伸溫度大于 72℃ ，即 Taq酶的最適溫度 擴(kuò)增片段長度在普通 PCR以 200～ 500為宜；實(shí)時(shí)熒光 PCR則為 50～ 150bp。 引物 3’ 端堿基，最好為 G或 C，形成 GC夾子，提高引發(fā)效率，并提高擴(kuò)增的特異性 任務(wù) 用綠色熒光蛋白 (GFP)標(biāo)記蛋白 NR1 SP NR1 Plasmid 1: Plasmid 2 GFP SP BamHI NR1 Plasmid 1: Plasmid 2 GFP SP BamHI(GGATCC) NR11a GFP 121 ggggctccta gagaacccgg gggcgcttga ccgcgcgcgg gcggcccgcg ggtcgtacat 181 cgcgaggtcg tcgcactcgc gcaacccaga gccaggcccg ctgtgcccgg agctcatgag 241 caccatgcac ctgctgacat tcgccctgct tttttcctgc tccttcgcc c gcgcggatcc 301 cgaccccaag atcgtcaaca tcggcgcggt gctgagcacg cgcaagcatg aacagatgtt 361 ccgcgaggca gtaaaccagg ccaataagcg acacggctct tggaagatac agctcaacgc 421 cacttctgtc acccacaagc ccaacgccat acagatggcc ctgtcagtgt gtgaggacct 481 catctctagc caggtctacg ctatcctagt tagccacccg cctactccca acgaccactt 541 cactcccacc cctgtctcct acacagctgg cttctacaga atccctgtcc tgggactgac 601 tacccgaatg tccatctact ctgacaagag tatccacctg agtttccttc gcacggtgcc 661 gccctactcc
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