微生物實(shí)驗(yàn)論文-wenkub.com
2025-04-01 23:25 本頁(yè)面
【正文】 紫外線照射處理結(jié)果:稀釋度10^310^4菌落數(shù)218復(fù)篩得到產(chǎn)淀粉酶的高產(chǎn)菌株。（在測(cè)量酶活時(shí)由于把寫(xiě)有編號(hào)的試管塞取了下來(lái)，導(dǎo)致編號(hào)順序錯(cuò)誤，以上的編號(hào)為離心管的編號(hào)。瓊脂凝膠電泳結(jié)果：泳動(dòng)較慢，說(shuō)明該菌的DNA分子的分子量較大。計(jì)算其H/C值得表如下：菌落號(hào)513171821水解圈直徑(H)mm菌落直徑(C)mmH/C值得13號(hào)菌株為最佳菌株。（四）觀察誘變效應(yīng)在平板菌類計(jì)數(shù)后，分別向菌落數(shù)在56個(gè)左右的平板內(nèi)加入碘液，分別測(cè)量透明圈直徑與菌落直徑并計(jì)算比值(H/C值)，與對(duì)照平板進(jìn)行比較（紫外照射和對(duì)照組隨機(jī)選出6個(gè)算平均值）。 （三）計(jì)算成活率和致死率1. 存活率：將培養(yǎng)48 h 后的平板取出進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。(3)稀釋菌液：在超凈臺(tái)內(nèi)，將照射后的菌懸液用無(wú)菌水按10倍稀釋法依次稀釋成10^110^5（dorf管中稀釋）。(二) 誘變：取出培養(yǎng)約24h 的搖瓶，分別取1ml菌懸液（吸取前三角瓶要搖勻）于2個(gè)離心管中，5000 r/min離心5min，棄去上清液，將菌體用無(wú)菌生理鹽水洗滌2次。計(jì)算各樣品吸光度大小酶活力。(三) 菌體生長(zhǎng)量的測(cè)定將培養(yǎng)24h后液體搖瓶培養(yǎng)物分別取出2mL于試管中，加入8mL蒸餾水，進(jìn)行5倍稀釋。從Genebank 中選擇近與待測(cè)菌目的基因序列同源性最高的已知分類的菌株的16SrRNA基因序列, 初步確定待測(cè)菌的分類位置。（三）瓊脂糖凝膠電泳：%瓊脂糖溶液20mL，用1TAE電泳緩沖液做溶劑，加熱溶解，稍冷后，加入模具中，插入梳子，待膠凝固； ：PCR反應(yīng)結(jié)束后，取出PCR管，吸取5 μl與1μl 6樣品Buffer混合后全部點(diǎn)入浸于TAE電泳緩沖液中的瓊脂糖凝膠的樣品孔中； ：100V電泳20min； ：將凝膠置于樣品染料溴化乙錠中染色；10min，然后將凝膠置于紫外燈下進(jìn)行檢測(cè)，當(dāng)在凝膠上出現(xiàn)預(yù)期大小的DNA條帶（），則認(rèn)為是PCR陽(yáng)性，這時(shí)將與此電泳樣品對(duì)應(yīng)的PCR反應(yīng)管放置冰箱短期保存。 μl rTaq（2U/μl） 反應(yīng)體系：在一個(gè)PCR管中用微量移液槍依次加入列物質(zhì)： Taq
化學(xué)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1