【正文】 敏感度即指信號與噪聲的比值（信噪比）等于 2 時，在單位時間內進入檢測器的溶質的濃度或質量； D 線性范圍：在進行定量分析時，希望檢測器有寬的線性范圍，以便在一次分析中可同時對主要組分和痕量組分同時進行檢測； E 檢測器的池體積：它應小于最早流出的死時間色譜峰的洗脫體積的 1/10，否則會產生嚴重的柱外譜帶擴展。 ？ A 噪聲：通常噪聲是指由儀器的電氣元件、溫度波動、電壓的線性脈沖以及其他非溶質作用產生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動； B 基線飄移：漂移是基線的一種向上或向下的緩慢移動，可在較長時間（ ~1h）內觀察到。 C 將管子完全插入開口端，直至其與開口端的末端相碰為止?？煽紤]采用專用柱用于特殊的方法，不用時將柱折下來，注滿適當?shù)娜軇┗蛄鲃酉啵芊獗９?，不再作其它的分析。一根很好的專用柱用于另一液相色譜系統(tǒng)引起塔板數(shù)降低，說明新系統(tǒng)有很大的柱外峰寬效應。增加流動相的強度，減少樣品溶液的強度，在離子對色譜中增加離子強度，可以克服前延峰的效應。 ？ 因柱溫問題很易引起前延峰，有些樣品在常溫下分離可見前延峰，提高溫度后前延峰的現(xiàn)象消失。 ？ 在良好的色譜分離中，樣品分子是以單一的保留過程被保留。 “胖”峰和平頭峰？怎樣避免？ 用比流動相強度大的大體積樣品進樣，通常會損害色譜圖的質量，而出現(xiàn)“胖”峰和平頭峰。 ？ 評介一根色譜柱的基本指標是：塔板數(shù)、峰不對稱因子、柱壓降、適用范圍和鍵合相濃度以及峰容量。 ？ 在分析多組分樣品時，僅改變流動相的強度（組成百分比）而不改變其組成，一般僅僅改變所有組分的保留時間，不會發(fā)生峰位的重排。 （一）保留時 間變化 ①柱溫變化－－柱恒溫 ②等度與梯度間未能充分平衡－－至少用 10 倍柱體積的流動相平衡柱 ③緩沖液容量不夠－－用 25mmol/L 的緩沖液 ④柱污染－－每天沖洗柱 ⑤柱內條件變化－－穩(wěn)定進樣條件 ,調節(jié)流動相 ⑥柱快達到壽命－－采用保護柱 （二）保留時間縮短 ①流速增加－－檢查泵 ,重新設定流速 ②樣品超載－－降低樣品量 ③鍵合相流失－－流動相 PH 值保持在 3~。此現(xiàn)象是由流動相不浸潤固定相表面而致。反沖色譜柱僅是不得已時采用的辦法。通常使用在給定色譜條件下的強溶劑，但并非所有污染物都可以在流動相中溶解。通常樣品中的強保留組分具有較高的分子量，在此情況下，保留時間漂移的同時或其后會有反壓的增加。通常通過實驗可判斷污染的來源。其他硅膠基質鍵合相在水溶液環(huán)境中也可以發(fā)生水解，如氨基鍵合相等。例如，硅膠基質在 pH4 時水解穩(wěn)定性最好。 流動相污染也可能是原因之一。如，保留時間的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留時間的無規(guī)律波動。 ③選擇互溶的流動相 ④斷開檢測器和記錄儀的電源，檢查并更正。） ⑧檢測器燈能量不足 ⑨色譜柱填料流失或阻塞 ⑩流動相混合不均勻或混合器工作不正常 解決方法 ①檢查接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。 ③用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑 ④減少差異或加上熱交換器 ⑤斷開 LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。 解決方法 ①流動相脫氣。重選檢測波長。使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。 ⑥用中等強度的溶劑進行沖洗，更改流動相時，在分析前用 1020倍體積的新流動相對柱子進行沖洗。（不要用鹽酸） ④取出阻塞物或更換管子。 解決方法 ①控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器 ②使用 HPLC 級的溶劑，高純度的鹽和添 加劑。（高壓造成流通池窗口破裂，產生噪音基線） ⑤流動相配比不當或流速變化 ⑥柱平衡慢，特別是流動相發(fā)生變化時 ⑦流動相污染、變質或由低品質溶劑配成 ⑧樣品中有強保留的物質（高 K’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。 結論 我們發(fā)現(xiàn)柱溫在液相色譜梯度洗脫過程中扮演了一個重要的角色，首先，提高柱溫可以縮短保留時間，其次，我們看到柱溫還可以影響選擇性，最后，溫度的不平衡會導致峰扭曲變形。雖然使用預熱器來改善峰形是一個很著名的結論（見參考文獻 3）但峰變形的原因仍然很復雜。 為什么會看到這些峰變形了呢？這很容易從峰展寬的角度來解釋。比較圖 35 你會發(fā)現(xiàn)這個問題很富戲劇性。我們用 1 米長， 內徑的不銹鋼管作為預熱器，把這個不銹鋼管盤成直徑大約10cm 的平面緊貼在柱溫箱里的預熱器上，再讓流路垂直以便預熱器能夠位于自動進樣器和柱子之間，這樣，涼的溶劑從自動進樣器里出來到柱子之前經過這個預熱盤升高了溫度。但是，如果柱子是熱的，系 統(tǒng)的其他部分和溶劑是室溫，柱頭將比柱尾涼。 正如柱子不能完全平衡將導致保留時間的重現(xiàn)性差一樣，柱溫不平衡也會導致不理想的后果，這個問題在峰寬上的影響尤其明顯。 溫度平衡 我們知道，為了保證分離的重現(xiàn)性，色譜柱在梯度 洗脫狀態(tài)下的必須有平衡過程。第三種設計是把色譜柱浸在液體中（比如水浴中），這在實驗室中很容易搭建，但通常這種設計也并不比其他設計省力。圖 1 中的樣品在 35℃時可以達到最佳選擇性（峰之間的距離最大），而圖 2 中的樣品在 38℃時可達到最佳選擇性（這兩份樣品的最優(yōu)溫度近似純屬巧合）。例如，在圖 2 中當溫度升至 77℃以上時，峰 3 和峰 4 將會合并。 在圖 2 的梯度洗脫示例中，也有選擇性變化。 選擇性的變化 比較圖 1和圖 2會發(fā)現(xiàn)溫度變化能引起選擇性顯著變化。圖 1 中， 20℃的溫度變化引起保留因子的變化大約為兩倍，然而在圖 2 中， 40℃的變化使保留改變了約 20%。當色譜柱正對著空調的送風口時，雖然整個實驗室的溫度非常穩(wěn)定，但色譜系統(tǒng)的溫度就會不斷的變化。我們發(fā)現(xiàn)當溫度升高時所有的色譜峰都前移了，等度洗脫時一般溫度每升高一攝氏度保留時間會縮短13%，在圖 1 中，保留時間變化率約為 2%/℃。但大多數(shù)的工作環(huán)境溫度是不斷變化的，因此若想將在某實驗室開發(fā)的一種液相色譜方法應用到其 他實驗室的話，溫度的差別就會引起較復雜的問題。 使用 PEEK 接頭時則無需擔心接頭耐溶劑性能，因為接頭幾乎或很少與溶劑直接接觸。 使用此類材料的管路需要注意的是