抗體工程制藥ppt課件-wenkub.com
2025-01-02 10:53 本頁面
【正文】 所以雙特異性抗體與既往腫瘤免疫治療相比 ,除了能 特異性識別腫瘤細胞 外 ,還能 將循環(huán)血液中的免疫效應(yīng)細胞再導(dǎo)向至腫瘤細胞處 ,從而使效應(yīng)細胞的抗腫瘤活性增強 ,發(fā)揮免疫導(dǎo)向作用 ,這是腫瘤治療的新突破。 即能 結(jié)合靶腫瘤細胞 又能 結(jié)合高細胞毒性的效應(yīng)細胞 ,將效應(yīng)細胞富集在腫瘤周圍 ,而且可以模擬天然配體的作用 ,與細胞表面引發(fā)分子結(jié)合 ,激活效應(yīng)細胞 ,實現(xiàn)對腫瘤細胞的殺傷和裂解。乃是一種小分子的雙價雙特異性抗體片段。 ③ 不含 Fc，沒有 Fc帶來的效應(yīng) 。 單域抗體盡管親和力有所降低，但仍保持著原單抗的特異性。連接肽 的長度在 1015個氨基酸左右，不宜太長或太短，它應(yīng)具有柔軟性，側(cè)鏈少，抗原性弱等特點。 把 Fab與細菌的前導(dǎo)肽相連，在前導(dǎo)肽的作用下Fab進入質(zhì)周腔，裝配折疊后，它具有結(jié)合抗原的活性。 研究表明，在構(gòu)建改形抗體時，簡單地進行CDR替換并不能保證抗體具有好的親和力，因此在構(gòu)建時還必需包括 對影響抗原結(jié)合位點的空間結(jié)構(gòu)的框架序列 進行操作。（美國正式上市的 11種治療性單抗中多數(shù)是改型抗體） 人源化抗體的構(gòu)建可用 全合成法 或 定點突變法 。 特點： 減少了鼠源性抗體的免疫原性 保留了親本抗體特異性結(jié)合抗原的能力 （ 1）嵌合抗體 盡管嵌合抗體的免疫原性已降低很多，但有時它仍可能引發(fā)較強的免疫反應(yīng)。 基因工程抗體 基因工程抗體 (Geic engineering antibody) 指用基因工程方法，對抗體的基因進行重組、缺失、修飾改型等，構(gòu)建載體，在受體細胞中表達，獲得抗體。m/ml的抗體。 （ 1）體外培養(yǎng)法： ?基本程序： 接種前 1~2周，小鼠腹腔注射 Pristane（降植烷）或用液體石蠟，然后注射 1*106雜交瘤細胞， 7~12d便有腹水生成，待生成腹水后再提取，離心去細胞沉淀，取上清液凍存。此法雖可減少污染，但產(chǎn)量不高。g/ml以上，給純化帶來困難。 ? 雜交瘤細胞的克隆化 ?克隆化： 使單個細胞通過無性繁殖而獲得該細胞群體的整個培養(yǎng)過程，這種群體細胞的生物學(xué)特性和功能完全相同 ?原因： 篩選出的陽性克隆中，大多數(shù)情況下產(chǎn)生抗體的雜交瘤集落不是來自單個細胞，其中可能混有不分泌抗體的細胞，這種細胞比分泌抗體的細胞生長快，容易占據(jù)優(yōu)勢；此外，剛?cè)诤系碾s交瘤細胞不穩(wěn)定，染色體易丟失 ?一般融合后的雜交瘤細胞要經(jīng)過三次左右的的克隆化，才能達到 100%孔內(nèi)均為抗體陽性細胞克隆 ? 克隆化方法 —— 有限稀釋法 ?將雜交瘤細胞懸液稀釋至一定濃度，加入到 96孔培養(yǎng)板中，使每個孔中的細胞盡可能為單細胞，經(jīng)過一段時間培養(yǎng)最終形成細胞克隆 ?可在光學(xué)顯微鏡下觀察到細胞分裂，直至細胞集落形成 ? 克隆化方法 —— 軟瓊脂培養(yǎng)法 ?將一定濃度的待克隆細胞與 2%瓊脂糖培養(yǎng)液混合，鋪于底部含有 1%瓊脂糖培養(yǎng)液平皿的上部，待單細胞集落生長至 1～ 2 mm時，用毛細管吸取單集落，轉(zhuǎn)移到細胞培養(yǎng)板中培養(yǎng) ?工作效率高，一次克隆化即可獲得穩(wěn)定分泌抗體的雜交瘤細胞，但對操作熟練程度要求高 ? 雜交瘤細胞庫的建立 ?第一次融合的細胞在每次克隆過程中，均應(yīng)對檢測陽性的細胞擴大培養(yǎng)，凍存一定量的細胞 ?經(jīng) 3～ 4次克隆， 100%雜交瘤細胞孔為分泌抗體陽性細胞時，擴大培養(yǎng)，凍存較大量的細胞，建立較完整的原始細胞庫 ?原始細胞庫中的細胞應(yīng)包括原始融合細胞、每次克隆的細胞及建株的細胞，且建株細胞的溯源應(yīng)明確 ?原始細胞庫中的建株細胞經(jīng)擴大培養(yǎng)，再建立一個工作細胞庫，用于日常研究和生產(chǎn) ?可獲得 10181。相對分子質(zhì)量在 400~6000，濃度在 10%~60%范圍內(nèi)的 PEG都能使細胞發(fā)生融合。? MOPC11X456TG X45 BALB/c 小鼠 6TG Ig?2 b NS1 BALB/c 小鼠 8Ag ? (非分泌型 ) BALB/c 小鼠 8Ag — SP2/0Ag14 SP2/0 BALB/c 小鼠 8Ag — FastZero FO BALB/c 小鼠 8Ag — Y3Ag1,2,3 Y3 Lou 大鼠 8Ag ? 鏈 YB2 (Lou AO)F1 8Ag — 8Ag：
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