固定化酶和細(xì)胞ppt課件-wenkub.com
2024-12-05 03:49 本頁面
【正文】 制成酶標(biāo)抗體（或酶標(biāo)抗原 ）； (2)將酶標(biāo)抗體（或酶標(biāo)抗原）與樣品中的待測抗原（或抗體）混合，通過免疫反應(yīng)二者即可特異性地結(jié)合在一起，形成酶－抗體－抗原復(fù)合物。 ?肉鮮度傳感器 ? 肉類在腐敗過程中會產(chǎn)生各種胺類，故胺類測定能反映肉類的新鮮程度。 將這三個步驟的三種酶（ 5’－核苷酸酶、核苷磷酸化酶、黃嘌呤氧化酶）固定在氧電極上，制成魚鮮度測定儀。 ?醫(yī)療方面 葡萄糖傳感器和血糖測定儀 用葡萄糖氧化酶（ glucose oxidase,GOD）制成葡萄糖傳感器，可測定血液中葡萄糖濃度。 換能器 (Transducer) 將識別元件上進(jìn)行的生化反應(yīng)中消耗或生成的化學(xué)物質(zhì)，或產(chǎn)生的光或熱等轉(zhuǎn)換為電信號，并呈現(xiàn)一定的比例關(guān)系 。 葡萄糖酶電極 酶電極示意圖 223。即：用固定化脲酶和微膠囊活性炭組成人工腎。 二、固定化酶在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用 1. 消血栓： ? 纖溶酶是異源蛋白質(zhì)，在人體內(nèi)引起免疫反應(yīng)，無法長期使用。 二、固定化細(xì)胞的性質(zhì) (一 )酶 (細(xì)胞 )的活力 固定化酶通常呈顆粒狀，一般用于測定自然酶活力的方法改進(jìn)后才能用于測定固定化酶。 本章 目錄 與固定化酶相比，固定化細(xì)胞的情況比較復(fù)雜。這一點(diǎn)在使用固定化酶時，必須引起注意。 （六）酶的作用專一性 固定化酶的特性： ? 將酶或含酶菌體固定化制成固定化酶或固定化菌體以后，由于受到載體等的影響，酶的特性可能會有些變化。 固定化載體與底物電荷相反 ,固定化酶的表觀 Km值降低。 多數(shù)酶固定化后熱穩(wěn)定性上升 ， 最適溫度也上升 （ 有例外 ） 。 ③固定化部分阻擋了外界不利因素對酶 的侵襲。 注意：一般要加滲透壓穩(wěn)定劑，以防止原生質(zhì)體破裂。 2)吸附法 3)包埋法 2. 固定化方法 例如：葡萄糖異構(gòu)酶 (白色鏈霉菌 )，是一種胞內(nèi)酶。 包埋法是目前應(yīng)用最多的一種較理想的方法，與其它固定化方法相比： ?優(yōu)點(diǎn)： 不與酶蛋白氨基酸殘基反應(yīng)，很少改變酶的高級結(jié)構(gòu)，酶活回收率高。 半透膜孔徑 酶分子孔徑，小于半透膜孔徑的小分子底物和產(chǎn)物可以自由進(jìn)出，被稱為 “ 人工細(xì)胞 ” 。分為： 網(wǎng)格型： 將酶包埋在高分子凝膠細(xì)微網(wǎng)格中。其中應(yīng)用最廣泛的是戊二醛。 交聯(lián)法制備的固定化酶或固定化菌體 結(jié)合牢固 ，可以長時間使用。 戊二醛有兩個醛基，這兩個醛基都可與酶或蛋白質(zhì)的游離氨基反應(yīng)，形成席夫（ Schiff）堿，而使酶或菌體蛋白交聯(lián)，制成固定化酶或固定化菌體。 共價結(jié)合法（ covalent binding or covalent coupling） 1）載體：親水載體優(yōu)于疏水載體 如 :天然高分子衍生物 : 纖維素 葡聚糖凝膠 親和性好 ， 機(jī)械性能差 瓊脂糖 合成聚合物： 聚丙烯酰胺 聚苯乙烯 機(jī)械性能好 ， 但有疏水結(jié)構(gòu) 尼龍 使載體活化的方法很多，主要的有：重氮化法、疊氮法、溴化氰法、烷基化法等。共價鍵結(jié)合法所采用的載體主要有： 纖維素 、 瓊脂糖凝膠 、 葡聚糖凝膠 、 甲殼質(zhì) 、 氨基酸共聚物 、 甲基丙稀醇共聚物 等。 根據(jù)酶與載體結(jié)合的化學(xué)鍵不同，可分為： 離子鍵結(jié)合法 ：通過離子鍵使酶與載體結(jié)合的固定化方法稱為離子鍵結(jié)合法。 由于靠物理吸附作用， 結(jié)合力較弱 ，酶與載體結(jié)合不牢固而容易脫落，所以使用受到一定的限制。 ? 功能基團(tuán) ：如游離的氨基、羧基、半胱氨酸的巰基、組氨酸的咪唑基、酪氨酸的酚基、絲氨酸和蘇氨酸的羥基等，當(dāng)這些功能基團(tuán)位于酶的活性中心時，要求不參與酶的固定化結(jié)合 ? 酶的高級結(jié)構(gòu) ：要避免用高溫、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿等處理，而且有機(jī)溶劑、高濃度的鹽也會使酶變性、失活，因此，操作應(yīng)盡量在非常溫和的條件下進(jìn)行。 1976年，法國首次用固定化酵母細(xì)胞生產(chǎn)啤酒和酒精， 1978年日本用固定化枯草桿菌生產(chǎn)淀粉酶，開始了用固定化細(xì)胞生產(chǎn)酶的先例。 ? 在 1971年召開的第一次國際酶工程學(xué)術(shù)會議上，確定固定化酶的統(tǒng)一英文名稱為 Immobilized enzyme。 。即要
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