【正文】 上一級(jí)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員。 檢查樣品的狀況，記錄血液樣品有無(wú)嚴(yán)重溶血、微生物污染、血脂過(guò)多以及黃疸等情況。記錄干血斑和尿液樣品包裝是否完整，如果污染過(guò)重或者不符合接收要求，應(yīng)將樣品安全廢棄。并立即將樣品情況通知送樣人，要求重新采集樣品。 接收樣品時(shí)應(yīng)填寫(xiě)樣品接收單。 12 全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 第二章 HIV抗體檢測(cè) 1 范圍 本章規(guī)定了HIV抗體的檢測(cè)方法、結(jié)果報(bào)告及質(zhì)量控制。適用于各級(jí)各類(lèi)醫(yī)療、疾病預(yù)防控制、檢驗(yàn)檢疫、采供血及衛(wèi)生保健機(jī)構(gòu)?？勺鳛閷?duì)HIV感染者診斷和監(jiān)測(cè)的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。 2 規(guī)范性文件引用 《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)》（中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，WS293有效版本）。 Consolidated Guidelines on HIV Testing Services. WHO July 2015 Statement from the Surveillance and Survey Working Group and the Laboratory Working Group to the Office of the Global AIDS . Guidelines for using HIV testing technologies in surveillance. UNAIDS/. 《艾滋病病毒抗體快速檢測(cè)技術(shù)手冊(cè)》（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心，2011年版。 3 HIV抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求 應(yīng)符合國(guó)家對(duì)實(shí)驗(yàn)室生物安全的有關(guān)要求。 13 全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制按本規(guī)范相關(guān)章節(jié)規(guī)定執(zhí)行。 4 HIV抗體檢測(cè)的目的和要點(diǎn) HIV抗體檢測(cè)的目的 HIV抗體檢測(cè)可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測(cè)等。 以診斷為目的的檢測(cè)是為了確定個(gè)體HIV感染狀況，包括臨床檢測(cè)、自愿咨詢檢測(cè)、根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。 以血液篩查為目的的檢測(cè)是為了防止輸血傳播HIV，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。 以監(jiān)測(cè)為目的的檢測(cè)是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢(shì)，包括各類(lèi)高危人群、重點(diǎn)人群和一般人群。 HIV抗體檢測(cè)的要點(diǎn) 根據(jù)目的選擇檢測(cè)方法及檢測(cè)策略。 嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）。 結(jié)果判定以試劑盒說(shuō)明書(shū)為標(biāo)準(zhǔn)。 篩查試驗(yàn)有反應(yīng)，須作補(bǔ)充試驗(yàn)。 補(bǔ)充試驗(yàn)是通過(guò)檢測(cè)樣本中是否存在艾滋病病毒抗體、抗原或者核酸而確定艾滋病病毒感染的檢測(cè)方法。補(bǔ)充試驗(yàn)包括抗體確證試驗(yàn)（免疫印跡試驗(yàn)，條帶/線性免疫試驗(yàn)，特定條件*下的替代檢測(cè)，免疫層析或免疫滲濾試驗(yàn)）和核酸試驗(yàn)（核酸定性和核酸定量試驗(yàn)）。替代檢測(cè)包括三種酶聯(lián)免疫試驗(yàn)、三種快速試驗(yàn)或酶聯(lián)免疫加快速試驗(yàn)* * 特定條件：高流行地區(qū)（流行率大于5%）、高危人群（如男男同性戀，吸毒人群）、三種試劑均經(jīng)過(guò)使用地區(qū)中心實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)。 篩查試驗(yàn)無(wú)反應(yīng)，不應(yīng)做補(bǔ)充試驗(yàn)。 14 全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 對(duì)篩查及補(bǔ)充試驗(yàn)對(duì)象均應(yīng)做好咨詢工作。 5 常規(guī)HIV抗體檢測(cè)方法 試劑和樣品 必須是經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊(cè)批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。推薦使用臨床質(zhì)量評(píng)估敏感性和特異性高的方法及試劑。 樣品可采用血清、血漿、全血、濾紙干血斑、口腔黏膜滲出液和尿液。 篩查方法 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 這類(lèi)試驗(yàn)可使用血液（包含血清、血漿和濾紙干血斑）、尿液樣品，ELISA多為HIV抗體檢測(cè)試劑。HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑可同時(shí)檢測(cè)血液中HIV1P24抗原和HIV1/2抗體。HIV抗原/抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶標(biāo)記的HIV抗原/抗體，加底物顯色，用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果。有效試驗(yàn)的陰性和陽(yáng)性對(duì)照必須符合試劑盒規(guī)定。 化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)（CIA/IFA） 這類(lèi)試驗(yàn)采用發(fā)光或熒光底物，可使用血液(包含血清和血漿)、尿液樣品，既可檢測(cè)抗體，也可聯(lián)合檢測(cè)抗原抗體。HIV抗原/抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶或熒光標(biāo)記的HIV抗原/抗體，加發(fā)光或熒光底物，用發(fā)光或熒光儀測(cè)定結(jié)果。有效試驗(yàn)的陰性和陽(yáng)性對(duì)照必須符合試劑盒規(guī)定。 快速檢測(cè)（RT）及其它試驗(yàn) 15 全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 這類(lèi)試驗(yàn)可使用血液、口腔黏膜滲出液，操作簡(jiǎn)便快速，適用于應(yīng)急檢測(cè)、門(mén)診急診檢測(cè)、VCT及檢測(cè)點(diǎn)等。一般可在10～30分鐘內(nèi)得出結(jié)果。 明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）：是HIV抗體檢測(cè)的一種簡(jiǎn)便方法。將HIV抗原致敏的明膠顆粒，與待檢樣品作用。當(dāng)待檢樣品含有HIV抗體時(shí)，明膠顆粒與抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，根據(jù)凝集情況判讀結(jié)果。PA試劑有兩種:同時(shí)檢測(cè)HIV1和HIV2抗體以及分別檢測(cè)HIV1和HIV2抗體。有效試驗(yàn)的陰性和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)控，需符合試劑盒的規(guī)定。 免疫滲濾試驗(yàn)：斑點(diǎn)ELISA和斑點(diǎn)免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗(yàn)：均以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原點(diǎn)狀或線狀固定在膜上，加待檢樣品，利用微孔濾膜的可濾過(guò)性，使抗原抗體反應(yīng)。陽(yáng)性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點(diǎn)或條帶。反應(yīng)時(shí)間在10分鐘以內(nèi)。有效試驗(yàn)的質(zhì)控點(diǎn)必須顯色。 免疫層析試驗(yàn)：以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原線狀固定在膜上，待檢樣品沿著固相載體遷移，陽(yáng)性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色條帶。有效試驗(yàn)的質(zhì)控帶必須顯色。反應(yīng)時(shí)間在30分鐘以內(nèi)。 抗體確證試驗(yàn) 免疫印跡試驗(yàn)（WB） WB可使用血清、血漿和濾紙干血斑。WB采用間接法檢測(cè)樣品中的抗HIV1/HIV2特異性抗體。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳把分子量大小不等的HIV1蛋白分離開(kāi)來(lái)，然后再把這些分離的不同蛋白帶轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上（或PVDF膜）。將此膜切割成條狀，每一膜條上均含有經(jīng)電泳分離 16 全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 過(guò)的HIV抗原。待測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，加至硝酸纖維素膜上，恒溫震蕩，使其充分接觸反應(yīng)，血清中若含有HIV抗體，就會(huì)與膜條上抗原帶相結(jié)合。加入抗人IgG酶結(jié)合物和底物后，根據(jù)出現(xiàn)條帶情況, 按照試劑盒說(shuō)明書(shū)判定標(biāo)準(zhǔn)，判斷待測(cè)樣品為陽(yáng)性、陰性或不確定。條帶/線性免疫試驗(yàn)（RIBA/LIA） RIBA/LIA采用間接法檢測(cè)樣品中的抗HIV1/HIV2特異性抗體。試劑盒的膜條上包被有HIV1/HIV2不同的重組抗原片段，加入待測(cè)樣品后，其中的相應(yīng)抗體與抗原發(fā)生特異性的免疫反應(yīng)；隨后加入抗人IgG（堿性磷酸酶標(biāo)記）與HIV特異性IgG抗體相結(jié)合；加入顯色底物后，在堿性磷酸酶的催化下，特異性抗體的結(jié)合部位出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的條帶, 按照試劑盒說(shuō)明書(shū)判定標(biāo)準(zhǔn)，判斷待測(cè)樣品為陽(yáng)性、陰性或不確定。.3 其他方法： 可用于確證的特定條件下的三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗(yàn)或酶聯(lián)加快速試驗(yàn)，免疫層析和免疫滲濾試驗(yàn)。 6 結(jié)果報(bào)告 篩查報(bào)告 HIV抗體篩查試驗(yàn)報(bào)告使用附表1（HIV抗體篩查檢測(cè)報(bào)告）。篩查試驗(yàn)無(wú)反應(yīng)報(bào)告為“HIV抗體陰性”；有反應(yīng)必須進(jìn)行復(fù)檢，復(fù)檢兩次檢測(cè)均無(wú)反應(yīng)報(bào)告為“HIV抗體陰性”，復(fù)檢檢測(cè)均有反應(yīng)或一個(gè)有反應(yīng)一個(gè)無(wú)反應(yīng)需進(jìn)行“補(bǔ)充試驗(yàn)”；報(bào)告為“HIV感染待確定”，不能出具陽(yáng)性報(bào)告。 17 全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 HIV抗體篩查報(bào)告需由一名檢驗(yàn)人員和一名審核者簽字。 確證報(bào)告 WB及 RIBA/LIA報(bào)告 HIV抗體WB及 RIBA/LIA試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告使用附表2（HIV抗體確證檢測(cè)報(bào)告）。 （1）符合HIV1抗體陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV1抗體陽(yáng)性”，并按規(guī)定做好檢測(cè)后咨詢和疫情報(bào)告。符合HIV2抗體陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV2抗體陽(yáng)性”，并按規(guī)定做好檢測(cè)后咨詢和疫情報(bào)告。 （2）符合HIV抗體陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV抗體陰性”。如疑似“窗口期”感染，建議進(jìn)一步做HIV核酸檢測(cè)或24周后隨訪，盡早明確診斷。 （3）符合HIV抗體不確定判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV抗體不確定”，在備注中應(yīng)注明“24周后復(fù)檢”或盡快做核酸檢測(cè)。 （4） HIV抗體確證檢測(cè)報(bào)告應(yīng)在收到樣品后的7個(gè)工作日內(nèi)發(fā)出。 特定條件的用于確證的三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗(yàn)或酶聯(lián)加快速試驗(yàn)報(bào)告。見(jiàn)附表4。 7 質(zhì)量控制 酶免或發(fā)光法抗體檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)量控制 試劑盒內(nèi)部對(duì)照 試劑盒內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控品即為試劑盒內(nèi)提供的陽(yáng)性和陰性對(duì)照。試劑盒內(nèi)部對(duì)照用于判斷每次實(shí)驗(yàn)的有效性，不能作為室內(nèi)質(zhì)控品使用。每 18 全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 一次檢測(cè)臨床樣品時(shí)，必須有試劑盒內(nèi)部對(duì)照，而且只能在同批號(hào)的試劑盒中使用。如內(nèi)部對(duì)照結(jié)果無(wú)效，必須重新試驗(yàn)。 室內(nèi)質(zhì)控品 為非試劑盒組份的外部質(zhì)控品，是為了監(jiān)控檢測(cè)的重復(fù)性而設(shè)置的，質(zhì)控品定值必須為弱陽(yáng)性。外部質(zhì)控品的作用是判斷該批臨床樣品檢測(cè)的可信性。因此，每次實(shí)驗(yàn)必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，出現(xiàn)失控時(shí)，必須重新試驗(yàn)。室內(nèi)質(zhì)控品可以購(gòu)買(mǎi)或?qū)嶒?yàn)室自行制備。 質(zhì)控品應(yīng)穩(wěn)定、無(wú)菌、且不含有影響試劑反應(yīng)的防腐劑。 LeveyJennings質(zhì)控圖 質(zhì)控圖參數(shù) 外部質(zhì)控品的均值和標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)建立在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用方法對(duì)外部質(zhì)控品重復(fù)測(cè)定的基礎(chǔ)上。一般采用在不同批次檢測(cè)取得至少20個(gè)數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測(cè)，也至少做5個(gè)批次的檢測(cè)，每個(gè)批次中不少于4個(gè)質(zhì)控血清測(cè)定結(jié)果，以建立一個(gè)臨時(shí)性的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，當(dāng)達(dá)到20批次數(shù)據(jù)后，替代臨時(shí)性的均值和標(biāo)準(zhǔn)差。 （1）算術(shù)平均值（x）：代表一組質(zhì)控品測(cè)定S/CO值的均值。為了統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性意義，應(yīng)該采用至少20次（天）測(cè)得的外部對(duì)照質(zhì)控品的S/CO值計(jì)算平均值。 （2）標(biāo)準(zhǔn)差（s）：是描述樣品與均數(shù)之間離散程度的一個(gè)指標(biāo)，是與質(zhì)控品S/CO值均值有關(guān)的預(yù)期范圍。一組S/CO值的標(biāo)準(zhǔn)差以s表示。 （3）變異系數(shù)（cv）：是反映各次S/CO值相對(duì)于均值離散程度的一個(gè)指標(biāo)，可以用來(lái)衡量檢測(cè)的重復(fù)性或精密度。 19 全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 （4）控制限：由實(shí)驗(yàn)室根據(jù)對(duì)外部質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果的均值和標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)確定。例如，按照12S質(zhì)控規(guī)則，控制限為外部質(zhì)控品S/CO均值加減2 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差；按照13S質(zhì)控規(guī)則，控制限為外部質(zhì)控品S/CO均值加減3個(gè)標(biāo) 準(zhǔn)差。 質(zhì)控規(guī)則 實(shí)驗(yàn)室在報(bào)告結(jié)果之前必須評(píng)價(jià)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，可通過(guò)圖形記錄的檢查或由計(jì)算機(jī)審核結(jié)果來(lái)決定。目前有許多質(zhì)控規(guī)則，常用的是12S和13S規(guī)則。 （1）告警（12S）：當(dāng)外部質(zhì)控品的S/CO值超出x+2s范圍時(shí)，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測(cè)需要進(jìn)一步觀察。若將12S做失控標(biāo)準(zhǔn)，有較高的假失控概率，所以一般不采用。 （2）失控（13S）：當(dāng)外部質(zhì)控品的S/CO值超出x+3s范圍時(shí)，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差或外部質(zhì)控品 穩(wěn)定性下降所致。 質(zhì)控圖的分析及失控處理 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理的程序。 當(dāng)出現(xiàn)失控時(shí)， 必須找出發(fā)生問(wèn)題的原因，找出解除問(wèn)題的方法，并消除原因。 室內(nèi)質(zhì)控其他方式—“即刻法”質(zhì)控 “即刻法”質(zhì)控方法是在對(duì)同一批外部質(zhì)控品連續(xù)測(cè)定3次后，即可對(duì)第3次以后的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。具體計(jì)算方法如下： 將質(zhì)控品的測(cè)定值從小到大排列：x1，x2，x3??xn（x1為最小值，xn為最大值）。 20 全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 計(jì)算x和s。 計(jì)算SI上限值 和SI下限值。 X最大值x SI上限= S xX 最小值 S SI下限= 將SI上限、SI下限與SI值表（表1）中的數(shù)字比較。 表1 SI值表 （1）當(dāng)SI 上限 和SI 下限 amp。lt。n2s時(shí)表示處于控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)測(cè)定。 繼續(xù)重復(fù)以上各項(xiàng)計(jì)算。 21 全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 （2）當(dāng)SI上限和SI下限有一值處于n2s～n3s值之間時(shí)說(shuō)明該值在2s～3s 范圍，處于“告警”狀態(tài)。 （3）當(dāng)SI 屬“失控”。 “即刻法”只能在前20次內(nèi)使用，超出即可采用LJ質(zhì)控圖方法。 快速法抗體檢測(cè)質(zhì)控 試劑內(nèi)對(duì)照 在質(zhì)控窗口內(nèi)出現(xiàn)質(zhì)控帶，該質(zhì)控帶是試劑自帶的內(nèi)部過(guò)程質(zhì)控，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作全部完成并且實(shí)驗(yàn)所用材料處于工作狀態(tài)。清潔的檢測(cè)區(qū)背景是內(nèi)部陰性過(guò)程質(zhì)控。如實(shí)驗(yàn)完成后未呈現(xiàn)紅色質(zhì)控帶，說(shuō)明試劑盒內(nèi)質(zhì)控?zé)o效，該試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，樣品須重檢。 室內(nèi)質(zhì)控品對(duì)照 外部質(zhì)控品 可采用商用質(zhì)控品或自制質(zhì)控品。 質(zhì)控品應(yīng)包含抗體陽(yáng)性樣品和陰性樣品。自制質(zhì)控品可使用本室保留的陽(yáng)性樣品， 。下列情況需做質(zhì)量控制：更換試劑批號(hào)；更換檢測(cè)人員；更換包裝；更換試劑廠家。除此之外，建議每個(gè)檢測(cè)日檢測(cè)一次陽(yáng)性和陰性質(zhì)控品；如果日檢測(cè)量大于50份樣品，至少應(yīng)作2次質(zhì)控。 出現(xiàn)以下問(wèn)題，提示存在質(zhì)量隱患，應(yīng)引起重視：運(yùn)輸包裝、內(nèi)盒或試劑盒的物理?yè)p傷；在單包裝內(nèi)存在混雜物質(zhì)；標(biāo)簽出現(xiàn)錯(cuò)誤、缺失或字跡模糊 （特別是產(chǎn)品名稱(chēng)或出產(chǎn)廠家名稱(chēng)，批號(hào)和貨號(hào)，失效期或/和生產(chǎn)日期）；缺失目錄；泄漏或污染；不適宜的存放條件；保護(hù)包裝上限和SI下限有一值amp。gt。 n3s值時(shí)說(shuō)明該值已在3s范圍之外， 22 全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 紙破