環(huán)氧樹(shù)脂檢測(cè)方法-資料下載頁(yè)
2025-11-05 21:50本頁(yè)面
【正文】 信息進(jìn)行檢測(cè)的方法，除早期發(fā)現(xiàn)已發(fā)展的缺陷外，還能提供被檢測(cè)對(duì)象實(shí)際應(yīng)力變形狀況的信息，并找出應(yīng)力集中區(qū)形成的原因。但此方法目前不能單獨(dú)作為缺陷定性的無(wú)損檢測(cè)方法，在實(shí)際應(yīng)用中，必須輔助以其他的無(wú)損檢測(cè)方法。水壓試驗(yàn)和氣壓實(shí)驗(yàn)第五篇：瘦肉精檢測(cè)方法目前，檢測(cè)瘦肉精的方法主要有四種，即高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜一質(zhì)譜法（GC－MS）、毛細(xì)管區(qū)帶電泳法（CE）和免疫分析技術(shù)（IA）。而我國(guó)結(jié)合自己的實(shí)際情況，2001年農(nóng)業(yè)部首先組織制定了飼料中鹽酸克倫特羅的測(cè)定標(biāo)淮。該標(biāo)準(zhǔn)選擇確定了兩種：即高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜一質(zhì)譜法（GC－MS）。其中將HPLC法作為檢測(cè)瘦肉精的半確證性方法，其最低檢測(cè)限為 0．05μg/kg，優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)精確度高，而且假陽(yáng)性率低；缺點(diǎn)是檢測(cè)過(guò)程煩瑣、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，需貴重儀器、難于操作、價(jià)格昂貴。而GC一MS法優(yōu)點(diǎn)是能在多種殘留物同時(shí)存在的情況下對(duì)某種特定的殘留物進(jìn)行定性、定量分析。GC－MS法與HPLC法相比，檢測(cè)靈敏度更高，假陽(yáng)性率更低，已將GC－MS法定為檢測(cè)瘦肉精的確證性方法。GC－MS法的缺點(diǎn)同HPLC相似。(1)試劑和材料 以下所有試劑，除特別注明外，均為分析純?cè)噭?；水為符合GB／T6682規(guī)定的二級(jí)水。①鹽酸克倫特羅對(duì)照品：含鹽酸克倫特羅不得少于98．5％②鹽酸③無(wú)水甲醇④氫氧化鈉⑤磷酸二氫鉀⑥磷酸⑦鹽酸溶液 取鹽酸4．2ml，加水至1000ml，即得。⑧o．5mol／L磷酸二氫鉀溶液 取磷酸二氫鉀68g，加水800ml溶解并用磷酸調(diào)pH值至3．O，用水稀釋至1000ml，即得。⑨0．05mol幾磷酸二氫鉀溶液 取磷酸二氫鉀6．88，加水800ml溶解并用磷酸調(diào)pH值至3．0，用水稀釋至1000mi，即得。a．氫氧化鈉溶液 取氫氧化鈉48，加水使溶解成100mi，即得。b．鹽酸克倫特羅對(duì)照品儲(chǔ)備液(1mg／mi)準(zhǔn)確稱(chēng)取28．3mg鹽酸克倫特羅對(duì)照晶至25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至25ml，一20~C以下保存，有效期1年。⑩鹽酸克倫特羅對(duì)照品工作液(10ttg／mi)取lmg／mi儲(chǔ)備液o．5ml到50mi量瓶中，加水至50mi，2～8~C保存，有效期1個(gè)月。⑾鹽酸克倫特羅對(duì)照溶液(100ng／m1)取1(ug／m1工作液o．5ml到：50mi量瓶中水至50mi，2～8~C保存，有效期1個(gè)月。⑿鹽酸克倫特羅檢測(cè)試劑盒(2～8~C冰箱中保存)⒀固相萃取柱C，s：100mglml含碳量≥17％(2)儀器和設(shè)備①酶聯(lián)免疫反應(yīng)讀數(shù)儀②分析天平精度0．00001g③天平精度0．01g④冷凍離心機(jī)⑤50mi具塞離心管⑥勻漿機(jī)⑦微型振蕩器⑧回旋振蕩器⑨微量移液器 單道20uL，50ul，100uL；多道50～250uL，⑩干熱濃縮器①空氣壓縮機(jī)(3)測(cè)定步驟①試料的制備(尿)取供試尿lml，于3000r／min離心l0min，上清液作為供試試料，直接供酶聯(lián)免疫測(cè)定法測(cè)定。取空白尿lml，于3000r／min離心l0min，上清液作為空白試料，直接供酶聯(lián)免疫測(cè)定法測(cè)定。取空白尿2ml，于3000r／min離心l0min，／L的克倫特羅對(duì)照溶液20／H。作為2ug/l空白添加試料，直接供酶聯(lián)免疫測(cè)定法測(cè)定。②試料的制備(肝)取約l00g新鮮或冷凍后融化的空白或供試豬肝,用勻漿機(jī)以10000r／rain勻漿12min，使均勻呈糊狀，一20~C以下冰箱中貯存?zhèn)溆?。取均漿后的供試肝樣，作為供試試料。取均漿后的空白肝樣，作為空白試料。取均漿后的空白肝樣(1土0．05)e添加l00ng／m1的克倫特羅對(duì)照溶液20tzL作為2ng／g空白添加試料。a：提取(肝)取(1士o．05)z試料，置50ml離心管中；，旋渦混勻，中速振蕩1．5h；在10—15~C下以4000r／mill以上速度離心15min；上清液移人另一50ml離心管中，加入氫氧化鈉溶液300gL，混勻，振蕩15min；／l磷酸二氫鉀溶液4。0ml，混勻，2—8~C放置過(guò)夜；取上述溶液于10～15~C以4000r／111113以上的速度離心15min，上清液備用。b．凈化(肝)C，固相萃取柱依次用無(wú)水甲醇3mi、／L磷酸二氫鉀溶液2mi預(yù)洗，不使柱床干涸；將備用上清液全部過(guò)柱；／L磷酸二氫鉀溶液2ml淋洗，擠干，棄去所有淋洗液；用無(wú)水甲醇2mi洗脫，／mm以下，擠干，收集洗脫液；于50～60~C下用氮?dú)饣蚩諝饩従彺蹈上疵撘?；，?000r／mill以上的速度離心15rain，清液作為試樣溶液供酶聯(lián)免疫測(cè)定法測(cè)定。③測(cè)定a．室溫應(yīng)控制在19～30~C。b．取在19—30~C放置1—2h的試劑盒，按每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液至少兩孔計(jì)算所需酶聯(lián)板條的數(shù)量，插入框架。每個(gè)微孔加入用緩沖溶液100倍稀釋的抗體100~tL，封口膜封板，室溫孵育30min。c倒出孔內(nèi)液體，將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，使孔內(nèi)沒(méi)有殘余液體。用多道移液器加水250pL到酶聯(lián)板的微?L內(nèi)，稍后倒出孔內(nèi)液體，再將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，如此重復(fù)操作洗板3次。d．分別吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液、空白試料、空白添加試料和供試試料各20uL，分別放入不同微孔底中央，并在每孔內(nèi)加入用緩沖溶液100倍稀釋的酶結(jié)合物100~I。，在微型振蕩器上混勻，用封口膜封好，室溫孵育30min。e．倒出孔內(nèi)液體，將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，使孔內(nèi)沒(méi)有殘余液體，重復(fù)洗板3次。f．用多道移液器加入用底物緩沖溶液10倍稀釋的底物100uL，室溫避光孵育15min。g．用多道移液器每孔加終止液100uL。h．在1h內(nèi)將酶聯(lián)板放于酶標(biāo)儀內(nèi)，于450nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值。(4)計(jì)算 用數(shù)據(jù)分析軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得出試料中克倫特羅的含量。(5)靈敏度和回收率／Kg。本方法在1ug／kg添加濃度水平上豬尿回收率范圍為60％一120％，豬肝回收率范圍為40％～120％。
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