標書常用證件-資料下載頁
2024-11-09 22:23本頁面
【正文】 能是調控肺上皮細胞表型轉分化的重要前提。若AECⅡ正常轉分化為AECＩ，則損傷完全修復，肺結構正常；若AECⅡ轉分化異常，則導致不成熟肺異常修復和肺發(fā)育阻滯。目前，關于AECⅡAECＩ間可逆轉分化的研究僅限于離體實驗，在早產兒肺損傷中的作用尚不清楚。因此，研究Ⅱ型細胞“轉分化”及基質對其調控機制，是闡明早產兒肺損傷發(fā)病機制的關鍵所在。細胞外基質調控Ⅱ型細胞轉分化的信號途徑成為關注的焦點。近年發(fā)現(xiàn)，Notch受/配體信號系統(tǒng)可決定肺泡上皮細胞轉分化方向，從而在肺發(fā)育及肺損傷修復中起重要作用 [5]。Notch信號為一組高度保守的跨膜蛋白質，由Notch1～配體（Delta、Jagged）及目的基因supperssor of hairless(Su(H))、Hes（hairy and enhance of split）組成，是多種組織和器官早期發(fā)育所必需的細胞間調節(jié)信號，通過鄰近細胞間相互作用精確調控各譜系細胞（如多種器官干細胞及其原始細胞）的發(fā)育、增殖、分化。研究表明[6]，Notch配體通過與相鄰的同型或異型細胞表面的Notch分子胞外區(qū)結合，釋放具有活性的Notch胞內區(qū)，后者通過與胞漿和胞核內的相關蛋白結合來調控分化目的基因Su(H)、Hes的轉錄，最終影響細胞分化命運。Notch的生理抑制劑Numb可以阻斷其細胞內區(qū)向核內的轉移。研究發(fā)現(xiàn)，Notch信號途徑介導的細胞間相互作用的本質特征在于相鄰細胞受、配體的表達不同[6]：由同型細胞組成的細胞群中，使某些細胞定向分化，周圍細胞向另一方向分化或保持未分化狀態(tài)（即側向分化或抑制作用）；由不同型細胞組成的細胞群中，使細胞進入下一分化階段（即信號誘導作用）。目前有限的文獻報道[7，8]及我們的前期工作[9，10]表明，新生大鼠肺發(fā)育囊泡期肺泡上皮細胞和間質細胞高表達Notch受/配體，其蛋白及mRNA表達水平隨胎齡增加而改變。由此推測，Notch信號可能通過調控AECⅡ分化方向在肺發(fā)育及早產兒肺損傷中起重要作用，Notch信號表達異?？赡芡ㄟ^上皮/基質相互作用對肺泡上皮細胞轉分化及肺損傷修復產生重要影響。目前，對上皮細胞轉分化在發(fā)育期肺損傷修復中的作用研究很少，基質調控胎肺AECⅡ轉分化的分子機制尚有待進一步研究。國際上有關Notch信號轉導通路調控發(fā)育的報道主要限于淋巴細胞和腦組織細胞分化的研究，而對其調控肺泡上皮細胞轉分化的機制及在早產兒肺損傷中作用尚無人涉及。在早產兒肺損傷研究領域，本室已開展一系列工作，成功建立了高氧所致早產大鼠急、慢性肺損傷的動物模型，掌握了支氣管肺泡灌洗術、體外胎肺肺泡Ⅱ型細胞和成纖維細胞培養(yǎng)[11]以及其他相關的分子生物學和免疫細胞化學技術，并對細胞因子、抗氧化酶、一氧化氮、轉化生長因子β、細胞外基質中MMPs/TIMP（基質金屬蛋白酶/基質金屬蛋白酶抑制劑）平衡等因素在高氧肺損傷發(fā)病機制中所起的作用進行了較深入研究，同時應用地塞米松、人類重組促紅細胞生成素、銀杏葉提取物（EGb761）進行了抗氧化損傷的干預研究。晚近已完成Notch 信號在大鼠胎肺組織表達的預實驗。上述前期工作為從分子水平探討早產兒肺損傷發(fā)生機制奠定了基礎。據此，本研究提出如下假設：1．體外同型細胞培養(yǎng)時AECⅡ轉分化為AECＩ；不同型細胞（AECⅡ+成纖維細胞）共培養(yǎng)時抑制AECⅡ轉分化；2．細胞外基質抑制AECⅡ轉分化主要通過Notch 信號調控。本項目內容如能按預期完成，將深化對Notch信號通路調控AECⅡ轉分化分子機制的認識并可能為早產兒肺損傷的防治開拓新思路和提供理論依據。項目的研究內容、研究目標,以及擬解決的關鍵問題研究目標：闡明胎肺細胞外基質是否對AECⅡ—AECⅠ間可逆轉分化起決定作用；闡明Notch受/配體信號在基質對胎肺AECⅡ體外轉分化的調控機制中是否起關鍵作用，以期初步確定基質調控胎肺AECⅡ轉分化分子機制，探索防治早產兒肺損傷的新途徑。研究內容：Ⅱ（同型細胞群），體外AECⅡ和成纖維細胞（Fb）共培養(yǎng)（不同型細胞群），研究兩種條件下胎肺AECⅡ體外轉分化的形態(tài)學改變（病理染色及電子顯微鏡技術）；、轉分化狀況的差異（利用流式細胞技術）；Ⅱ和成纖維細胞表面Notch受/配體表達狀況（利用共聚焦顯微鏡技術）；Ⅱ細胞Notch受/配體表達的差異（利用基因表達連續(xù)分析技術，SAGE）；，阻斷細胞膜表面Notch受體對胎肺AECⅡ增殖、分化的影響；，研究高濃度氧對早產動物肺損傷形態(tài)學及Notch信號通路的影響。
環(huán)評公示相關推薦
鄂ICP備17016276號-1