20xx江南大學(xué)發(fā)酵工程初試和復(fù)試真題-資料下載頁
2024-11-09 12:45本頁面
【正文】 ）6在選育氨基酸或核苷酸生產(chǎn)菌株時(shí)，經(jīng)常通過篩選結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株以解除目的產(chǎn)物對(duì)其合成途徑中關(guān)鍵酶的反饋抑制或阻遏作用，從而達(dá)到目的產(chǎn)物高水平積累的目的，試討論其機(jī)理。7試敘述以野生型大腸桿菌為出發(fā)菌株，獲得一株氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株的操作過程。① 前培養(yǎng)：將細(xì)胞生理狀態(tài)調(diào)整到處于同步生長(zhǎng)狀態(tài)的旺盛的對(duì)數(shù)期，且使細(xì)胞內(nèi)具有豐富的內(nèi)源性堿基，這樣會(huì)使受變均一且突變快速形成，可獲得較高的突變率② 單細(xì)胞菌懸液制備與活菌計(jì)數(shù) 取培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期的細(xì)菌培養(yǎng)液，離心，收集細(xì)胞，制成均勻的菌懸液，平板活菌計(jì)數(shù)③ 紫外線誘變處理.：菌懸液置于培養(yǎng)皿中鋪成薄層，于磁力攪拌器上攪拌菌懸液。皿底要放平，打開皿蓋，于15W紫外燈下30cm處理?？稍O(shè)20s,40s,60s,80s等不同時(shí)間。根據(jù)后面計(jì)數(shù)結(jié)果，可以繪制致死率曲線，突變率曲線，從而確定最佳處理強(qiáng)度。該步驟在紅光下進(jìn)行。④ 后培養(yǎng)：置于MM培養(yǎng)基或SM培養(yǎng)基中，培養(yǎng)過夜即可⑤ 淘汰野生型：將經(jīng)后培養(yǎng)的細(xì)胞先用MM培養(yǎng)基洗滌，接著再用無氮MM培養(yǎng)基培養(yǎng)46h，然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入正常濃度氮源的MM培養(yǎng)基中并加入5001000μg/ml的青霉素，培養(yǎng)1224h,可殺死能夠生長(zhǎng)和繁殖的野生型細(xì)胞。取樣分別涂布MM和CM平板，菌落數(shù)差異大的濃縮效果好 ⑥ 檢出缺陷性：從CM培養(yǎng)基上挑出菌株，再分別點(diǎn)種到CM和MM的相應(yīng)位置。經(jīng)過培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)在某一位置上MM上不長(zhǎng)出菌落，則可初步認(rèn)定是一個(gè)營(yíng)養(yǎng)缺陷型⑦ 缺陷型的鑒定：將上述挑出的菌株再次分別接種于MM和SM上，培養(yǎng)24h后只在SM培養(yǎng)基上升至的菌落就是氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型8設(shè)計(jì)從自然界中分離篩選蛋白酶產(chǎn)生芽孢桿菌的步驟，并簡(jiǎn)要說明每一步的理由及注意點(diǎn)。分離方案：①采樣：從蠶絲，豆餅等腐爛變質(zhì)初分離含蛋白質(zhì)的土壤中分離取樣②增殖培養(yǎng)：配制組合培養(yǎng)基，僅用蛋白質(zhì)作為唯一碳源。添加一些抑制革蘭氏陰性菌生長(zhǎng)的試劑。培養(yǎng)基的PH(偏堿性)和溫度都要適合芽孢桿菌生長(zhǎng)。需進(jìn)行熱處理，即將樣品經(jīng)過80℃，10min水浴處理，將所有的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞全部殺死只保留芽孢，之后再增殖培養(yǎng)，篩選效果將更好。③純種分離：滅菌，倒平板，并在培養(yǎng)基中加入酪素。待單菌落形成后，將平板置冰箱中過夜，如果菌落周圍形成透明圈，則說明其能分泌蛋白酶，可根據(jù)透明圈的大小，來檢出微生物分泌蛋白酶的能力，并可以選樣分離。④篩選：通過初篩（每株一瓶），復(fù)篩（每株35瓶）得到較優(yōu)菌株 ⑧ 保藏：接入斜面保藏理由：①在富含蛋白質(zhì)的環(huán)境中蛋白酶必然較多，此舉使今后培養(yǎng)等工作量減輕； ②培養(yǎng)基僅用蛋白質(zhì)作為唯一碳源，是因?yàn)椴荒墚a(chǎn)蛋白酶的菌株就不能分解蛋白質(zhì)，無碳源利用不能繁殖生長(zhǎng)，這使得產(chǎn)蛋白質(zhì)酶的菌株大量繁殖稱為優(yōu)勢(shì)菌種，利于增殖培養(yǎng)。注意點(diǎn)：； ，防止水分失去。； ；，PH，培養(yǎng)溫度，添加抑制劑和是否要進(jìn)行熱處理等。第四篇：江南大學(xué)發(fā)酵工程專業(yè)參考書目重慶大學(xué)發(fā)酵工程專業(yè)參考書目：《生物化學(xué)（第三版上下冊(cè)）》 王鏡巖等主編 高等教育出版社《化工原理（上、下冊(cè)）》 夏清陳常貴等 天津大學(xué)出版社《微生物學(xué)教程（第二版）》 周德慶 高等教育出版社微生物參考書： ，李華鐘主編，微生物學(xué)（第二版），科學(xué)出版社，2009 ，李華鐘，王正祥主編，微生物遺傳育種學(xué)，化學(xué)工業(yè)出版社，2008 ，微生物學(xué)教程（第二版），高等教育出版社，2002第五篇：江南大學(xué)發(fā)酵工程綜合 考試大綱課程名稱：發(fā)酵工程綜合一、考試的總體要求發(fā)酵工程原理與技術(shù)是生物工程專業(yè)一門最重要的專業(yè)核心課程。作為江南大學(xué)發(fā)酵工程、輕工技術(shù)與工程和生物工程專業(yè)碩士研究生入學(xué)考試的復(fù)試科目，考生應(yīng)掌握發(fā)酵工程所涉及的生物化學(xué)和微生物學(xué)的基礎(chǔ)理論知識(shí)和生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)化過程涉及的工程知識(shí)，具備發(fā)酵工程相關(guān)的研究方法與技能，并要求對(duì)發(fā)酵工程研究領(lǐng)域的發(fā)展和前沿有一定的了解。要求考生掌握發(fā)酵工程的基本原理，具備一定的融匯貫通、獨(dú)立思考的綜合分析能力能力，主要考察學(xué)生分析和解決生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)化中關(guān)鍵問題的能力。二、考試的內(nèi)容及比例本課程考試內(nèi)容涉及面較廣，突出有關(guān)發(fā)酵過程的化學(xué)、生物學(xué)、生物化學(xué)和微生物學(xué)等基本原理，并結(jié)合工程學(xué)知識(shí)，內(nèi)容包括發(fā)酵過程的微生物學(xué)和生物化學(xué)基本原理、發(fā)酵原輔料處理、培養(yǎng)基及其水的處理和無菌空氣的制備，工業(yè)微生物菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)、各種發(fā)酵操作方式的工藝規(guī)律、下游工程的分離方法等發(fā)酵工程基礎(chǔ)，發(fā)酵工業(yè)的主要設(shè)備的操作原理、性能及構(gòu)造和設(shè)計(jì)方法以及固態(tài)發(fā)酵、基因工程菌發(fā)酵和動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)等一些非常規(guī)發(fā)酵過程。具體考試內(nèi)容和大致比例如下：發(fā)酵工程的基本概念，約20%。發(fā)酵原料的處理及培養(yǎng)基制備，約10%。各種發(fā)酵操作方式的工藝原理和規(guī)律，約20%。發(fā)酵過程的優(yōu)化及其動(dòng)力學(xué)研究，約10%。發(fā)酵工程的裝備，約10%。下游工程的分離方法，約10%。發(fā)酵工程的概況及其前沿進(jìn)展，約20%。三、試題類型及比例名詞解釋： 約15%。填空或判斷題： 約15%。簡(jiǎn)答題： 約30%。問答題（含計(jì)算題）： 約40%。四、考試形式及時(shí)間考試形式為筆試。考試時(shí)間為3小時(shí)。五、主要參考教材，李艷主編，高等教育出版社（二版），姚汝華主編，華南理工大學(xué)出版社
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