【正文】 檢驗(yàn)技師綜合輔導(dǎo)：蛋白質(zhì)的變性天然蛋白質(zhì)的嚴(yán)密結(jié)構(gòu)在某些物理或化學(xué)因素作用下，其特定的空間結(jié)構(gòu)被破壞，從而導(dǎo)致理化性質(zhì)改變和生物學(xué)活性的喪失，如酶失去催化活力，激素喪失活性稱之為蛋白質(zhì)的變性作用。變性蛋白質(zhì)只有空間構(gòu)象的破壞，一般認(rèn)為蛋白質(zhì)變性本質(zhì)是次級(jí)鍵，二硫鍵的破壞，并不涉及一級(jí)結(jié)構(gòu)的變化。變性蛋白質(zhì)和天然蛋白質(zhì)最明顯的區(qū)別是溶解度降低，同時(shí)蛋白質(zhì)的粘度增加，結(jié)晶性破壞，生物學(xué)活性喪失，易被蛋白酶分解。引起蛋白質(zhì)變性的原因可分為物理和化學(xué)因素兩類。物理因素可以是加熱、加壓、脫水、攪拌、振蕩、紫外線照射、超聲波的作用等；化學(xué)因素有強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、尿素、重金屬鹽、十二烷基磺酸鈉（SDS）等。在臨床醫(yī)學(xué)上，變性因素常被應(yīng)用于消毒及滅菌。反之，注意防止蛋白質(zhì)變性就能有效地保存蛋白質(zhì)制劑。變性并非是不可逆的變化，當(dāng)變性程度較輕時(shí)，如去除變性因素，有的蛋白質(zhì)仍能恢復(fù)或部分恢復(fù)其原來的構(gòu)象及功能，變性的可逆變化稱為復(fù)性。例如，前述的核糖核酸酶中四對二硫鍵及其氫鍵。在β巰基乙醇和8M尿素作用下，發(fā)生變性，失去生物學(xué)活性，變性后如經(jīng)過透析去除尿素，β巰基乙醇，并設(shè)法使疏基氧化成二硫鍵，酶蛋白又可恢復(fù)其原來的構(gòu)象，生物學(xué)活性也幾乎全部恢復(fù)，此稱變性核糖核酸酶的復(fù)性。許多蛋白質(zhì)變性時(shí)被破壞嚴(yán)重，不能恢復(fù)，稱為不可逆性變性。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試血液檢驗(yàn)輔導(dǎo)：異型淋巴細(xì)胞在傳染性單核增多癥、病毒性肺肝炎、流行性出血熱等病毒感染或過敏原則刺激下，可使淋巴細(xì)胞增生，并出現(xiàn)某些形態(tài)學(xué)變化，稱為異型淋巴細(xì)胞。Downey將其按形態(tài)特征分為三型：1型（空泡型）：最多見。胞體比正常淋巴細(xì)胞稍大，多為圓形、橢圓形或不規(guī)則形。核圓形、腎形或分葉狀、常偏位。染色質(zhì)粗糙，呈粗網(wǎng)狀或小塊狀，排列不規(guī)則。胞質(zhì)豐富，染深藍(lán)色，含空泡或呈泡沫狀。Ⅱ型（幼稚型）：胞體較大，核圓形或卵圓形。染色質(zhì)細(xì)致呈網(wǎng)狀排列，可見1～2個(gè)至發(fā)生母細(xì)胞化的結(jié)果。Ⅲ型（不規(guī)則型）：胞體較大，外形常不規(guī)則，可有多數(shù)足。核形狀及結(jié)構(gòu)與1型相同或更不殊途同歸，染色質(zhì)較粗糙致密。胞質(zhì)量豐富，染色淡藍(lán)或灰藍(lán)色，有透明感，邊緣處著色較深藍(lán)色?？捎猩贁?shù)空泡。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：胎兒血型的預(yù)測羊水中存在ABH（O）血型物質(zhì)，故可在妊娠期預(yù)測胎兒的血型，以便對母體胎兒血型不合者進(jìn)行圍生期監(jiān)護(hù)、治療和對新生兒的作好搶救準(zhǔn)備。一、ABH分泌型血型的預(yù)測本試驗(yàn)是根據(jù)羊中分泌的血型物質(zhì)可將相應(yīng)抗血清中抗體中和原理設(shè)計(jì)的。，馮分作用10min后，便血型物質(zhì)將抗體中和完全，再于各管加入相對應(yīng)的2%標(biāo)準(zhǔn)A型，B型，充分混勻。置室溫30min，低速離心1分鐘觀察有無凝集。本試驗(yàn)最關(guān)鍵的部分是要選擇好抗血清的最適稀釋度。即選擇抗血清與2%標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液恰能產(chǎn)生4+凝集的最高稀釋度，這樣才能在加入羊水后將相應(yīng)抗體中和掉不再出現(xiàn)4+凝集。：11：256倍比稀釋后，將2%A，B，置室溫1小時(shí)后觀察結(jié)果，以出現(xiàn)4+凝塊的最高稀釋度定為最適稀釋度。實(shí)驗(yàn)中要注意控制溫度，以免由于抗血清中冷凝集素未被完全吸收而造成結(jié)果判斷錯(cuò)誤。二、ABH（O）血型酶的測定羊水ABH血型物質(zhì)的測定，無法預(yù)測非分泌型胎兒的血型。已知由A基因產(chǎn)生的N乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶能將N乙酰氨基半乳聯(lián)接在H物質(zhì)末端的半乳糖上，形成A血型物質(zhì)，B基因產(chǎn)生的D半乳糖轉(zhuǎn)移酶將D半乳糖聯(lián)接在H物質(zhì)末端的半乳糖上，形成B血型物質(zhì)。當(dāng)有糖供體、二價(jià)錳離子與O型紅細(xì)胞共同孵育時(shí)，羊水中的轉(zhuǎn)移酶可在紅細(xì)胞膜上合億A或B物質(zhì)，利用血型測定的方法可檢測埋分泌型胎兒的血型。這時(shí)有嚴(yán)重ABO同種免疫史的孕婦非分泌型的胎兒血型鑒定提供了可能，也為在位于ABO基因部位的遺傳性疾病的產(chǎn)前診斷提供了可能，而可不必考慮胎兒是否為分泌型。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試臨檢基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：精液的男性生育力指數(shù)測定【計(jì)算公式】I=M（NV）/（A106）式中I為男性生育力指數(shù)；M為活動(dòng)精子百分率；N為每毫升的精子數(shù)；V為精子運(yùn)動(dòng)的速度；A為畸形精子的百分率?！菊⒖贾怠空Ｈ松χ笖?shù)》1.【臨床意義】，表明完全無生育能力。，表明有不同程度的生育障礙。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：HIV抗體常見檢測方法目前作為診斷手段使用的檢測主要包括抗HIV病毒抗體檢測、病毒培養(yǎng)、核酸檢測和抗原檢測。其中對病毒抗體的檢測是最常規(guī)使用的方法，這不但是由于這類檢測特異性、敏感性較高，方法相對簡便、成熟，更重要的原因是HIV抗體在病毒感染后除早期短暫的“窗口期”外的整個(gè)生命期間長期穩(wěn)定地存在并可被檢測到。在一些特殊情況下，當(dāng)抗體檢測無法滿足HIV感染診斷的需要時(shí)，病毒分離及測定、核酸檢測、抗原檢測可作為輔助手段使用，這包括對非典型血清學(xué)反應(yīng)樣品的診斷、HIV感染的窗口期診斷、新生兒早期診斷和對特殊樣品的診斷。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：HIV抗體確認(rèn)實(shí)驗(yàn)免疫印跡試驗(yàn)（WB）、條帶免疫試驗(yàn)（LIATEKHIVⅢ）、放射免疫沉淀試驗(yàn)（RIPA）及免疫熒光試驗(yàn)（IFA）。國內(nèi)常用的確認(rèn)試驗(yàn)方法是WB.（一）免疫印跡實(shí)驗(yàn)（WB）免疫印跡實(shí)驗(yàn)是廣泛用于許多傳染病診斷的實(shí)驗(yàn)方法，就HIV的病原學(xué)診斷而言，它是首選的用以確認(rèn)HIV抗體的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方法，WB的檢測結(jié)果常常被作為鑒別其他檢驗(yàn)方法優(yōu)劣的“金標(biāo)準(zhǔn)”。確認(rèn)試驗(yàn)流程：有HIV1/2混合型和單一的HIV1或HIV2型。先用HIV1/2混合型試劑進(jìn)行檢測，如果呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HIV抗體陰性；如果呈陽性反應(yīng)，則報(bào)告HIV1抗體陽性；如果不滿足陽性標(biāo)準(zhǔn)，則判為HIV抗體檢測結(jié)果不確定。如果出現(xiàn)HIV2型的特異性指示條帶，需用HIV2型免疫印跡試劑再做HIV2的抗體確認(rèn)試驗(yàn)，呈陰性反應(yīng)，報(bào)告HIV2抗體陰性；呈陽性反應(yīng)則報(bào)告HIV2抗體血清學(xué)陽性，并將樣品送國家參比實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行核酸序列分析，WB的敏感性一般不低于初篩實(shí)驗(yàn)，但它的特異性很高，這主要是基于HIV不同抗原組分的分離以及濃縮和純化，能夠檢測針對不同抗原成分的抗體，因而能夠用WB方法鑒別初篩實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。從WB確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果看出，初篩試驗(yàn)盡管選擇質(zhì)量較好的試劑，如第三代ELISA，仍會(huì)有假陽性出現(xiàn)，必須通過確認(rèn)試驗(yàn)才能得出準(zhǔn)確結(jié)果。（二）免疫熒光實(shí)驗(yàn)（IFA）IFA法經(jīng)濟(jì)、簡便、快速，曾被FDA推薦用于WB不確定樣品的診斷。但需要昂貴的熒光顯微鏡，需要受過良好訓(xùn)練的技術(shù)人員、觀察和解釋結(jié)果易受主觀因素的影響，結(jié)果不宜長期保存，IFA不宜在一般的實(shí)驗(yàn)室開展和應(yīng)用。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試臨檢基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：重視血常規(guī)的復(fù)檢工作目前血細(xì)胞分析儀己經(jīng)普及到縣醫(yī)院或衛(wèi)生院，這對提高血細(xì)胞常規(guī)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，減輕工作人員勞動(dòng)強(qiáng)度起促進(jìn)作用。但是我們應(yīng)該認(rèn)識(shí)到血細(xì)胞分析儀還是一個(gè)過篩工具，至今最先進(jìn)的全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀還不能完全取代人工檢查，仍然有部分標(biāo)本需要復(fù)檢。據(jù)我所知有的醫(yī)院有了血細(xì)胞分析儀，把人工操作的工具、試劑全丟棄，基本上不再復(fù)檢了。有的單位即使復(fù)檢，也沒有復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)，隨心所欲，其復(fù)檢率只有百分之幾，這顯然是不負(fù)責(zé)任的?，F(xiàn)就此問題談?wù)剛€(gè)人看法。一、為什么要復(fù)檢？考試用書 血細(xì)胞分析儀測定原理雖有不同，但它的各種項(xiàng)目的閾值是人設(shè)定的，而且是固定的，可是病人血細(xì)胞變化是千姿百態(tài)，有部分細(xì)胞難以識(shí)別或認(rèn)錯(cuò)干擾其它細(xì)胞計(jì)數(shù)，如有核紅細(xì)胞可影響白細(xì)胞計(jì)數(shù)；細(xì)胞碎片、血小板聚集可影響血小板計(jì)數(shù)等。尤其是白細(xì)胞形態(tài)學(xué)分類與血細(xì)胞分析儀的白細(xì)胞分類有本質(zhì)上的不同，三分群僅僅是根據(jù)細(xì)胞大小來分而己，即使先進(jìn)的五分類也與形態(tài)學(xué)也有很大差異，又如中性粒細(xì)胞毒性病變、變異淋巴細(xì)胞、瘧原蟲等臨床需要的指標(biāo)無法顯示；有的幼稚細(xì)胞、有核紅細(xì)胞也不能區(qū)分；各參數(shù)之間有時(shí)還存在互相干擾?？傊?，血細(xì)胞分析儀的結(jié)果僅僅是屬于過篩而己，不能完全代替人工鏡檢。根據(jù)1987年我赴日本考察時(shí)，日本對三分群儀器白細(xì)胞分類是不收費(fèi)的，而且每一例仍然需要涂片染色，在顯微鏡下重新分類后才能報(bào)告。1989年Coulter公司制定了復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)，調(diào)查了11個(gè)床位及性質(zhì)不同的醫(yī)療單位，它們均使用該公司的三分群血細(xì)胞分析儀，根據(jù)該公司的復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)，其復(fù)檢率為15%～60%，平均為40%，使手工分類減少40～85%，平均減少了60%，也就是說用節(jié)省下來的時(shí)間好好為40%需要分類的病人服務(wù)。最近日本名古屋大學(xué)醫(yī)學(xué)部附屬醫(yī)院報(bào)告，他們用SysmexXE2100（五分類）%.再次證明當(dāng)前最先進(jìn)血細(xì)胞分析儀也不能完全替代人工檢查。由于沒有復(fù)檢而產(chǎn)生的漏檢白血病、異常淋巴細(xì)胞、瘧原蟲，還有EDTA依賴性血小板假性降低等己引起的醫(yī)療糾紛，應(yīng)該引起我們深思。二、復(fù)檢內(nèi)涵尚待統(tǒng)一有人認(rèn)為“復(fù)檢”就是要在鏡下重新進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)而己，這是偏面的。復(fù)檢內(nèi)涵應(yīng)包據(jù)：對血細(xì)胞分析儀測定的全部結(jié)果進(jìn)行評(píng)估，必要時(shí)包括原標(biāo)本重查，或重新用人工復(fù)查等。因此血常規(guī)手工操作不能丟；2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試臨檢基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：精液檢查的具備條件受檢者，經(jīng)歷一段經(jīng)常排精過程后，禁房事5－7天（上次排精到取標(biāo)本間隔時(shí)間至少不得少于100小時(shí)）；備大口有蓋清潔干燥容器一個(gè)，以手淫方式獲取精液，一次全部射入容器，蓋上蓋，記錄標(biāo)本離體時(shí)間；貼身保溫，30分鐘內(nèi)送到化驗(yàn)室，并向檢驗(yàn)員提供標(biāo)本取出時(shí)間。精液常規(guī)觀察：精液總?cè)萘浚ê辽?，精子活?dòng)情況，精子密度（個(gè)/毫升），精液液化時(shí)間（標(biāo)本取出到精液液化的時(shí)間），不動(dòng)精子（個(gè)/高倍視野）等。見不動(dòng)精子，須染色方可區(qū)分：不活動(dòng)的精子、死精子、未成熟精子等。找不到精子必須離心后檢驗(yàn)，仍然找不到精子；方可報(bào)告無精。經(jīng)三次取樣化驗(yàn)，結(jié)果仍然找不到精子方可確認(rèn)無精子癥。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試免疫檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血漿的鑒別方法血漿是血液的液體成分，血細(xì)胞懸濁于其中。人體含有27503300毫升血漿，約占血液總體積的55%.血漿的絕大部分是水（體積的90%），其中溶解的物質(zhì)主要是血漿蛋白，還包括葡萄糖、無機(jī)鹽離子、激素以及二氧化碳。血漿的主要功能是運(yùn)載血細(xì)胞，同時(shí)也是運(yùn)輸分泌產(chǎn)物的主要媒介。將新鮮血液離心，使血細(xì)胞沉降，上層淡黃色清液即是血漿。血漿與血清的區(qū)別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試免疫檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血漿的主要作用提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長必須的物質(zhì)。提供激素和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（氫化可的松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長因子如成纖維細(xì)胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過程中起重要作用。提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷。對培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用：有一些細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，現(xiàn)在則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被廣泛用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時(shí)，粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子，他們在代謝解毒中起重要作用，如SeO3，硒等。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：離心技術(shù)的工具離心機(jī)（centrifuge）是實(shí)施離心技術(shù)的裝置。離心機(jī)的種類很多，按照使用目的，可兩類，即制備型離心機(jī)和分析型離心機(jī)。前者主要用于分離生物材料，每次分離樣品的容量比較大，后者則主要用于研究純品大分子物質(zhì)，包括某些顆粒體如核蛋白體等物質(zhì)的性質(zhì)，每次分析的樣品容量很小，根據(jù)待測物質(zhì)在離心場中的行為（可用離心機(jī)中的光學(xué)系統(tǒng)連續(xù)地監(jiān)測），能推斷其純度、形狀和相對分子質(zhì)量等性質(zhì)。兩類離心機(jī)由于用途不同，故其主要結(jié)構(gòu)也有差異。通常所使用的離心機(jī)根據(jù)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速大小的不同可分為普通離心機(jī)、高速離心機(jī)和超速離心機(jī)三類2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：離心技術(shù)的概況離心技術(shù)是利用物體高速旋轉(zhuǎn)時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)大的離心力，使置于旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達(dá)到濃縮或與其他顆粒分離之目的。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細(xì)胞、細(xì)胞器、病毒和生物大分子等。離心機(jī)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時(shí)，當(dāng)懸浮顆粒密度大于周圍介質(zhì)密度時(shí)，顆粒離開軸心方向移動(dòng)，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質(zhì)的密度時(shí)，則顆粒朝向軸心方向移動(dòng)而發(fā)生漂浮。常用的離心機(jī)有多種類型，一般低速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速不超過6000rpm，高速離心機(jī)在25000rpm以下，超速離心機(jī)的最高速度達(dá)30000rpm以上。根據(jù)離心原理，可設(shè)計(jì)多種離心方法，常見下列三大類型：。通過逐步增加相對離心力，使一個(gè)非均相混合液內(nèi)形狀不同的大小顆粒分步沉淀。離心前，離心管內(nèi)先裝入分離介質(zhì)（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質(zhì)，然后加入樣品進(jìn)行離心，具體又可分為：1）速度區(qū)帶離心法。離心前，離心管內(nèi)先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質(zhì)，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內(nèi)，達(dá)到彼此分離的目的。本法可分離各種細(xì)胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。2）預(yù)制梯度等密度離心法。要求在離心前預(yù)先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質(zhì)，常用介質(zhì)有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調(diào)節(jié)樣品液密度。離心后，不同密度的樣品顆粒到達(dá)與自身密度相等的梯度層，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。3）自成梯度等密度離心法。某些密度介質(zhì)經(jīng)過離心后會(huì)自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長時(shí)間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。需要離心分離的樣品可和梯度介質(zhì)先均勻混合，離心開始后，梯度介質(zhì)由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時(shí)，可以帶動(dòng)原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達(dá)與其自身密度相等的梯度層里，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進(jìn)行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離