動(dòng)植物細(xì)胞器離心法分離-資料下載頁(yè)
2025-09-23 06:48本頁(yè)面
【正文】 )，如葉綠素的火紅色熒光。有的生物材料本身不發(fā)熒光，但它吸收熒光染料后同樣也能發(fā)出熒光 (稱為間接熒光 )，如葉綠體吸附吖啶橙后可發(fā)橘紅色熒光。本實(shí)驗(yàn)利用熒光顯微鏡對(duì)發(fā)熒光的葉綠體進(jìn)行觀察。 第二十一頁(yè)，共二十六頁(yè)。 【 材料 】 菠萊葉片。 【 實(shí)驗(yàn)用品 】 1．試劑：蒸餾水， mol／ L氯化鈉溶液， ％吖啶橙。 2．器材：普通離心機(jī)，組織搗碎機(jī)，天平，熒光顯微鏡，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，鑷子，接種針，目鏡測(cè)微尺，物鏡測(cè)微尺，恒溫箱，培養(yǎng)皿，濾紙，試管，試管架，移液管，滴管，燒杯，無(wú)熒光載片，蓋玻片，離心管。 第二十二頁(yè)，共二十六頁(yè)。 【 實(shí)驗(yàn)步驟 】 1．選取新鮮的菠菜嫩葉，洗擦干后去除葉梗及粗脈，稱3g于 mol／ L氯化鈉溶液 45mL中，置入組織搗碎機(jī)或研缽中。 2．利用組織搗碎機(jī)低速 (5000 r／ min)勻漿 3~5 min，或研磨成勻漿。 3．用 6層紗布過(guò)濾，濾液盛于燒杯中。 4．取濾液 4 mL在 1000 r／ min下離心 2 min，棄去沉淀。 5．將上清液在 3000 r／ min下離心 5 min．棄去上清液，沉淀即為葉綠體 (混有局部細(xì)胞核 )。 第二十三頁(yè)，共二十六頁(yè)。 6．沉淀用 mol／ L氯化鈉溶液懸浮。 7．取葉綠體懸液 l滴置于載玻片上，加蓋玻片后用普通光學(xué)顯微鏡觀察。使用熒光顯微鏡觀察時(shí)，將葉綠體懸液滴在無(wú)熒光的載玻片上，再滴加 l滴％吖啶橙熒光染料，蓋上無(wú)熒光的蓋玻片后即可觀察。 8．觀察葉綠體的形態(tài)結(jié)構(gòu)、測(cè)量 5~10個(gè)葉綠體的長(zhǎng)軸和短軸、葉綠體發(fā)射熒光的現(xiàn)象。 第二十四頁(yè)，共二十六頁(yè)。 【 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 】 ? 繪制普通光學(xué)顯微鏡下觀察的葉綠體形態(tài)示意圖，記錄熒光顯微鏡觀察的現(xiàn)象，分析結(jié)果。 第二十五頁(yè)，共二十六頁(yè)。 內(nèi)容總結(jié) 實(shí)驗(yàn) 4 動(dòng)植物細(xì)胞器別離、制備與觀察。依次增加離心力和離心時(shí)間，就能夠使這些顆粒按其大小、輕重分批沉降在離心管底部，從而分批收集。整個(gè)操作過(guò)程樣品要保持在 0℃ ~4℃ ，防止酶失活。將 mol／ L蔗糖溶液 ，然后沿管壁小心地參加 覆蓋于上層。將種子平鋪在放有濕紗布的盤內(nèi)，保持濕度，置溫箱 28℃ 于暗處培育 2~3d。待芽長(zhǎng)到 1~2cm長(zhǎng)時(shí)剪下約 15g，放 0~4℃ 1h 第二十六頁(yè)，共二十六頁(yè)。
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