動物檢疫工作記錄規(guī)范-資料下載頁
2025-09-19 21:48本頁面
【正文】 反應等。 在動物檢疫方面，具有代表性的技術(shù)主要有3大類：核酸擴增技術(shù)： 蛋白質(zhì)檢測技術(shù)：蛋白質(zhì)電泳與免疫印跡、重組抗原based、單克隆抗體based。新技術(shù)平臺：生物芯片、變性高效液相色譜、生物傳感器。 核酸擴增技術(shù)是對核酸進行體外生成和放大的技術(shù)，只要起始的生物材料里存在微量的特定核酸（如某種病原體的核酸），通過擴增反應就能得到大量的可檢測到的特定核酸產(chǎn)物，從而可證明檢測對象的存在。主要包括聚合酶鏈式反應（pcr），實時熒光pcr，lamp，nasba核酸擴增產(chǎn)物分析技術(shù)測序、雜交、酶切等。 pcr與實時熒光pcr是發(fā)展成熟且主要應用的核酸擴增技術(shù)。 pcr技術(shù)用于動物檢疫主要是檢測病原，做早期診斷和病原的鑒定。它不僅可以檢測活的病原體，而且還可檢出已滅活的病原體，只要病原體的核酸未降解。因此，當由于各種原因無法進行病原分離和鑒定時，該技術(shù)將發(fā)揮巨大的作用。 常規(guī)pcr檢測過程包括。取樣、樣品前處理與核酸提取pcr反應，pcr產(chǎn)物電泳檢測，pcr產(chǎn)物的確證分析（測序、酶切等）。 實時熒光pcr是指在pcr反應體系中加入熒光基團，每經(jīng)過一個擴增循環(huán)，產(chǎn)生一個熒光信號，通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個pcr進程，最終得到一條熒光擴增曲線，也可通過標準曲線對未知模板進行定量分析。 2實時熒光pcr檢測是當前實驗室及商業(yè)重點開發(fā)應用的快速檢測方法。其優(yōu)點為：特異性好、靈敏度高、更快速；操作簡單、安全、自動化程度高、防污染；可實現(xiàn)定量檢測；設備、試劑成本較高；快速篩選檢測方法，仍需確證（常規(guī)pcr及序列分析）等。 實時熒光pcr技術(shù)應用范圍為重大動物疫病及各種傳染病病原快速檢測方法，疫情監(jiān)控重要的技術(shù)依托；供港澳活禽及產(chǎn)品禽流感，新城疫監(jiān)測；進境動物產(chǎn)品口蹄疫，豬生殖與呼吸系統(tǒng)綜合癥檢測；動物及產(chǎn)品甲型流感h1n1監(jiān)測；飼料及動物產(chǎn)品中特定動物源成分檢測等。 （lamp）環(huán)介導等溫核酸擴增技術(shù)（lamp）是在鏈置換dna聚合酶啟動下的鏈置換dna合成循環(huán)。反應起始階段形成dna莖環(huán)結(jié)構(gòu)（lamp循環(huán)的起始結(jié)構(gòu)），以莖環(huán)結(jié)構(gòu)為模板進入擴增循環(huán)階段。擴增產(chǎn)物是不同長度的dna混合物，分別具有不同個數(shù)莖環(huán)結(jié)構(gòu)，產(chǎn)物dna序列為擴增靶序列的交替反向重復序列，酶切后可得到單一產(chǎn)物。 需針對靶基因的6個特異序列設計4條引物，還可加上2條環(huán)識別引物以提高速度和產(chǎn)量。lamp優(yōu)點為簡便、成本低、更快速；設備和試劑成本低，時間短；高特異性、高靈敏度；識別6個區(qū)域的4條引物；敏感性比常規(guī)pcr高；高產(chǎn)量、易檢測；產(chǎn)量可達數(shù)十微克，可進行熒光檢測（熒光核酸染料）或濁度（焦磷酸鎂沉淀）檢測。適合基層實驗室甚至現(xiàn)場檢測。 lamp缺點。更易污染、不方便產(chǎn)物回收及鑒定、設計空間較受限、擴增產(chǎn)度 第14頁 共1
職業(yè)教育相關推薦
鄂ICP備17016276號-1