動(dòng)物檢疫工作記錄規(guī)范-資料下載頁(yè)
2025-09-19 21:48本頁(yè)面
【正文】 反應(yīng)等。 在動(dòng)物檢疫方面，具有代表性的技術(shù)主要有3大類：核酸擴(kuò)增技術(shù)： 蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)：蛋白質(zhì)電泳與免疫印跡、重組抗原based、單克隆抗體based。新技術(shù)平臺(tái)：生物芯片、變性高效液相色譜、生物傳感器。 核酸擴(kuò)增技術(shù)是對(duì)核酸進(jìn)行體外生成和放大的技術(shù)，只要起始的生物材料里存在微量的特定核酸（如某種病原體的核酸），通過(guò)擴(kuò)增反應(yīng)就能得到大量的可檢測(cè)到的特定核酸產(chǎn)物，從而可證明檢測(cè)對(duì)象的存在。主要包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（pcr），實(shí)時(shí)熒光pcr，lamp，nasba核酸擴(kuò)增產(chǎn)物分析技術(shù)測(cè)序、雜交、酶切等。 pcr與實(shí)時(shí)熒光pcr是發(fā)展成熟且主要應(yīng)用的核酸擴(kuò)增技術(shù)。 pcr技術(shù)用于動(dòng)物檢疫主要是檢測(cè)病原，做早期診斷和病原的鑒定。它不僅可以檢測(cè)活的病原體，而且還可檢出已滅活的病原體，只要病原體的核酸未降解。因此，當(dāng)由于各種原因無(wú)法進(jìn)行病原分離和鑒定時(shí)，該技術(shù)將發(fā)揮巨大的作用。 常規(guī)pcr檢測(cè)過(guò)程包括。取樣、樣品前處理與核酸提取pcr反應(yīng)，pcr產(chǎn)物電泳檢測(cè)，pcr產(chǎn)物的確證分析（測(cè)序、酶切等）。 實(shí)時(shí)熒光pcr是指在pcr反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，每經(jīng)過(guò)一個(gè)擴(kuò)增循環(huán)，產(chǎn)生一個(gè)熒光信號(hào)，通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)pcr進(jìn)程，最終得到一條熒光擴(kuò)增曲線，也可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析。 2實(shí)時(shí)熒光pcr檢測(cè)是當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室及商業(yè)重點(diǎn)開(kāi)發(fā)應(yīng)用的快速檢測(cè)方法。其優(yōu)點(diǎn)為：特異性好、靈敏度高、更快速；操作簡(jiǎn)單、安全、自動(dòng)化程度高、防污染；可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)；設(shè)備、試劑成本較高；快速篩選檢測(cè)方法，仍需確證（常規(guī)pcr及序列分析）等。 實(shí)時(shí)熒光pcr技術(shù)應(yīng)用范圍為重大動(dòng)物疫病及各種傳染病病原快速檢測(cè)方法，疫情監(jiān)控重要的技術(shù)依托；供港澳活禽及產(chǎn)品禽流感，新城疫監(jiān)測(cè)；進(jìn)境動(dòng)物產(chǎn)品口蹄疫，豬生殖與呼吸系統(tǒng)綜合癥檢測(cè)；動(dòng)物及產(chǎn)品甲型流感h1n1監(jiān)測(cè)；飼料及動(dòng)物產(chǎn)品中特定動(dòng)物源成分檢測(cè)等。 （lamp）環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)（lamp）是在鏈置換dna聚合酶啟動(dòng)下的鏈置換dna合成循環(huán)。反應(yīng)起始階段形成dna莖環(huán)結(jié)構(gòu)（lamp循環(huán)的起始結(jié)構(gòu)），以莖環(huán)結(jié)構(gòu)為模板進(jìn)入擴(kuò)增循環(huán)階段。擴(kuò)增產(chǎn)物是不同長(zhǎng)度的dna混合物，分別具有不同個(gè)數(shù)莖環(huán)結(jié)構(gòu)，產(chǎn)物dna序列為擴(kuò)增靶序列的交替反向重復(fù)序列，酶切后可得到單一產(chǎn)物。 需針對(duì)靶基因的6個(gè)特異序列設(shè)計(jì)4條引物，還可加上2條環(huán)識(shí)別引物以提高速度和產(chǎn)量。lamp優(yōu)點(diǎn)為簡(jiǎn)便、成本低、更快速；設(shè)備和試劑成本低，時(shí)間短；高特異性、高靈敏度；識(shí)別6個(gè)區(qū)域的4條引物；敏感性比常規(guī)pcr高；高產(chǎn)量、易檢測(cè)；產(chǎn)量可達(dá)數(shù)十微克，可進(jìn)行熒光檢測(cè)（熒光核酸染料）或濁度（焦磷酸鎂沉淀）檢測(cè)。適合基層實(shí)驗(yàn)室甚至現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。 lamp缺點(diǎn)。更易污染、不方便產(chǎn)物回收及鑒定、設(shè)計(jì)空間較受限、擴(kuò)增產(chǎn)度 第14頁(yè) 共1
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