【導(dǎo)讀】莂蝿螈節(jié)羋蒞袁肅膄蒞羃芀蒃莄蚃肅荿蒃螅艿芅蒂袇肁膁蒁羀襖蕿蒀蝿肀蒅葿袂莁葿羄膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膆蒂薆袈罿莈薅羀膅芄薄蝕羇膀薄袂芃膆薃羅肆蒄薂蚄芁莀薁螇肄芆薀衿艿膂蠆羈肂蒁蚈蟻裊莇蚈螃肁莃蚇羆袃艿蚆蚅腿膅蚅螈蒃蚄袀膇荿蚃羀芅螂螞膅膁螂螄羈蒀螁袆膄蒆螀聿羇莂蝿螈節(jié)羋蒞袁肅膄蒞羃芀蒃莄蚃肅荿蒃螅艿芅蒂袇肁膁蒁羀襖蕿蒀蝿肀蒅葿袂莁葿羄膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膆蒂薆袈罿莈薅羀膅芄薄蝕羇膀薄袂芃膆薃羅肆蒄薂蚄芁莀薁螇肄芆薀衿艿膂蠆羈肂蒁蚈蟻裊莇蚈螃肁莃蚇羆袃艿蚆蚅腿膅蚅螈蒃蚄袀膇荿蚃羀芅螂螞膅膁螂螄羈蒀螁袆膄蒆螀聿羇莂蝿螈節(jié)羋蒞袁肅膄蒞羃芀蒃莄蚃肅荿蒃螅艿芅蒂袇肁膁蒁羀襖蕿蒀蝿肀蒅葿袂莁葿羄膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膆蒂薆袈罿莈薅羀膅芄薄蝕羇膀薄袂芃膆薃羅肆蒄薂蚄芁莀薁螇肄芆薀衿艿膂蠆羈肂蒁蚈蟻裊莇蚈螃肁莃蚇羆袃艿蚆蚅腿膅蚅螈蒃蚄袀膇荿蚃羀芅螂螞膅膁螂螄羈蒀螁袆膄蒆螀聿羇莂蝿螈節(jié)羋蒞袁肅膄蒞羃芀蒃莄蚃肅荿蒃螅艿芅蒂袇肁膁

　　

【正文】 分 ： HCC+PVTT的 臨床分組對照實驗 目的：通過 HCC+ PVTT臨床分組對照實驗，對肝動脈灌注藥物活性優(yōu)化組、臍靜脈灌注阿霉素組和臍靜脈灌注藥物活性優(yōu)化組施行前瞻性分組對照，從治療學(xué)角度研究其顯效率， 3 年生存率，二期手術(shù)切除率及負作用反應(yīng)率和從基因?qū)W角度運用基因芯片技術(shù)高通量觀察腫瘤相關(guān)基因譜差異性表達。探討藥物活性優(yōu)化經(jīng)臍靜脈治療HCC+PVTT的作用機制。 病例收集、選擇和分組 2病例選擇： 90名病例，來源于河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院在 2020年 — 2020年收治的住院病人，病理確診為 HCC+ PVTT；年齡 30— 65歲、性別不限。（一期手術(shù)行肝癌切除+門靜脈切開取癌栓術(shù)后，術(shù)后藥物治療 3個療程， 一期不能手術(shù)，術(shù)前藥物治療 1個療程后，二 期手術(shù)行肝癌切除 +門靜脈切開取癌栓術(shù)，術(shù)后藥物治療 2個療程，并計算 二期手術(shù)切除率）。 2病例分組為隨機分組原則 ①肝 動脈灌注藥物活性優(yōu)化治療組： 30例；亞砷酸注射液， 劑量 10mg/d，；派羅欣注射液 180μ g/d；丹參注射液， 劑量 10ml/d。聯(lián)合用藥 qd 21 天，間隔 4周重復(fù)，總共 3個療程。 ②臍靜脈灌注阿霉素治療組： 30 例；阿霉素注射液， 10mg/d， qd 21。間隔 4 周重復(fù)，總共 3個療程。 ③臍靜脈灌 注藥物活性優(yōu)化治 療組： 30 例，亞砷酸注射液， 劑量 10mg/d；派羅欣注射液 180μ g/d；丹參注射液， 劑量 10ml/d。聯(lián)合用藥 qd 21 天，間隔 4周重復(fù)，總共 3個療程。 腫瘤學(xué)研究數(shù)據(jù)分析 3治療學(xué)角度：研究顯效率， 3年生存率，手術(shù)切除率、二期手術(shù)切除率、負作用反應(yīng)率。 3從形態(tài)學(xué)角度：觀察腫瘤體積、抑癌率、抑轉(zhuǎn)移率 3基因芯片技術(shù)分析：運用腫瘤基因芯片（ BiostarⅠ）技術(shù)，高通量觀察高通 14 量觀察腫瘤凋亡相關(guān)基因、癌基因 、抑癌基因、腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因等相關(guān)基因譜表達，分析差異表達，研究 亞砷酸 +派羅欣 +丹參 經(jīng)臍靜脈灌注治療 HCC+ PVTT作用的分子機制。 統(tǒng)計學(xué)分析 計量資料以 χ 177。 S表示，使用 SPSS ，對計量資料進行他 t檢驗，對計數(shù)資料進行 RC? 表 χ 2檢驗， ? 認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 二、可行性分析 本課題基于大量臨床治療 HCC+ PVTT 病例、結(jié)合目前本領(lǐng)域研究動向的基礎(chǔ)上，采用手術(shù)聯(lián)合藥物活性優(yōu)化經(jīng)臍靜 脈貫序治療 HCC+ PVTT 新模式，已取得較好的臨床療效（初步得出“ HCC+ PVTT 臨床分組對照實驗”的 患 者的 3 年生存率提高 %、 %以上）。 為研究規(guī)范治療 HCC+PVTT的新策略， 通過人肝癌細胞株 BEL7402體外細胞實驗、高轉(zhuǎn)移人肝癌裸鼠模型 LCI— D20實驗和 HCC+ PVTT臨床分組對照實驗的基礎(chǔ)和臨床系列研究， 揭示其治療作用的機制。針對課題關(guān)鍵問題，在前期預(yù)實驗中進行研究和解決。通過預(yù)實驗對 BEL7402細胞的抑制作用呈現(xiàn)明顯的劑量效應(yīng)依賴關(guān)系。分析觀察兩種藥物聯(lián)用在很寬的效 應(yīng)范圍內(nèi)存在協(xié)同效應(yīng)與藥物應(yīng)用的先后順序是否無關(guān)。增加應(yīng)用 IC50法來判定兩種藥物的聯(lián)合作用。計算亞砷酸 +派羅欣、亞砷酸 +丹參和派羅欣 +丹參的兩兩藥物合用聯(lián)合作用指數(shù)，均為 CI≤ 1，可推斷亞砷酸 +派羅欣 +丹參的抗腫瘤細胞的藥物活性優(yōu)化效應(yīng)。對 臍靜脈置泵技術(shù)進行研究：改進 經(jīng)歷手術(shù)直視臍靜脈植泵，到腹腔鏡下輔助臍靜脈植泵 ，再 到 超聲定位下微創(chuàng)臍靜脈置泵技術(shù)改進。從 臍靜脈泵皮下留置時間 1年，到 改進后 2年，再到 導(dǎo)絲引導(dǎo)下臍靜脈泵更換技術(shù)后 35年。 從 臍靜脈再通技術(shù)，臍靜脈灌注化療門脈系血流動力學(xué)改變等一系列問題進行 預(yù)實驗研究，解決經(jīng)臍靜脈植泵的治療途徑的問題。 總之，通過預(yù)實驗，對通過人肝癌細胞株 BEL7402體外細胞實驗、高轉(zhuǎn)移人肝癌裸鼠模型 LCI— D20和臨床分組對照實驗，基本解決課題關(guān)鍵問題和修改課題研究方案，使課題的研究內(nèi)容充實、實驗方法可靠、技術(shù)路線清晰、確保本課題順利完成的可行性。 15 研究進度及完成期限 （課題總進度、年度計劃進度） 5年度研究計劃 實驗階段：（ 2020年 1月 — 2020年 9月） 第一部分（ 2020年 1月 — 2020年 4月） ：人肝癌細胞株 BEL7402體外細胞實驗，探討 亞砷酸 +派羅欣 +丹參的藥物活性優(yōu)化方案的抗腫瘤細胞效果。 第二部分（ 2020年 6月 — 2020年 8月） ：高轉(zhuǎn)移人肝癌裸鼠模型 LCI— D20實驗，探討亞砷酸 +派羅欣 +丹參的藥物活性優(yōu)化抗腫瘤的機制。 第三部分（ 2020年度 2020年 9月） ： HCC+ PVTT臨床分組對照實驗，探討藥物活性優(yōu)化經(jīng)臍靜脈治療 HCC+PVTT的治療作用的機制。 統(tǒng)計分析研究階段：（ 2020年 9月 2020年 12月） 數(shù)據(jù)以 X— 177。 S表示，使用 SPSS 。闡述 本課題采用手術(shù)聯(lián)合藥物活性優(yōu)化經(jīng)臍靜脈貫序治療 HCC+ PVTT新模式的作用 機制。 實現(xiàn)本課題目標已具備的條件和基礎(chǔ) （ ； 主要實驗設(shè)備； ； ） 工作基礎(chǔ) 1前期研究 ： 近年來在“惡性梗阻性黃疸模型的建立及評價”研究的基礎(chǔ)上，開展“丹參在肝癌致梗阻性黃疸時對腫瘤血管形成作用的研究”，發(fā)表了“肝癌浸潤轉(zhuǎn)移機制研究的新進展” 等國家級核心刊物論文 12 篇，因“丹參對肝 癌致惡性梗阻性黃疸治療作用實驗研究”課題，獲 2020年度全國醫(yī)學(xué)優(yōu)秀學(xué)術(shù)成果一等獎。 2020年采用肝癌切除 +臍靜脈植泵灌注治療原發(fā)性肝癌獲得成功（健康報 2020年 6月 2日第三版登載），隨即開展超聲定位下臍靜脈置泵灌注治療原發(fā)性肝癌以及 亞砷酸經(jīng)臍靜脈灌注治療肝癌 方面取得成效。 2020 年主持 河南省 科技廳的科技攻關(guān)項目“肝癌切除加臍靜脈植泵灌注治療原發(fā)性肝癌的臨床研究”。 2020 年主持省教育廳科技攻關(guān)項目“超聲定位下臍靜脈置泵灌注亞砷酸治療原發(fā)性肝癌臨床研究 ” 。 2020 年主持 河南省衛(wèi)生廳醫(yī)學(xué)科技攻關(guān)計劃項目 “ 基 因芯片對亞砷酸經(jīng)臍靜脈灌注治療原發(fā)性肝癌分子機制的研究 ”。 1本課題研究的預(yù)實驗 ： 解決課題的關(guān)鍵問題。調(diào)整了“人肝癌細胞株 BEL7402體外細胞實驗”各實驗組藥物劑量濃度，亞砷酸治療組的濃度為 10μ mol/L、派羅欣治療組的濃度 10μ g/L、丹參治療組濃度 ，初步得知 亞砷酸+派羅欣 +丹參聯(lián)合可達到抗癌 藥物活性的優(yōu)化。確定了“ 高轉(zhuǎn)移人肝癌裸鼠模型LCI— D20”的各實驗組藥物劑量和研究腫瘤發(fā)展影響的四個檢測指標 PCNA、 VEGF、 ICAM1 16 和 Apoptosis Index 和檢測的方法；初步得出“ HCC+ PVTT 臨床分組對照實驗”的 患者的 3 年生存率提高 %、 %以上；同時減少了全身化療反應(yīng)， 負作用反應(yīng)率明顯降低的。預(yù)實驗檢測數(shù)據(jù)與基本符合臨床實踐的結(jié)果，預(yù)實驗階段已取得成效，為本課題實驗順利實施提供有力保證。 工作條件 以河南大學(xué)消化疾病研究所、腫瘤實驗室以及病理實驗室的公共實驗設(shè)備為平臺。通過河南大學(xué)天然藥物研究所、醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)實驗室和河南大學(xué)植物逆境重點實驗室進行交叉學(xué)科協(xié)作。已具備各類病理學(xué)和實驗技術(shù)，陸續(xù)開展免疫組化檢查， ELISA法檢測 血液中 VEGF 及 ICAM1的含量，流式細胞儀檢測凋亡細胞技術(shù)等。熟練掌握細胞體外培養(yǎng)技術(shù)和動物實驗?zāi)Ｐ椭谱鳌? 完成本課題尚缺乏的主要條件和基礎(chǔ) 點樣儀（ Cartesion）、掃描儀（ Scanarray 4000）和圖像處理軟件（ Gene Pix Pro3）均有河南大學(xué)植物逆境重點實驗室提供。 DNA抽取，探針的制備，芯片雜交及洗滌，掃描分析結(jié)果均有河南大學(xué)醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)實驗室和河南大學(xué)消化疾病研究所完成。腫瘤基因芯片（ BiostarⅠ）有上海博星基因芯片責(zé)任有限公司購進。 17 申請者和主要合作者情況（ 、經(jīng)費來源以及能用于本課題的時間；