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染色體顯帶原理與技術(shù)-資料下載頁

2025-08-15 22:45本頁面
  

【正文】 17號染色體長臂的端帶最為鮮明, 1 1 1 21和 22號染色體末端也稍顯綠色, 1 X和 Y染色體不顯端帶。熱處理如持續(xù) 15~25分鐘。 11號染色體長臂近側(cè)段和 19號染色體短臂近側(cè)段,以及 22號染色體長臂近側(cè)段均顯示典型的中間綠帶。此法特別用于識別 22號染色體的長臂。熱處理 30分鐘或更長時間,就會出現(xiàn) R帶型。 性染色質(zhì)檢測技術(shù) ? X小體檢測技術(shù) ? Y小體檢測技術(shù) X小體檢測技術(shù) X小體 :在間期細(xì)胞核中,由于女性的兩條 X染色體中的一條基本處于失活狀態(tài)而形成一種特殊的深染的塊狀結(jié)構(gòu),稱為 X小體。 X小體與 X染色體的關(guān)系 用人體的體細(xì)胞,如口腔上皮細(xì)胞或女性個體的陰道上皮細(xì)胞,通過特異的處理和染色,在顯微鏡下可發(fā)現(xiàn)部分細(xì)胞核膜的內(nèi)緣有一塊染色較深、大小為 1μm左右的呈半月形的小塊,即 X小體。有些細(xì)胞中, X小體的位置不在核膜的內(nèi)緣,那就不容易與其他的染色質(zhì)塊區(qū)別了,所以一般只用緊貼于核膜內(nèi)緣的作為陽性。 根據(jù)有關(guān)實(shí)驗(yàn)查明一個分裂間期細(xì)胞核中僅 有一條 X染色體呈松散狀態(tài),參加細(xì)胞生理活 動,另一條 X染色體則仍保持異固縮的狀態(tài), 所以染色較深而成為 X小體。據(jù)此,正常男性 個體不可能出現(xiàn) X小體;正常女性可能出現(xiàn)一 個 X小體。其 X小體與 X染色體的關(guān)系如下 表,即 X小體數(shù)目等于 X染色體數(shù)目減 1。 性染色體的類型 性別 X小體的數(shù)目 X Y X O X X X X Y X X X X X X X 男 女 女 男 女 女 0 0 1 1 2 3 口腔粘膜細(xì)胞 X小體檢測法 漱口 3次,然后以木質(zhì)壓舌板刮取口腔頰部粘膜細(xì)胞,放入盛有生理鹽水的離心管中,搖動分散細(xì)胞。 用 1 000轉(zhuǎn) /分 離心 10分鐘,除去上清液,細(xì)胞沉淀物用3∶ 1的甲醇冰醋酸固定劑固定 10分鐘。 再用 1000轉(zhuǎn) /分離心 10分鐘,除去上清夜,向細(xì)胞沉淀物中加入幾滴新的 3:1的甲醇冰醋酸固定劑制成細(xì)胞懸液。 將細(xì)胞懸液滴入載玻片上,讓其在空氣中干燥后,放入5N HCl中處理 10分鐘,自來水中漂洗數(shù)秒鐘,放入 %甲苯胺藍(lán)染色液中染色 1~ 30分鐘,自來水漂洗,空氣中干燥后,在油鏡下依次觀察細(xì)胞核著色均質(zhì),核摸完整的細(xì)胞 100個,并計(jì)數(shù)具靠近核膜邊緣的半月形 X 小體的細(xì)胞數(shù) 羊水細(xì)胞 X小體檢測法 從中期妊娠 ( 16周左右 ) 的孕婦中 , 經(jīng)羊膜穿刺抽取羊水 5~10ml左右 , 放入離心管中 , 以 1000轉(zhuǎn) /分 離心 10分鐘 ,去上清液 , 加入 3:1甲醇冰醋酸固定劑 5~10ml,固定 30分鐘以后;再以 1000轉(zhuǎn) /分離心 10分鐘 , 去上清液 , 再加入新鮮的固定劑 3~5滴制成細(xì)胞懸液;然后按口腔粘膜細(xì)胞 X小體檢測法制片 , 染色和讀片 。 若抽取的羊水呈乳白色 , 則表明羊水中含胎脂過多 。 如不經(jīng)處理 , 對觀察有極大的妨礙 。 為此 , 可先用 1:1乙醚酒精處理 20分鐘 , 然后用 95%酒精固定 30分鐘后 , 按口腔粘膜 細(xì)胞制片法制片和讀片 。 絨毛膜細(xì)胞 X小體檢測法 取材方法與絨毛培養(yǎng)法相同。將絨毛枝 取出放在玻片上,置顯微鏡下觀察,確認(rèn)為 絨毛枝,則行兩片對合壓片 4~6張,立即放入 95%酒精中固定 15~20分鐘,取出晾干,用 %甲苯胺藍(lán)染色 1分鐘。然后,按口腔粘 膜細(xì)胞法進(jìn)行漂洗,干燥和鏡檢。 X小體 Y小體檢測技術(shù) Y小體: 男性 Y染色體長臂上的 DNA重復(fù)序列具有強(qiáng)烈的熒光著色性,稱為 Y小體。正常男性體細(xì)胞中只有一個 ,正常女性沒有。 Y小體和 Y染色體的關(guān)系 : 1970年 Caspersson等發(fā)表了人類第一張中期染色體熒光帶型照片,發(fā)現(xiàn) Y染色體長臂經(jīng)熒光染料染色后具有特異的輝煌的熒光。隨后,不同的研究者用同類的熒光染料對男性的各種間期細(xì)胞核,以及精子的頭部進(jìn)行染色,均可觀察到一個類似于 Y染色體長臂的直徑約。而在女性中則沒有。 從而確認(rèn) Y小體是 Y染色體長臂上的一部分。 人類 Y小體與 Y染色體的關(guān)系如下表: 性染色體的類型 性 別 Y小體的數(shù)目 XX 女 0 XY 男 1 XXY 男 1 XXXY 男 1 XYY 男 2 羊水細(xì)胞 Y小體檢測法 按檢查 X小體的方法獲得羊水細(xì)胞,進(jìn)行固 定,制片。用 %的阿的平染色液染色 15分 鐘以上,然后用 Mcllvaine磷酸緩沖 液洗去剩余的染色液,再滴上新的緩沖液 1~2 滴并加上蓋玻片,立即置熒光顯微鏡下用油 鏡進(jìn)行檢查。 血細(xì)胞 Y小體檢測法 取外周血 2~3滴 , 置于玻片中央 , 用玻棒涂敷成直徑約 1cm的圓形厚血片 。 待干后加上數(shù)滴 3%的冰醋酸固定 15分鐘左右 , 待紅細(xì)胞全部溶解后 , 用 Mcllvaime緩沖液徹底 沖洗 , 空氣干燥 。 再滴加 %阿的平水溶液染色 15分鐘 , 用緩沖液洗去剩余的染液后 , 再滴上新的緩沖液 1~2滴并加上蓋玻片 , 立即置熒光顯微鏡下用油鏡進(jìn)行檢查 。 絨毛細(xì)胞 Y小體檢測法 取材、制片同絨毛細(xì)胞 X小體檢查法,然后用 %的阿的平溶液染色 20分鐘左右,用 Mcllvaine緩沖液洗去剩余的染色液 后,再滴上新的緩沖液 1~2滴并加上蓋玻片, 立即置熒光顯微鏡下用油鏡進(jìn)行檢查。 Y小體
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