培訓課件：酶聯(lián)免疫吸附試驗(elisa)操作注意事項-資料下載頁
2025-08-09 15:38本頁面
【正文】 現(xiàn)象 可能原因 糾正方法 ( 一 ) 顯色淡、靈敏度低 1 ．試劑盒未平衡至室溫。 實驗前試劑盒置于室溫 30 分鐘以上。 2 ．培養(yǎng)箱溫度不到 37 ℃ 。 調整培養(yǎng)箱溫度至 37 ℃，保溫期內不宜多開門。 3 ．保溫時間不夠。 校準定時鐘準確定時。 4 ．樣品加樣量偏少。 校準移液 槍 ； 使吸嘴與移液 槍 接合緊密。 5 ．酶結合物加樣量偏少。 瓶身應垂直滴加，保證液滴最大。 6 ．底物作用時間不夠。 延長至標準時間。 現(xiàn)象 可能原因 糾正方法 8 ．蒸餾水被污染。 換用合格的蒸餾水或去離子水。 9 ．洗滌液配制不當。 準確稀釋濃縮洗滌液。 10 ．試劑盒在運輸途中時間太長，受高溫影響。 夏天長途運輸時，應注意降溫措施，并盡量縮短運輸時間。 ( 一 ) 顯色淡、靈敏度低 11 ．試劑盒超過有效期。 過期試劑不要使用。 1 ． 樣品數(shù)量較多，加樣時間過長。 2 ．加樣量不一致。 3 ．保溫時間 不一致。 4 ．洗滌條件不一致。 5 ． 不同批號試劑盒組分混用 。 （二） 重復性差 6 ．操作人員不同。 重復測定標本時，盡可能使用同一移液 槍 ，裝緊吸嘴，條件、人員應盡量與上次保持一致，以排除這些因素造成的重復性差的可能性。 1 ．把終止液誤當作酶結合物、或底物使用。 2 ．漏加 或錯加 試劑，如酶結合物、底物 A 、 B 液。 （三）滿板白，陽性對照不顯色。 3. 配制洗滌液 的 量筒受酶抑制物污染 。 嚴格按試劑說明書操作，加液時看準標簽， 選用潔凈量筒， 正確稀釋洗滌液 , 不要漏加試劑。 現(xiàn)象 可能原因 糾正方法 4 ．蒸餾水被污染 , 或盛洗滌液的瓶子被污染，留有使酶失活的物質。 換用合格的蒸餾水或去離子水。盛 放 洗滌液的瓶子要潔凈。 1 ．底物配制時間過長，或被污染。 更換底物。 2 ．加好底物后在保溫時，受強光或紫外線照射。 顯色時應避光保溫。 3 ． 孵育時間人為延長， 反應時間過長， 導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹底 。 準確定時。 4 ．培養(yǎng)箱溫度過高。 調準培養(yǎng)箱溫度。 5 ．加酶量過多， 50ul 誤認為 10 0ul 。 加液量、稀釋要準確。 6 ．該批樣品放置時間過長，樣品染菌。 樣品應新鮮，長期保存可于 20℃凍存，防止污染。 7 ． 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底 。 孵育時貼封片或加蓋 。 8. 洗滌不充分，反應孔中有酶殘留。 洗滌要充分。 （四）滿板顯色。 9 . 蒸餾水被污染。 換用合格的蒸餾水或去離子水。 謝 謝
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