培訓(xùn)課件：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(elisa)操作注意事項(xiàng)-資料下載頁(yè)
2025-08-09 15:38本頁(yè)面
【正文】 現(xiàn)象 可能原因 糾正方法 ( 一 ) 顯色淡、靈敏度低 1 ．試劑盒未平衡至室溫。 實(shí)驗(yàn)前試劑盒置于室溫 30 分鐘以上。 2 ．培養(yǎng)箱溫度不到 37 ℃ 。 調(diào)整培養(yǎng)箱溫度至 37 ℃，保溫期內(nèi)不宜多開(kāi)門。 3 ．保溫時(shí)間不夠。 校準(zhǔn)定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)。 4 ．樣品加樣量偏少。 校準(zhǔn)移液 槍 ； 使吸嘴與移液 槍 接合緊密。 5 ．酶結(jié)合物加樣量偏少。 瓶身應(yīng)垂直滴加，保證液滴最大。 6 ．底物作用時(shí)間不夠。 延長(zhǎng)至標(biāo)準(zhǔn)時(shí)間。 現(xiàn)象 可能原因 糾正方法 8 ．蒸餾水被污染。 換用合格的蒸餾水或去離子水。 9 ．洗滌液配制不當(dāng)。 準(zhǔn)確稀釋濃縮洗滌液。 10 ．試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長(zhǎng)，受高溫影響。 夏天長(zhǎng)途運(yùn)輸時(shí)，應(yīng)注意降溫措施，并盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間。 ( 一 ) 顯色淡、靈敏度低 11 ．試劑盒超過(guò)有效期。 過(guò)期試劑不要使用。 1 ． 樣品數(shù)量較多，加樣時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。 2 ．加樣量不一致。 3 ．保溫時(shí)間 不一致。 4 ．洗滌條件不一致。 5 ． 不同批號(hào)試劑盒組分混用 。 （二） 重復(fù)性差 6 ．操作人員不同。 重復(fù)測(cè)定標(biāo)本時(shí)，盡可能使用同一移液 槍 ，裝緊吸嘴，條件、人員應(yīng)盡量與上次保持一致，以排除這些因素造成的重復(fù)性差的可能性。 1 ．把終止液誤當(dāng)作酶結(jié)合物、或底物使用。 2 ．漏加 或錯(cuò)加 試劑，如酶結(jié)合物、底物 A 、 B 液。 （三）滿板白，陽(yáng)性對(duì)照不顯色。 3. 配制洗滌液 的 量筒受酶抑制物污染 。 嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書操作，加液時(shí)看準(zhǔn)標(biāo)簽， 選用潔凈量筒， 正確稀釋洗滌液 , 不要漏加試劑。 現(xiàn)象 可能原因 糾正方法 4 ．蒸餾水被污染 , 或盛洗滌液的瓶子被污染，留有使酶失活的物質(zhì)。 換用合格的蒸餾水或去離子水。盛 放 洗滌液的瓶子要潔凈。 1 ．底物配制時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，或被污染。 更換底物。 2 ．加好底物后在保溫時(shí)，受強(qiáng)光或紫外線照射。 顯色時(shí)應(yīng)避光保溫。 3 ． 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)， 反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)， 導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗徹底 。 準(zhǔn)確定時(shí)。 4 ．培養(yǎng)箱溫度過(guò)高。 調(diào)準(zhǔn)培養(yǎng)箱溫度。 5 ．加酶量過(guò)多， 50ul 誤認(rèn)為 10 0ul 。 加液量、稀釋要準(zhǔn)確。 6 ．該批樣品放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，樣品染菌。 樣品應(yīng)新鮮，長(zhǎng)期保存可于 20℃凍存，防止污染。 7 ． 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底 。 孵育時(shí)貼封片或加蓋 。 8. 洗滌不充分，反應(yīng)孔中有酶殘留。 洗滌要充分。 （四）滿板顯色。 9 . 蒸餾水被污染。 換用合格的蒸餾水或去離子水。 謝 謝
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