【正文】 6℃，此時菌種的新陳代謝活動已停止，但不會死亡。在配制好的菌液內(nèi)加10％甘油作為保護(hù)劑，分裝于安瓿中，置液氮罐內(nèi)可保存10年之久。⑨冷凍真空干燥保藏法：本法廣泛適用于各類微生物的保藏，包括病毒和噬菌體。將菌液混于有保護(hù)作用的介質(zhì)內(nèi)，分裝于滅菌菌種管內(nèi)，速凍后抽真空，使菌液很快變?yōu)槭杷傻母稍锞?，最后在真空狀態(tài)下密封管口，菌種保存期最長可達(dá)20年以上。3菌種檢查與復(fù)壯：菌種在傳代保藏過程中，易發(fā)生衰退、變異、污染、死亡，因此必須定期檢查。將菌種接種至液體培養(yǎng)基內(nèi)使之復(fù)活，重新分離，純化開成單個菌落，再作菌種檢定，包括菌落形態(tài)、顏色，染色性、鏡下觀察菌體形態(tài)等，必要時可做生化試驗(yàn)及血清學(xué)反應(yīng)。菌種經(jīng)人工傳代保藏過程中，由于自發(fā)突變而引起特性變?nèi)趸蛳鶠榫N衰退。使衰退的菌種重新恢復(fù)原來的優(yōu)良特性，稱為菌種復(fù)壯。常用方法有：①分離純化：將菌種接種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時，取菌液在營養(yǎng)瓊脂平板上分區(qū)劃線，培養(yǎng)后挑取典型單個菌落。②宿主復(fù)壯：將退化菌種接種到相應(yīng)昆蟲或動植物宿主體內(nèi)，傳種數(shù)代可恢復(fù)其原有的特性與毒力。③通過極端的逆境處理使那些退化的細(xì)菌死亡，選育健壯的傳代保種。4實(shí)驗(yàn)菌種的管理實(shí)驗(yàn)用菌（毒）種應(yīng)放入專用冰箱（帶鎖），專人保管，菌種應(yīng)有購入記錄，傳代記錄，使用銷毀記錄。菌種應(yīng)定期檢查、分離、純化，以防菌種變異及衰退。為了保持菌種原有的各種生物學(xué)特性保證實(shí)驗(yàn)菌種的質(zhì)量，近年來國外提出了使用菌種不超過五代的要求。雖然目前我國藥典對于菌種的傳代次數(shù)未做要求，我們實(shí)驗(yàn)中所用的陽性對照菌可能已經(jīng)傳了無數(shù)代，存在著菌種衰退、老化變異、不敏感等隱患，對于使用菌種不超過五代給我們提出了更高的要求。我們可以用以下方式傳代：凍干菌種→營養(yǎng)肉湯→半固體瓊脂或甘油水100支冰箱保存（原代）（一代）（二代）菌種的保藏條件及傳種時間─────────────────────────────────────菌種名稱培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間保存溫度傳種時間金黃色葡萄球菌營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基35～37℃1824h46℃2－3個月CMCCB26003藤黃微球菌營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基27～30℃24h46℃2－3個月CMCCB28001生孢梭菌需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基30～35℃1824h46℃6個月CMCCB64941白色念珠菌真菌瓊脂斜面培養(yǎng)基20～25℃24h46℃23個月CMCCF98001大腸桿菌營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基35～37℃1824h46℃2－3個月CMCCB44102沙門菌營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基35～37℃1824h46℃2－3個月CMCCB50094銅綠假單胞菌營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基35～37℃1824h25℃1個月CMCCB10104破傷風(fēng)梭菌皰肉瓊脂培養(yǎng)基37℃厭氧培養(yǎng)3－4天4－6℃612個月CMCCB64067枯草芽胞桿菌營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基35～37℃1824h4－6℃2－3個月CMCCB63501短小芽孢桿菌營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基35～37℃1824h4－6℃2－3個月CMCCB63202啤酒酵母菌真菌瓊脂斜面培養(yǎng)基32～35℃24h4－6℃4－6個月9763或麥芽計(jì)酵母膏瓊脂三、檢驗(yàn)記錄及檢驗(yàn)報告書書寫檢驗(yàn)記錄是出具檢驗(yàn)報告書的依據(jù)，是進(jìn)行科學(xué)研究和技術(shù)總結(jié)的原始資料，為保證藥品檢驗(yàn)工作的科學(xué)性和規(guī)范化，檢驗(yàn)記錄必須做到：記錄原始、真實(shí)、內(nèi)容完整、齊全，書寫清晰、整潔。藥品檢驗(yàn)報告書是對藥品質(zhì)量作出技術(shù)鑒定，是具有法律效力的技術(shù)文件。藥檢人員應(yīng)本著嚴(yán)肅、負(fù)責(zé)的態(tài)度，根據(jù)檢驗(yàn)記錄，認(rèn)真填寫檢驗(yàn)卡，要求做到；依據(jù)準(zhǔn)確，數(shù)據(jù)無誤，結(jié)論明確，文字簡潔、書寫清晰，格式規(guī)范，每一張藥品檢驗(yàn)報告書只針對一個批號。1檢驗(yàn)記錄的基本要求①原始檢驗(yàn)記錄應(yīng)用藍(lán)黑墨水或碳素墨水書寫，如用熱敏紙打印的數(shù)據(jù)，為防止日久褪色難以識別，應(yīng)將主要數(shù)據(jù)記錄于記錄紙上。檢驗(yàn)人員在檢驗(yàn)前應(yīng)注意檢品標(biāo)簽與檢驗(yàn)卡的內(nèi)容是否相符，逐一查對檢品的品名、規(guī)格、批號和效期、生產(chǎn)單位或產(chǎn)地以及樣品的數(shù)量和封裝情況。②檢驗(yàn)記錄中應(yīng)寫明檢驗(yàn)依據(jù)③實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：計(jì)算和結(jié)果判斷，均應(yīng)及時、完整的記錄，嚴(yán)禁事后補(bǔ)記或轉(zhuǎn)抄。如發(fā)現(xiàn)記錄有誤，可用短線劃去，并保持原有的字跡可辨，不得擦沫涂改，并應(yīng)在修改處簽名或蓋章，以示負(fù)責(zé)。檢驗(yàn)或試驗(yàn)結(jié)果，無論成?。òū匾膹?fù)試）均應(yīng)詳細(xì)記錄，保存。對廢棄的數(shù)據(jù)或失敗的實(shí)驗(yàn)，應(yīng)及時分析其可能的原因，并在原始記錄上注明。④對無菌檢查的要求：應(yīng)記錄培養(yǎng)基的名稱和批號，對照用菌液的名稱，供試品溶液的配制及預(yù)處理方法，供試品溶液的接種量，培養(yǎng)溫度，培養(yǎng)期間逐日觀察結(jié)果。⑤對微生物限度檢查的要求：應(yīng)記錄供試液的制備方法（如預(yù)處理方法），再分別記錄：a細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)和酵母菌在各培養(yǎng)基中各稀釋級的菌落數(shù)、空白對照中有無細(xì)菌、霉菌、酵母菌生長。計(jì)算結(jié)果判斷；b控制菌檢查結(jié)果的記錄，供試液與陽性對照菌增菌培養(yǎng)的條件及結(jié)果，分離培養(yǎng)時所用的培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件和培養(yǎng)結(jié)果（菌落形態(tài)），純培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基和G染色結(jié)果，生化試驗(yàn)的項(xiàng)目，名稱及結(jié)果，結(jié)果判斷；必要時應(yīng)記錄疑似菌進(jìn)一步鑒定的詳細(xì)條件和結(jié)果。⑥對檢測項(xiàng)目的書寫要求無菌檢查：在“標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定”項(xiàng)下寫“應(yīng)符合規(guī)定”，在“檢驗(yàn)結(jié)果”項(xiàng)下寫“符合規(guī)定”或“不符合規(guī)定”。微生物限度檢查：在“標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定”項(xiàng)下寫“應(yīng)符合規(guī)定”，在“檢驗(yàn)結(jié)果”項(xiàng)下寫“符合規(guī)定”；檢驗(yàn)不合格時，在“標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定”與“檢驗(yàn)結(jié)果”項(xiàng)下均應(yīng)寫具體，如化學(xué)片劑，細(xì)菌數(shù)“標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定”為100個/g，“檢驗(yàn)結(jié)果”200個/g，檢驗(yàn)結(jié)論：不符合規(guī)定。⑦檢驗(yàn)報告書的結(jié)論：內(nèi)容應(yīng)包括檢驗(yàn)依據(jù)和檢驗(yàn)結(jié)論，全檢合格，結(jié)論寫本品按中國藥典2000年版微生物限度檢查法檢驗(yàn)結(jié)果符合規(guī)定。只要有一項(xiàng)不符合規(guī)定，即判為不符合規(guī)定，結(jié)論寫：本品按（同上）檢驗(yàn)，結(jié)果不符合規(guī)定。如部分檢驗(yàn)品種，合格的寫：“本品按（同上）檢驗(yàn)上述項(xiàng)目結(jié)果符合規(guī)定”，如有一項(xiàng)不合格時，則寫“本品按（同上）檢驗(yàn)上述項(xiàng)目，結(jié)果不符合規(guī)定。”