【導讀】我國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展迅速，豬肉產量穩(wěn)居世界第一。2020年，中國豬肉產量5487萬。豬脂肪組織是豬胴體的重要組成部分，與動物的產肉力和肉質密切相關；脂。本項目歷時近10年，開展了豬脂肪沉積與脂肪細胞分化和凋亡的研究，取得如下創(chuàng)新成果?？刎i脂肪沉積的研究，為改善豬肉質性狀提供了新的思路；與Akt2互作通過C/EBPα和PI3K/Akt信號通路抑制豬脂肪細胞分。2020；中國農業(yè)科學,2020），表明可通過細胞凋亡的途徑控制豬脂肪沉積。內外動物脂肪沉積調控領域產生了重要影響；2020》雜志的積極評價；肪細胞分化聚脂能力顯著高于半腱肌肌內脂肪細胞。本項目發(fā)表的論文具有很高的引用率，說明本研究的這些成果引起了國內

　　

【正文】 Evolution 2020,60(8) Ming Li, Zhong Zhao, Xingjun Miao 13 Comparison of secondderivative spectrophotometry and HPLC for determination of amygdalin in wild apricot kernels ScienceAsia 2020,39(4) Miao Xingjun, Zhao Zhong, Zhu Hailan, Ming Li, Zhao Qingxia 14 Geic diversity and relationships of apricot cultivars in North China revealed by ISSR and SRAP markers Scientia Horticulturae 2020,173 Ming Li, Zhong Zhao, Xingjun Miao 15 Geic Diversity and Population Structure of Siberian apricot (Prunus sibirica L.) in China International Journal of Molecular Sciences 2020,15(1) Ming Li, Zhong Zhao, Xingjun Miao, Jingjing Zhou. 16 Study on the Comprehensive Utilization of Bitter Almond Shell Bioresources. 2020,9(3): Keyou Li, Haoyi Chen, Huang Yu ，Hailan Zhu,Qiaozhi Mao, Xihan Ma, Zhong Zhao, Tiancun Xiao 17 Acute toxicity of refined wild apricot oil in rats ScienceAsia 2020,40 Xingjun Miao, Zhong Zhao, Hongjiao Li, Ming Li, Hailan Zhu 20 七、 主要 完成人情況 姓名 排名 行政 / 技術職務 工作單位 /完成單位 對本項目技術創(chuàng)造性貢獻 趙忠 1 校黨委常務副 書 /教授 西北農林科技大學 負責項目總體技術方案的設計與組織實施，并負責山杏種質資源 遺傳多樣性 、山杏油脫苦工藝等研究。 李科友 2 副教授 西北農林科技大學 協(xié)助項目主持人制定總體研究方案，并負責苦杏仁精油工藝優(yōu) 化及生產。 魏安智 3 院黨委書記 /教授 西北農林科技大學 山杏種質資源調查 及品種選優(yōu)。 馬希漢 4 教授 西北農林科技大學 杏殼木醋液及活性炭研究及生產 。 朱海蘭 5 高級實驗師 西北農林科技大學 脫毒苦杏仁油工藝研究及生產 。 蔚芹 6 教授 西北農林科技大學 杏仁油渣蛋白提取 。 楊途熙 7 副教授 西北農林科技大學 山杏種質資源調查 及品種選育 李巨秀 8 副教授 西北農林科技大學 杏仁 皮黑 色素提取工藝研究 。 齊高強 9 項目科長 /助理研究員 西北農林科技大學 杏殼木醋液及活性炭研究及生產 。 苗興軍 10 博士研究生 山東省臨沂市森林病蟲害防治檢疫站 山杏苦杏仁苷分析 ，脫毒杏仁油安全性評價。 李明 11 博士研究生 福建農林大學 種質 資源遺傳多樣性分析。 八、主要完成單位情況 單位名稱 主要貢獻 西北農林科技大學 西北農林科技大學在該項目的研究過程中提供了必要的人力、物力、財力保障，優(yōu)先提供實驗室，特批改造一處實驗室作為中試生產車間，優(yōu)先安排該項目的實驗測試分析，提供了高效液相色譜、高效氣相色譜、中試精油提取罐及相關設備、 PCR儀、凝膠成像系統(tǒng)等試驗測試及加工設備。同時作為組織 管理單位為該項目提供了必要的科研信息咨詢、材料組織、人財務的協(xié)調、項目驗收鑒定、材料申報等，使該項目能順利按時完成科研任務。 21 申報 2020 年度 陜西省科學技術獎勵 項目公示內容 一、項目名稱： 奶山羊雄性生殖干細胞的發(fā)育與分化調控 二、 項目簡介： （ 一 ） 、研究背景和取得的主要成果 雄性生殖干細胞（ mGSCs）是位于雄性睪丸曲細精管基底膜的一類能自我更新并產生精子生成的成體干細胞，是成年動物體內唯一能將遺傳信息傳遞給子代的干細胞。 mGSCs的分離鑒定對人類臨床醫(yī)學以及發(fā)育生物學等基礎研究具有重要的理論與實 踐意義，對轉基因動物、優(yōu)良畜禽的快速擴繁和資源的保存與優(yōu)化具有重要價值。 mGSCs是目前生命科學領域的前沿和熱點，但其數(shù)量很少、分離純化和建系效率低，根本原因在于有關決定 mGSCs發(fā)育與分化的機理不清楚。 我們針對在我國畜牧業(yè)中具有重要地位的奶山羊 mGSCs開展研究，主要圍繞其分離培養(yǎng)及其誘導分化的技術體系、關鍵基因和 miRNA等展開研究，以揭示和闡明決定奶山羊 mGSCs發(fā)育分化的主要機理。自 2020年起，在國家自然科學基金、教育部新世紀優(yōu)秀人才支持計劃、 教育部重點科研 項目等資助下，進行了 奶山羊雄性生殖干 細胞的發(fā)育與分化調控 研究，取得如下成果： 1 奶山羊 mGSCs體外分離培養(yǎng)體系的建立 （ 1）系統(tǒng)地探索了培養(yǎng)基、細胞因子、 BIO、 A830細胞外基質等對奶山羊mGSCs克隆效率的影響； （ 2）建立了 CD90直接標記和 CD49f間接標記的免疫磁珠分選和純化奶山羊mGSCs的技術體系，證明其可有效用于分選和純化奶山羊 mGSCs； （ 3）建立了玻璃化冷凍液（ 20% EG+20% DMSO+ mol/l 蔗糖 + 20% 血清+TCM199）冷凍保存山羊睪丸組織能進行有效保存，復蘇后可以獲得 mGSCs； （ 4）體外轉導 SV40大 T抗原和 Bmi1基因的慢病毒至奶山羊 mGSCs，建立了永生化的奶山羊 mGSCs細胞系。該細胞株是目前報道的唯一一株永生化的大動物雄性生殖干細胞系。 2 奶山羊 mGSCs特異調控關鍵基因的克隆及其調控 mGSCs自我更新與分化的 22 機理 克隆了奶山羊 mGSCs相關重要基因（ Dazl、 Prm Boule、 Nanos2）和轉錄因子（ Plzf、 Ngn Msx1），并系統(tǒng)解析了其功能；證實其以獨特的方式調控著奶山羊mGSCs自我更新和分化。該研究進展已成為生殖干細胞和相關研究的參考和借 鑒。 3 奶山羊 mGSCs的 miRNAs表達譜及生殖特異性 miRNA作用機理 （ 1）利用奶山羊 mGSCs特異性標記 CD49f 結合免疫磁珠標記技術分選，深度測序獲取奶山羊 mGSCs的 miRNAs表達譜， 該研究是至今唯一在國際上解析了山羊睪丸和 分選 mGSCs的 miRNA表達譜的報道。 （ 2）精子發(fā)生和奶山羊 mGSCs特異性 miRNA的篩選與功能驗證 利用現(xiàn)代細胞和分子生物學技術分析和篩選了奶山羊雄性生殖發(fā)生特異 miRNA的作用及其可能機制，發(fā)現(xiàn)： miR34C通過靶向 Nanos2決定 mGSCs的自我更 新與分化； miR34C通過作用于下游靶基因 P53引起奶山羊 mGSCs的凋亡； miR204Sirt1調控軸對奶山羊 mGSCs自我更新和增殖凋亡具有重要的調控作用； miR544靶向PLZF調控奶山羊 mGSCs的自我更新； PLZF通過靶向抑制 miR146a促進 CXCR4表達調控奶山羊 mGSCs增殖。 （ 二 ） 、成果的創(chuàng)造性和先進性 （ 1）系統(tǒng)的研究了影響奶山羊 mGSCs離、培養(yǎng)的因素，建立了奶山羊 mGSCs體外分離培養(yǎng)體系，首次建立睪丸組織冷凍保存及復蘇分離培養(yǎng) mGSCs的技術體系和永生化的奶山羊雄 性生殖干細胞系； （ 2）成功誘導奶山羊 mGSCs分化為精子樣細胞，并系統(tǒng)研究了一系列相關重要基因和轉錄因子（ Boule、 Dazl、 Nanos Plzf、 Prm Ngn Msx Nanos3）在奶山羊 mGSCs自我更新和分化中的作用及機制； （ 3）揭示了奶山羊睪丸組織和 mGSCs發(fā)育分化相關的中的 miRNA表達譜，深入解析了一系列關鍵 miRNA（ miR34c、 miR54 miR146a和 miR302C等）調控 mGSCs自我更新與減數(shù)分裂的機制。 以上進展為解析動物和人類雄性生殖干細胞自我更新 與減數(shù)分裂機制提供了重要借鑒和基礎 ，為提高動物生殖干細胞和多能性干細胞的建系及定向分化效率提供了科學依據和新思路 。發(fā)表 SCI 論文 20 余 篇，多篇論文為相關學術論文的封面和高引用論文。在 20 多次全國性和國際性會議進行學術交流和講學，促進了相關學科和 23 研究的發(fā)展。 三、客觀評價：（包括該項目科技成果鑒定意見、國內外對本項目研究成果的引用情況） 評價一 ：在國家自然科學基金面上項目申請的批復中，專家評審意見：“家畜生殖干細胞研究是近幾年來生殖生物學與繁殖生物學的研究熱點之一，尤以精原干細胞與卵原干細胞研究為重點。雄性生 殖干細胞的發(fā)生、維持與分化功能與質量關系著公畜的生殖能力與生殖質量。申請人已經在奶山羊雄性干細胞研究方面取得了突出成績，其研究水平基本可以代表羊的生殖干細胞的國際水平?！? 評價二： 本項目組在 Plos One、 Journal of Cellular Biochemistry、 Cell Proliferation、Molecular Biology Reports、 Anim Reprod Sci、 Theriogenology等國際 SCI學術刊物發(fā)表論文 23篇（已被引 162次 ，他引 60余次 ）。發(fā)表的 2篇論文（ [10] Song W, Zhu H, Li M, Li N, Wu J, Mu H, Yao X, Han W, Liu W, Hua J*. (2020) Promyelocyticleukaemia zinc finger maintains selfrenewal of male germline stem cells (mGSCs) and its expression pattern in dairy goat testis. Cell Prolif, 46, 457468； [11] Li M, Yu M, Liu C, Zhu H, He X, Peng S, Hua J*. (2020) miR34c works downstream of p53 leading to dairy goat male germline stemcell (mGSCs) apoptosis. Cell Prolif, 46, 22331）入選 Cell Proliferation期刊的 20202020年度高被引用論文 ； 1篇論文（ [19] Zhang S, Sun J, Pan S, Zhu H, Wang L, Hu Y, Cao H, Yan X, Hua J*. (2020) Retinol (vitamin A) maintains selfrenewal of pluripotent male germline stem cells (mGSCs) from adult mouse testis. J Cell Biochem, 112, 1009–1021被選為該期雜志的封面 Story。 評價三： 奶山羊雄性生殖干細胞發(fā)育分化相關的 miRNA表達譜及雄性生殖干細胞特異 miRNA 研 究 被 十 多 個 生 物 學 相 關 網 站 進行了 報道（ 35925。cs/,究 是至今唯一在國際上解析了山羊睪丸和雄性生殖干細胞特異的分選細胞 miRNA表達譜的報道（ ），已上傳至國際miRBase，成為生殖干細胞研究相關的標準和參考。 評價四： 克隆 的 一批生殖干細胞發(fā)育分化相關的關鍵基因和轉錄因子 （ Boule、 24 Dazl、 Nanos Plzf、 Prm Ngn Msx Nanos Scp3等 ） ，均已上傳至 Genebank，為生殖細胞和精子發(fā)生及重編程等研究提供了新模型。 四、 推廣應用情況 項 目組在《 Journal of Cellular Biochemistry》、《 Cell Proliferation》、《 Molecular Biology Reports》、《 Anim Reprod Sci》、《 Theriogenology》等國際 SCI 學術刊物發(fā)表論文 20 余篇?！吨袊锘瘜W與分子生物學報》、《中國農業(yè)科學》、《畜牧獸醫(yī)學報》、《中國獸醫(yī)學報》、《農業(yè)生物技術學報》、《中國細胞生物學學報》等重要學術期刊發(fā)表有關雄性生殖干細胞研究文章 17 篇。申請國家發(fā)明專利 7 項，授權 4 項。先后應邀參加全國和 國際性有關干細胞和生物技術及生殖生物學重要專業(yè)學術研討會 20 余次，交流報告學術論文 30 余篇。 發(fā)明專利“一種雌性生殖干細胞的體外分離及培養(yǎng)方法”已被陜西九州生物醫(yī)藥科技集團有限公司購買。構建