【正文】 電化學(xué)發(fā)光方法、熒光、生物質(zhì)譜以及簡單便捷的可視化檢測模式，研究納米探針的跨膜機制，與細(xì)胞表面及胞內(nèi)組分作用的動態(tài)過程，并對細(xì)胞的凋亡進(jìn)行原位誘導(dǎo)與檢測，開展惡性血液病診斷和預(yù)后評估的基礎(chǔ)性研究。3．采用優(yōu)化的納米探針對小鼠模型中腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及化療藥物干預(yù)進(jìn)行分子影像學(xué)示蹤和監(jiān)測，實現(xiàn)對腫瘤的靶向及對腫瘤新生血管的分子成像，對腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移（浸潤）的過程進(jìn)行影像學(xué)研究，結(jié)合化療藥物（或抗體藥物）的干預(yù)，研究對治療效果的分子影像學(xué)評價方法，為淋巴瘤、骨髓瘤等血液惡性腫瘤的早期檢測和療效評價提供依據(jù)和方法。4．研究納米粒子從血液循環(huán)進(jìn)入體內(nèi)后對肝、腎、脾功能，特別是造血功能的影響，確定納米材料在血液循環(huán)系統(tǒng)安全應(yīng)用的水平。全面總結(jié)納米粒子對血液免疫細(xì)胞的作用，研究安全的白血病納米免疫治療方法。1．闡述Gpr家族成員或其它白血病相關(guān)基因可能導(dǎo)致白血病的分子機制；進(jìn)一步理解Bcl11a基因的導(dǎo)致白血病的作用機制；確證上述工作中可能尋找到的新的白血病相關(guān)基因。完成FUSERG融合基因致白血病機制的細(xì)胞和動物實驗。闡明致病相關(guān)基因在慢性粒細(xì)胞白血病中的分子機制，提供該基因蛋白產(chǎn)物可能成為預(yù)后指標(biāo)或治療靶點的理論和實驗基礎(chǔ)。闡明E3在白血病中的生物學(xué)功能和臨床診治意義。進(jìn)一步確定這些分子標(biāo)記在對中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病高危預(yù)警和診斷中的臨床價值，在恰當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)推廣。2．發(fā)展12種有臨床應(yīng)用前景的、可以為血液惡性腫瘤的診斷和預(yù)后評估提供幫助的新技術(shù)和新方法。3．實現(xiàn)對腫瘤的靶向及對腫瘤新生血管的分子成像，對腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移（浸潤）的過程進(jìn)行影像學(xué)追蹤，建立對治療效果的分子影像學(xué)評價方法。4．明確納米粒子從血液循環(huán)進(jìn)入體內(nèi)后對肝、腎、脾功能，特別是造血功能的影響，確定納米材料在血液循環(huán)系統(tǒng)安全應(yīng)用的水平。對課題進(jìn)行全面總結(jié)，確立1～3種提升抗白血病免疫反應(yīng)的納米材料，建立相關(guān)應(yīng)用技術(shù)流程和方法，建立針對T淋巴細(xì)胞性白血病的納米免疫治療新方法。發(fā)表35篇左右研究論文，申請發(fā)明專利6－8項。一、研究內(nèi)容血液是維持機體正常運轉(zhuǎn)、保證機體處于健康狀態(tài)的核心要素。血細(xì)胞在造血器官或組織中產(chǎn)生，發(fā)育成熟或接近成熟時才釋放到血液中。當(dāng)發(fā)生先天性造血功能缺陷或骨髓成分的惡性轉(zhuǎn)變，會導(dǎo)致血液惡性腫瘤的發(fā)生。本項目的核心科學(xué)問題是具有生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用前景的納米材料對血細(xì)胞的作用過程及其機理，探索相關(guān)納米材料與器件在血液惡性腫瘤的發(fā)病機制、早期檢測與診斷、臨床干預(yù)和治療中的新理論和新方法。主要研究內(nèi)容如下：1．納米探針的設(shè)計、合成、構(gòu)建及生物效應(yīng)研究利用單克隆抗體技術(shù)、指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進(jìn)化（SELEX）技術(shù)篩選針對不同血液惡性腫瘤的標(biāo)志物；基于納米技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)，構(gòu)建具有特異性生物識別和示蹤功能的納米探針；研究用于血液惡性腫瘤體內(nèi)檢測的磁性納米粒子診斷制劑和醫(yī)學(xué)影像納米探針的構(gòu)建方法。通過對納米粒子的表征、疾病標(biāo)志物在粒子表面的活性研究，探索納米探針的結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系。2．納米探針與靶細(xì)胞的體外作用過程及檢測研究構(gòu)建血細(xì)胞動態(tài)生理過程研究的微流控芯片平臺；研究納米探針與正常血細(xì)胞的相互作用，研究納米探針的血液相容性、靶向性；研究納米探針與血液惡性腫瘤細(xì)胞的作用，發(fā)展血液惡性腫瘤細(xì)胞的原位、實時、動態(tài)信息的采集和分析新方法。3．以納米材料為基因載體篩選白血病相關(guān)基因的研究建立適合惡性血液病研究中常用的細(xì)胞模型的納米載體基因遞送系統(tǒng)；基于納米載體對基因的高效遞送，結(jié)合遺傳篩選策略和基因分子成像技術(shù)，利用小鼠模型和骨髓細(xì)胞體外培養(yǎng)實驗體系，尋找與干細(xì)胞生長、凋亡相關(guān)的基因。明確Gpr家族成員、Bcl11a和FUSERG等白血病相關(guān)基因在白血病發(fā)生中所起的作用和可能的分子致病機制，確認(rèn)新的白血病相關(guān)基因。建立使用納米載體遞送RNA干擾（shRNA）或cDNA文庫的系統(tǒng)；并使用它鑒定到能參與調(diào)控正常/白血病干/祖細(xì)胞的重要基因和參與重要藥物反應(yīng)的靶向基因。 4．納米材料對白細(xì)胞的作用及其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病形成機理研究中的應(yīng)用建立納米體外示蹤技術(shù)和體外血腦屏障模型，研究納米材料對白血病細(xì)胞的作用，以納米探針標(biāo)記白血病細(xì)胞，研究白血病細(xì)胞髓外浸潤的機理，應(yīng)用自建的CNSL的小鼠動物模型及人工制作的體外血腦屏障，尋找和確認(rèn)影響白血病細(xì)胞黏附、穿透、遷徙相關(guān)的基因，以及與造血微環(huán)境相互作用相關(guān)的靶基因，預(yù)測白血病細(xì)胞髓外浸潤（尤其是中樞神經(jīng)系統(tǒng)浸潤）的高危預(yù)后因素，并建立干預(yù)策略。揭示白血病細(xì)胞對血腦屏障的破壞作用及白血病細(xì)胞在體內(nèi)髓外組織器官的浸潤、轉(zhuǎn)移和擴散機理。5．納米探針及相關(guān)影像學(xué)方法研究基于磁性納米粒子的模擬酶特性，采用偶聯(lián)了循環(huán)惡性淋巴瘤細(xì)胞、骨髓瘤和循環(huán)血管內(nèi)皮細(xì)胞（CEC）特異性抗體的磁性免疫納米探針，進(jìn)行目標(biāo)細(xì)胞的富集與分離的新方法研究及動態(tài)聚集的分子影像信號放大機制研究。研究新型金屬納米粒子CT造影劑及其與納米探針的結(jié)合方法，利用自主研制的MicroCT開展細(xì)胞/多細(xì)胞成像研究和CT功能影像研究；設(shè)計和研究多模式、多靶點醫(yī)學(xué)影像納米探針，用于磁共振－超聲聯(lián)合造影劑的研究，進(jìn)一步增強醫(yī)學(xué)影像研究的系統(tǒng)性和精確性，從而獲得具有重要應(yīng)用前景的分子影像探針，以及后續(xù)多模式聯(lián)合成像及圖像融合分析技術(shù)的研究。6．動物模型及腫瘤在體監(jiān)測與治療評價研究。建立惡性淋巴瘤、骨髓瘤等血液惡性腫瘤小鼠模型，研究上述納米探針特性及進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)后的表面重構(gòu)、自組裝等對其生物分布和對靶器官（靶細(xì)胞）作用的影響，研究探針靶向性行為的尺寸和表面依賴性；通過納米探針的優(yōu)化，實現(xiàn)對腫瘤的靶向及對腫瘤新生血管的造影，對腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移（浸潤）及治療（干預(yù)）進(jìn)行影像學(xué)研究。7．納米粒子的表面修飾及其對巨噬細(xì)胞的功能的調(diào)控作用納米粒子的免疫學(xué)效應(yīng)取決于其物理形狀、尺寸、電荷性質(zhì)、表面化學(xué)組成。通過對納米粒子進(jìn)行表面修飾，可以調(diào)控納米粒子的免疫學(xué)效應(yīng)。在細(xì)胞和動物模型上研究納米粒子表面的氨基化、羧基化、PEG化對其免疫學(xué)效應(yīng)的影響規(guī)律，主要包括對巨噬細(xì)胞的腫瘤細(xì)胞殺傷功能、巨噬細(xì)胞不同亞型的比例及相互間的轉(zhuǎn)換、細(xì)胞因子譜中不同因子的表達(dá)水平的影響。8．納米粒子對樹突細(xì)胞的作用及其在白血病免疫治療中的應(yīng)用基礎(chǔ)研究研究上述不同納米材料對血液中樹突細(xì)胞免疫功能的調(diào)控作用，主要包括：（1）探討納米材料是否促進(jìn)樹突細(xì)胞成熟，促進(jìn)樹突細(xì)胞完全分化；（2）納米材料與腫瘤相關(guān)抗原結(jié)合是否能夠促進(jìn)腫瘤抗原的遞呈并調(diào)控相關(guān)的抗腫瘤（抗白血?。┑拿庖咝?yīng)。9．納米材料對T淋巴細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞的作用研究上述不同納米材料對T淋巴細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路和電生理信號系統(tǒng)的作用，包括（1）納米材料對K+通道、鈣信號系統(tǒng)、和Na+通道的影響，探討上述離子通道的改變在T淋巴細(xì)胞性白血病治療中的靶點地位。（2）納米材料對免疫細(xì)胞和白血病細(xì)胞膽堿能信號系統(tǒng)的作用，特別關(guān)注乙酰膽堿受體亞型的表達(dá)和功能的改變在免疫細(xì)胞功能活動中的意義。（3）研究納米材料對外周血淋巴細(xì)胞ROS和TLR4TRIFTRAF6NFkB細(xì)胞因子風(fēng)暴信號通路相關(guān)的炎性反應(yīng)上游激活機制。10．納米材料在體內(nèi)組織和器官內(nèi)的分布研究納米粒子從血液循環(huán)進(jìn)入體內(nèi)后的分布，特別是在肺、脾臟和淋巴結(jié)等循環(huán)器官和關(guān)鍵免疫器官中的分布狀況，對肝、腎、脾功能，特別是造血功能的影響，確定納米材料在血液循環(huán)系統(tǒng)安全應(yīng)用的水平。23 /