【正文】 的白細(xì)胞上，儀器在四個(gè)角度搜集散射光信號(hào)：O176。、10176。、90176。、90176。消偏振，分別反映細(xì)胞大小、細(xì)胞復(fù)雜性、細(xì)胞內(nèi)部顆粒和細(xì)胞分葉情況、核漿比等。儀器第一步通過1O176。、90176。測(cè)得單核和多葉核細(xì)胞；第二步通過0176。、10176。按大小、內(nèi)部復(fù)雜情況不同測(cè)得嗜堿、淋巴、單核；90176。、90176。消偏振將分葉核細(xì)胞區(qū)分為中性分葉核和嗜酸性分葉核。此外，CD3700為了消除抵抗性紅細(xì)胞對(duì)白細(xì)胞總數(shù)的影響，還單獨(dú)采用了電阻抗方法測(cè)白細(xì)胞總數(shù)，并與散射光的結(jié)果相復(fù)核以求得更準(zhǔn)確的結(jié)果。（3）光散射和過氧化物酶染色技術(shù)在Bayer ADVIA120五分類檢測(cè)技術(shù)中，除了采用光散射信號(hào)以外，還加入了過氧化物酶染色的技術(shù)以提高分類的準(zhǔn)確性。白細(xì)胞分類檢測(cè)通道內(nèi)，稀釋液內(nèi)加有髓過氧化物酶（MPO）的底物過氧化氫和色原，可使含MPO 的細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)深色沉淀。由于嗜中性細(xì)胞MPO為強(qiáng)陽性,嗜酸性細(xì)胞更強(qiáng),單核細(xì)胞為弱陽性,淋巴細(xì)胞為陰性，嗜堿性細(xì)胞亦為陰性（另外檢測(cè)通道檢測(cè)）,通過鹵素?zé)艄馍⑸浜图?xì)胞化學(xué)染色，得到吸光率（過氧化物酶反應(yīng)強(qiáng)度）和光散射信號(hào)（細(xì)胞大小），在散點(diǎn)圖上區(qū)分出白細(xì)胞的分類結(jié)果。而在嗜堿性 / 核葉 (Lobularity)通道上，用一種PH值低的表面活性劑溶液,將嗜中性、嗜酸性、淋巴和單核細(xì)胞的胞膜溶去,剩下裸核。嗜堿性細(xì)胞則不受影響被保留，然后通過半導(dǎo)體激光照射,分別由低角度(0176。5176。)和高角度(5176。15176。)散射光反映細(xì)胞大小和細(xì)胞的核葉及大小。嗜堿細(xì)胞未被溶解,體積大,核葉多,核大,在散點(diǎn)圖低角度和高角度散射光均強(qiáng), 可明顯與嗜中性細(xì)胞( PMN)、單核(MN) 區(qū)分開。（4）核酸染色和半導(dǎo)體激光流式原理最新推出的XE2100、XT2000i/1800i系列儀器上，散射光轉(zhuǎn)而采用側(cè)向信號(hào)用以反映細(xì)胞內(nèi)部信息（主要是顆粒的復(fù)雜性）。試劑中還增加了特異性針對(duì)DNA/RNA染色的熒光染料Polymethine(聚次甲基染料)。激光照射后產(chǎn)生熒光信號(hào)，和側(cè)向散射光一道繪制成二維散點(diǎn)圖進(jìn)行白細(xì)胞分類。另外，針對(duì)數(shù)目最少的嗜堿性細(xì)胞，儀器都單獨(dú)設(shè)置檢測(cè)通道。酸性溶血素把除了嗜堿性細(xì)胞以外的白細(xì)胞脫核，紅細(xì)胞被徹底溶解。然后通過前向和側(cè)向散射光檢測(cè)嗜堿性細(xì)胞。白細(xì)胞總數(shù)也由此通道測(cè)得，由于與白細(xì)胞分類通道獨(dú)立而可以采用強(qiáng)烈溶血素，使得部分紅細(xì)胞溶解不全的標(biāo)本也可以得到準(zhǔn)確的白細(xì)胞總計(jì)數(shù)。（三） 幼稚白細(xì)胞分析白細(xì)胞中的幼稚成份在臨床上具有顯著意義。過去，此類標(biāo)本主要依靠人工鏡檢。隨著血液分析儀檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，儀器對(duì)于幼稚白細(xì)胞的報(bào)警提示越來越靈敏。Beckman Coulter的VCS技術(shù)使用三種技術(shù)對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)并且繪制成三維圖形，在正常細(xì)胞之外會(huì)出現(xiàn)異常細(xì)胞的報(bào)警區(qū)域，如髓細(xì)胞、未成熟粒細(xì)胞、桿狀核細(xì)胞、異形淋巴等。通過一些特異性的化學(xué)手段，五分類儀器還可以進(jìn)行幼稚白細(xì)胞的定量檢測(cè)。如Bayer ADVIA120采用的過氧化物酶染色原理，使體積較大而未染色的幼稚白細(xì)胞單獨(dú)分群，報(bào)為L(zhǎng)UC，鏡下復(fù)檢多為原始細(xì)胞和異常淋巴。而SYSMEX XE2100采用核酸熒光染色后，根據(jù)細(xì)胞成熟度的不同可以體現(xiàn)在其熒光信號(hào)的強(qiáng)弱上，其白細(xì)胞分類通道出正常細(xì)胞分類外，還有兩個(gè)幼稚白細(xì)胞的定量參數(shù)：IG（幼稚粒細(xì)胞）和Other（原始細(xì)胞/異常淋巴）。有一種觀點(diǎn)認(rèn)為：再先進(jìn)的血液分析儀都是過篩的工具。因此，只要儀器報(bào)告有幼稚細(xì)胞，便應(yīng)該鏡檢復(fù)核。此時(shí)的問題是，（1）儀器是否能夠非常靈敏地檢測(cè)出幼稚細(xì)胞的存在。（2）儀器是否能否提示何種幼稚細(xì)胞。此時(shí)，幼稚細(xì)胞的數(shù)目并不重要，而能夠把早期患者外周血內(nèi)存在的極少量幼稚細(xì)胞檢測(cè)出來，避免漏診、誤診的發(fā)生，則為問題的關(guān)鍵。在這方面，SYSMEX XE2100設(shè)置了單獨(dú)的幼稚白細(xì)胞檢測(cè)通道。幼稚白細(xì)胞較成熟白細(xì)胞細(xì)胞膜表面脂類少，氨基酸較易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。因此，當(dāng)其與含有氨基酸和表面活性成分的溶血素作用時(shí)，氨基酸首先進(jìn)入幼稚白細(xì)胞內(nèi)，從而延遲了表面活性成分的作用，而成熟白細(xì)胞則與紅細(xì)胞一起被溶解。通過化學(xué)處理后的血樣，再通過射頻（檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜度）、電阻抗（檢測(cè)細(xì)胞大?。┰砑纯蓸O其靈敏地測(cè)得幼稚白細(xì)胞，并提供其細(xì)胞分布的散點(diǎn)圖。三、 血紅蛋白分析技術(shù) 血液分析儀分析血紅蛋白的技術(shù)相對(duì)簡(jiǎn)單，幾乎所有儀器采用的原理基本相同，即比色法。稀釋后的血液加入溶血素后，紅細(xì)胞被溶解并釋出血紅蛋白并與試劑結(jié)合形成血紅蛋白衍生物。儀器再在檢測(cè)通道內(nèi)用特定的波長(zhǎng)進(jìn)行比色，通過吸光度的變化來反映血液內(nèi)血紅蛋白的含量。不同儀器其溶血素中配方會(huì)有不同，其吸收光譜各異，但最大吸收光譜均接近540nm。大多數(shù)廠家溶血素中均含有氰化鉀，和血紅蛋白作用結(jié)合后形成氰化血紅蛋白。需要注意的是ICSH推薦的是手工氰化高鐵血紅蛋白法，儀器方法吸收光譜與之有所不同，但是校準(zhǔn)必須以ICSH推薦方法為標(biāo)準(zhǔn)。近年來，出于環(huán)保和廢棄物處理的考慮，有部分血液分析儀開始采用不含氰化物的溶血素檢測(cè)血紅蛋白。最早開發(fā)的是SYSMEX的十二烷基磺酸鈉方法，不含氰化物且結(jié)果與ICSH結(jié)果有良好的相關(guān)性。目前SYSMEX所有全自動(dòng)血液分析儀均已經(jīng)采用試劑無氰化技術(shù)，而其他制造商也在相繼開發(fā)環(huán)保試劑，這是血紅蛋白檢測(cè)技術(shù)的一個(gè)顯著的趨勢(shì)。三、儀器的應(yīng)用實(shí)例本節(jié)以SYSMEX XE2100五分類血液分析儀為例做血液分析技術(shù)的應(yīng)用介紹。作為全球領(lǐng)先的血液分析儀器制造商，SYSMEX在20世紀(jì)90年代中期已經(jīng)能夠生產(chǎn)半自動(dòng)二分群、全自動(dòng)三分群、全自動(dòng)五分類及全自動(dòng)網(wǎng)織紅分析儀的系列化產(chǎn)品以滿足不同層次用戶的需求。但隨著實(shí)驗(yàn)室對(duì)標(biāo)本處理能力的要求越來越高，同時(shí)希望篩選效率更高，并要求網(wǎng)絡(luò)化遠(yuǎn)程診斷及數(shù)據(jù)傳輸，SYSMEX于90年代末期開始研制面向二十一世紀(jì)的新一代血液分析儀。XE2100全自動(dòng)血液分析儀作為具有最快處理速度、最佳檢測(cè)性能的產(chǎn)品，于2000年上市并引入中國，目前已在國內(nèi)近50家省級(jí)、醫(yī)科大附屬醫(yī)院的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)（截至2003年4月）。XE2100由于采用了非常先進(jìn)的檢測(cè)原理和分析技術(shù)，具備了其他五分類血液分析儀所不具備的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)：168。 最快的測(cè)定速度：每小時(shí)測(cè)定150個(gè)標(biāo)本。168。 獨(dú)特的可選式PLT雙方法檢測(cè)技術(shù)：除采用鞘流電阻抗原理檢測(cè)RBC/PLT以外，XE2100更具有激光染色形態(tài)檢測(cè)技術(shù)得到更準(zhǔn)確的PLT結(jié)果168。 最新激光檢測(cè)技術(shù)及熒光核酸染色方法：XE2100不僅在白細(xì)胞分類方面，而且在NRBC(有核紅細(xì)胞)、RET(網(wǎng)織紅細(xì)胞)測(cè)定方面均應(yīng)用了半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)，同時(shí)結(jié)合細(xì)胞化學(xué)熒光染色，使細(xì)胞分析的準(zhǔn)確度和靈敏度有了極大的提高。168。 多通道高精度檢測(cè)：具有單獨(dú)的WBC/BASO、DIFF、NRBC、IMI、RBC/PLT、HGB、RET檢測(cè)通道和專用試劑，使分析精度達(dá)到前所未有的高度。168。 全新的血液學(xué)檢測(cè)參數(shù)：NRBC、HPC、IG、IMR等定量參數(shù)及IMI檢測(cè)功能為臨床提供一般血液分析儀所不具備血液分析信息。168。 靈活的檢測(cè)模式和真正隨機(jī)進(jìn)樣分析：CBC、DIFF、NRBC、RET七種檢測(cè)模式靈活組合，滿足臨床不同標(biāo)本檢測(cè)要求，并節(jié)約試劑成本；真正隨機(jī)進(jìn)樣分析功能可實(shí)現(xiàn)完全無人化的操作。168。 強(qiáng)大的網(wǎng)絡(luò)功能：Windows NT操作系統(tǒng)，可與實(shí)驗(yàn)室及醫(yī)院的局域網(wǎng)、國際互聯(lián)網(wǎng)的連接，為實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)程技術(shù)服務(wù)、在線質(zhì)控等功能提供軟件支持。168。 靈活的系統(tǒng)擴(kuò)展能力：可雙機(jī)連接，或與全自動(dòng)網(wǎng)織紅分析儀、全自動(dòng)推片染色機(jī)連接成實(shí)驗(yàn)室全自動(dòng)檢驗(yàn)流水線。二、檢測(cè)原理1． RBC/PLT分析RBC/PLT檢測(cè)通道：雙鞘流法結(jié)合電阻抗原理紅細(xì)胞/血小板仍采用經(jīng)典電阻抗原理檢測(cè)，浮動(dòng)界標(biāo)技術(shù)進(jìn)行直方圖解析。雙鞘流（前鞘流和后鞘流）使流經(jīng)檢測(cè)部的RBC/PLT保證逐個(gè)通過，徹底避免細(xì)胞并列通過、側(cè)向通過、細(xì)胞回流重復(fù)通過帶來的檢測(cè)誤差。2． WBC分析: 采用專用WBC/BASO和WBC DIFF檢測(cè)通道、半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞原理結(jié)合細(xì)胞化學(xué)熒光染色技術(shù)（1）半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞技術(shù)。新型半導(dǎo)體激光采用633nm激光束進(jìn)行細(xì)胞檢測(cè)，半導(dǎo)體激光較老一代的氣體（氦氖、氬氣）激光相比具有工作壽命長(zhǎng)、體積小、啟動(dòng)快、耗電省、功率小的優(yōu)點(diǎn)，從而降低使用成本并方便維護(hù)保養(yǎng)。通過采用流式細(xì)胞技術(shù)，儀器對(duì)每個(gè)通過檢測(cè)部位的細(xì)胞或顆粒進(jìn)行逐個(gè)分析，具有檢測(cè)速度快、測(cè)量指標(biāo)多、數(shù)據(jù)采集量大、對(duì)所測(cè)細(xì)胞或顆?？梢赃M(jìn)行分選等多項(xiàng)特點(diǎn)。（2）單獨(dú)的WBC/BASO和WBC DIFF檢測(cè)通道及DNA、RNA熒光染色、專用的BASO試劑，使XE2100獲得非常準(zhǔn)確的WBC總數(shù)和分類結(jié)果。另外，IG（未成熟粒細(xì)胞）、%和OTHER（相當(dāng)于原始細(xì)胞和異常淋巴細(xì)胞）、%提供了準(zhǔn)確的異常細(xì)胞參數(shù)。激光獲得的熒光信號(hào)、散射光信號(hào)繪制成WBC/BASO、WBC DIFF兩個(gè)散點(diǎn)圖，通過適應(yīng)性簇分析系統(tǒng)(.)進(jìn)行結(jié)果分析，從而獲得準(zhǔn)確、可靠的檢測(cè)結(jié)果。WBC DIFF檢測(cè)通道：加入特殊的WBC分類溶血?jiǎng)┖途鄞渭谆鶡晒馊旧海捎冒雽?dǎo)體激光流式細(xì)胞檢測(cè)，獲得WBC DIFF散點(diǎn)圖并得到新的檢測(cè)參數(shù)IG和OTHER。WBC/BASO檢測(cè)通道：專用的BASO溶血?jiǎng)┦故葔A性粒細(xì)胞保持原來的形態(tài)，其他細(xì)胞溶解或萎縮，經(jīng)半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞檢測(cè)，得到WBC/BASO散點(diǎn)圖。（3）IMI幼稚白細(xì)胞檢測(cè)：采用專用IMI檢測(cè)通道和專用幼稚細(xì)胞試劑、RF（射頻）/DC（電阻抗）原理采用專用的幼稚細(xì)胞溶血素破壞成熟細(xì)胞，保持幼稚細(xì)胞原有形態(tài)，通過射頻與電阻抗方法將其檢測(cè)出來，并繪制成單獨(dú)的IM散點(diǎn)圖，其檢測(cè)靈敏度較一般五分類的幼稚細(xì)胞提示有了很大的提高。在此通道中，可以得到HPC（外周干細(xì)胞）、%的參數(shù)，與FCM CD34細(xì)胞有良好的相關(guān)性，應(yīng)用于白血病患者的自身干細(xì)胞移植的外周干細(xì)胞監(jiān)測(cè)。3． NRBC（有核紅細(xì)胞）分析NRBC檢測(cè)通道：采用半導(dǎo)體激光流式原理和DNA/RNA染色技術(shù)。雖然一般的五分類儀器均由NRBC提示，但NRBC往往當(dāng)作小淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)而被忽略，而同時(shí)WBC的結(jié)果也不準(zhǔn)確。XE2100采用單獨(dú)的NRBC檢測(cè)通道，并使用NRBC溶血素溶解成熟紅細(xì)胞、白細(xì)胞膜破壞打孔，聚次甲基染色液對(duì)有核紅細(xì)胞和白細(xì)胞進(jìn)行核酸染色，經(jīng)半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞檢測(cè)，得到準(zhǔn)確的NRBC 、%及NRBC散點(diǎn)圖。4． RET（網(wǎng)織紅細(xì)胞）分析RET網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)通道：采用半導(dǎo)體激光流式原理和熒光染色技術(shù)。內(nèi)置的全自動(dòng)網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)采用了兩種熒光染色液POLYMETHINE和OXAZINE進(jìn)行DNA和RNA染色，經(jīng)半導(dǎo)體激光流式原理檢測(cè)，得到RET散點(diǎn)圖，并得到新的檢測(cè)參數(shù)IRF、PLTO：當(dāng)電阻抗檢測(cè)RBC/PLT出現(xiàn)異常提示時(shí)，可選擇進(jìn)行激光形態(tài)檢測(cè)血小板(PLTO)，以準(zhǔn)確測(cè)定混有大血小板、血小板凝集塊、小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、白細(xì)胞碎片的異常標(biāo)本的血小板數(shù)量。5． HGB檢測(cè)HGB檢測(cè)通道：SLSHGB無氰化物方法測(cè)定原理：亞鐵血紅素中的Fe2+離子被十二烷基磺酸鈉(月桂酰硫酸鈉)氧化，形成SLSHGB衍生物，在555nm波長(zhǎng)進(jìn)行比色測(cè)定。與ICSH參考方法的相關(guān)性：SLSHb法與ICSH的參考方法相比，具有非常高的相關(guān)性(r=)。三、性能規(guī)格1．檢測(cè)參數(shù)：36項(xiàng)白細(xì)胞檢測(cè)：WBC、LYMPH%、LYMPH、MONO%、MONO、NEUT%、NEUT、EO%、EO、BASO%、BASO、HPC、HPC%、IG↑、IG%↑紅細(xì)胞與血紅蛋白檢測(cè)：RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDWCV、RDWSD、NRBC、NRBC%血小板檢測(cè)：PLT、MPV、PDW、PCT、PLCR網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)：RET%、RET、HFR、MFR、LFR、IRF、(PLTO)2．異常報(bào)警信息：40項(xiàng)WBC異常：WBC Abn Scattergram WBC散射圖異常 NRBC Abn ScattergramNRBC散射圖異常Neutropenia 嗜中性粒細(xì)胞減少 Neutrophilia 嗜中性粒細(xì)胞增加Lymphopenia 淋巴細(xì)胞減少 Lymphocytosis 淋巴細(xì)胞增加Monocytosis 單核細(xì)胞增加 Eosinophilia 嗜酸性粒細(xì)胞增加Basophilia 嗜堿性粒細(xì)胞增加 Leukocytopenia 白細(xì)胞減少Leukocytosis 白細(xì)胞增加 NRBC present 有核紅細(xì)胞增加WBC懷疑：Blasts? 原始細(xì)胞 Immature Gran? 未成熟粒細(xì)胞Left Shift? 左移 Atypical Lympho? 異形淋巴細(xì)胞Abn Lympho/LBlasts?異常淋巴/原始淋巴 NRBC 有核紅細(xì)胞RBC Lyse resistance 紅細(xì)胞溶解不全RBC異常：RBC Abn Distribution 紅細(xì)胞粒子分布異常 Dimorphic Population雙峰紅細(xì)胞RET Abn Scattergram RET 散射圖異常 Reticulocytosis RET增加Anisocytosis 紅細(xì)胞大小不均 Microcytosis 小紅細(xì)胞癥Macrocytosis 大紅細(xì)胞癥 Hypochromia 低血紅蛋白癥Anemia 貧血 Erythrocytosis 紅細(xì)胞增多癥RBC懷疑：RBC Agglutination 紅細(xì)胞凝聚 Turbidity/HGB Interference? 乳糜/HGB影響Iron Deficiency? 缺鐵性貧血 HGB Defect? HGB異常Fragments? 碎片 PLT異常PLT Abn Scattergram 血小板散射圖異常 PLT Abn Distribution血小板直方圖異常Thrombocytopenia 血小板減少 Trombocytos