【正文】 的白細胞上，儀器在四個角度搜集散射光信號：O176。、10176。、90176。、90176。消偏振，分別反映細胞大小、細胞復(fù)雜性、細胞內(nèi)部顆粒和細胞分葉情況、核漿比等。儀器第一步通過1O176。、90176。測得單核和多葉核細胞；第二步通過0176。、10176。按大小、內(nèi)部復(fù)雜情況不同測得嗜堿、淋巴、單核；90176。、90176。消偏振將分葉核細胞區(qū)分為中性分葉核和嗜酸性分葉核。此外，CD3700為了消除抵抗性紅細胞對白細胞總數(shù)的影響，還單獨采用了電阻抗方法測白細胞總數(shù)，并與散射光的結(jié)果相復(fù)核以求得更準確的結(jié)果。（3）光散射和過氧化物酶染色技術(shù)在Bayer ADVIA120五分類檢測技術(shù)中，除了采用光散射信號以外，還加入了過氧化物酶染色的技術(shù)以提高分類的準確性。白細胞分類檢測通道內(nèi)，稀釋液內(nèi)加有髓過氧化物酶（MPO）的底物過氧化氫和色原，可使含MPO 的細胞胞漿呈現(xiàn)深色沉淀。由于嗜中性細胞MPO為強陽性,嗜酸性細胞更強,單核細胞為弱陽性,淋巴細胞為陰性，嗜堿性細胞亦為陰性（另外檢測通道檢測）,通過鹵素?zé)艄馍⑸浜图毎瘜W(xué)染色，得到吸光率（過氧化物酶反應(yīng)強度）和光散射信號（細胞大?。?，在散點圖上區(qū)分出白細胞的分類結(jié)果。而在嗜堿性 / 核葉 (Lobularity)通道上，用一種PH值低的表面活性劑溶液,將嗜中性、嗜酸性、淋巴和單核細胞的胞膜溶去,剩下裸核。嗜堿性細胞則不受影響被保留，然后通過半導(dǎo)體激光照射,分別由低角度(0176。5176。)和高角度(5176。15176。)散射光反映細胞大小和細胞的核葉及大小。嗜堿細胞未被溶解,體積大,核葉多,核大,在散點圖低角度和高角度散射光均強, 可明顯與嗜中性細胞( PMN)、單核(MN) 區(qū)分開。（4）核酸染色和半導(dǎo)體激光流式原理最新推出的XE2100、XT2000i/1800i系列儀器上，散射光轉(zhuǎn)而采用側(cè)向信號用以反映細胞內(nèi)部信息（主要是顆粒的復(fù)雜性）。試劑中還增加了特異性針對DNA/RNA染色的熒光染料Polymethine(聚次甲基染料)。激光照射后產(chǎn)生熒光信號，和側(cè)向散射光一道繪制成二維散點圖進行白細胞分類。另外，針對數(shù)目最少的嗜堿性細胞，儀器都單獨設(shè)置檢測通道。酸性溶血素把除了嗜堿性細胞以外的白細胞脫核，紅細胞被徹底溶解。然后通過前向和側(cè)向散射光檢測嗜堿性細胞。白細胞總數(shù)也由此通道測得，由于與白細胞分類通道獨立而可以采用強烈溶血素，使得部分紅細胞溶解不全的標(biāo)本也可以得到準確的白細胞總計數(shù)。（三） 幼稚白細胞分析白細胞中的幼稚成份在臨床上具有顯著意義。過去，此類標(biāo)本主要依靠人工鏡檢。隨著血液分析儀檢測技術(shù)的發(fā)展，儀器對于幼稚白細胞的報警提示越來越靈敏。Beckman Coulter的VCS技術(shù)使用三種技術(shù)對白細胞進行檢測并且繪制成三維圖形，在正常細胞之外會出現(xiàn)異常細胞的報警區(qū)域，如髓細胞、未成熟粒細胞、桿狀核細胞、異形淋巴等。通過一些特異性的化學(xué)手段，五分類儀器還可以進行幼稚白細胞的定量檢測。如Bayer ADVIA120采用的過氧化物酶染色原理，使體積較大而未染色的幼稚白細胞單獨分群，報為LUC，鏡下復(fù)檢多為原始細胞和異常淋巴。而SYSMEX XE2100采用核酸熒光染色后，根據(jù)細胞成熟度的不同可以體現(xiàn)在其熒光信號的強弱上，其白細胞分類通道出正常細胞分類外，還有兩個幼稚白細胞的定量參數(shù)：IG（幼稚粒細胞）和Other（原始細胞/異常淋巴）。有一種觀點認為：再先進的血液分析儀都是過篩的工具。因此，只要儀器報告有幼稚細胞，便應(yīng)該鏡檢復(fù)核。此時的問題是，（1）儀器是否能夠非常靈敏地檢測出幼稚細胞的存在。（2）儀器是否能否提示何種幼稚細胞。此時，幼稚細胞的數(shù)目并不重要，而能夠把早期患者外周血內(nèi)存在的極少量幼稚細胞檢測出來，避免漏診、誤診的發(fā)生，則為問題的關(guān)鍵。在這方面，SYSMEX XE2100設(shè)置了單獨的幼稚白細胞檢測通道。幼稚白細胞較成熟白細胞細胞膜表面脂類少，氨基酸較易進入細胞內(nèi)。因此，當(dāng)其與含有氨基酸和表面活性成分的溶血素作用時，氨基酸首先進入幼稚白細胞內(nèi)，從而延遲了表面活性成分的作用，而成熟白細胞則與紅細胞一起被溶解。通過化學(xué)處理后的血樣，再通過射頻（檢測細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜度）、電阻抗（檢測細胞大?。┰砑纯蓸O其靈敏地測得幼稚白細胞，并提供其細胞分布的散點圖。三、 血紅蛋白分析技術(shù) 血液分析儀分析血紅蛋白的技術(shù)相對簡單，幾乎所有儀器采用的原理基本相同，即比色法。稀釋后的血液加入溶血素后，紅細胞被溶解并釋出血紅蛋白并與試劑結(jié)合形成血紅蛋白衍生物。儀器再在檢測通道內(nèi)用特定的波長進行比色，通過吸光度的變化來反映血液內(nèi)血紅蛋白的含量。不同儀器其溶血素中配方會有不同，其吸收光譜各異，但最大吸收光譜均接近540nm。大多數(shù)廠家溶血素中均含有氰化鉀，和血紅蛋白作用結(jié)合后形成氰化血紅蛋白。需要注意的是ICSH推薦的是手工氰化高鐵血紅蛋白法，儀器方法吸收光譜與之有所不同，但是校準必須以ICSH推薦方法為標(biāo)準。近年來，出于環(huán)保和廢棄物處理的考慮，有部分血液分析儀開始采用不含氰化物的溶血素檢測血紅蛋白。最早開發(fā)的是SYSMEX的十二烷基磺酸鈉方法，不含氰化物且結(jié)果與ICSH結(jié)果有良好的相關(guān)性。目前SYSMEX所有全自動血液分析儀均已經(jīng)采用試劑無氰化技術(shù)，而其他制造商也在相繼開發(fā)環(huán)保試劑，這是血紅蛋白檢測技術(shù)的一個顯著的趨勢。三、儀器的應(yīng)用實例本節(jié)以SYSMEX XE2100五分類血液分析儀為例做血液分析技術(shù)的應(yīng)用介紹。作為全球領(lǐng)先的血液分析儀器制造商，SYSMEX在20世紀90年代中期已經(jīng)能夠生產(chǎn)半自動二分群、全自動三分群、全自動五分類及全自動網(wǎng)織紅分析儀的系列化產(chǎn)品以滿足不同層次用戶的需求。但隨著實驗室對標(biāo)本處理能力的要求越來越高，同時希望篩選效率更高，并要求網(wǎng)絡(luò)化遠程診斷及數(shù)據(jù)傳輸，SYSMEX于90年代末期開始研制面向二十一世紀的新一代血液分析儀。XE2100全自動血液分析儀作為具有最快處理速度、最佳檢測性能的產(chǎn)品，于2000年上市并引入中國，目前已在國內(nèi)近50家省級、醫(yī)科大附屬醫(yī)院的實驗室內(nèi)運轉(zhuǎn)（截至2003年4月）。XE2100由于采用了非常先進的檢測原理和分析技術(shù)，具備了其他五分類血液分析儀所不具備的獨特優(yōu)勢：168。 最快的測定速度：每小時測定150個標(biāo)本。168。 獨特的可選式PLT雙方法檢測技術(shù)：除采用鞘流電阻抗原理檢測RBC/PLT以外，XE2100更具有激光染色形態(tài)檢測技術(shù)得到更準確的PLT結(jié)果168。 最新激光檢測技術(shù)及熒光核酸染色方法：XE2100不僅在白細胞分類方面，而且在NRBC(有核紅細胞)、RET(網(wǎng)織紅細胞)測定方面均應(yīng)用了半導(dǎo)體激光流式細胞檢測技術(shù)，同時結(jié)合細胞化學(xué)熒光染色，使細胞分析的準確度和靈敏度有了極大的提高。168。 多通道高精度檢測：具有單獨的WBC/BASO、DIFF、NRBC、IMI、RBC/PLT、HGB、RET檢測通道和專用試劑，使分析精度達到前所未有的高度。168。 全新的血液學(xué)檢測參數(shù)：NRBC、HPC、IG、IMR等定量參數(shù)及IMI檢測功能為臨床提供一般血液分析儀所不具備血液分析信息。168。 靈活的檢測模式和真正隨機進樣分析：CBC、DIFF、NRBC、RET七種檢測模式靈活組合，滿足臨床不同標(biāo)本檢測要求，并節(jié)約試劑成本；真正隨機進樣分析功能可實現(xiàn)完全無人化的操作。168。 強大的網(wǎng)絡(luò)功能：Windows NT操作系統(tǒng)，可與實驗室及醫(yī)院的局域網(wǎng)、國際互聯(lián)網(wǎng)的連接，為實現(xiàn)遠程技術(shù)服務(wù)、在線質(zhì)控等功能提供軟件支持。168。 靈活的系統(tǒng)擴展能力：可雙機連接，或與全自動網(wǎng)織紅分析儀、全自動推片染色機連接成實驗室全自動檢驗流水線。二、檢測原理1． RBC/PLT分析RBC/PLT檢測通道：雙鞘流法結(jié)合電阻抗原理紅細胞/血小板仍采用經(jīng)典電阻抗原理檢測，浮動界標(biāo)技術(shù)進行直方圖解析。雙鞘流（前鞘流和后鞘流）使流經(jīng)檢測部的RBC/PLT保證逐個通過，徹底避免細胞并列通過、側(cè)向通過、細胞回流重復(fù)通過帶來的檢測誤差。2． WBC分析: 采用專用WBC/BASO和WBC DIFF檢測通道、半導(dǎo)體激光流式細胞原理結(jié)合細胞化學(xué)熒光染色技術(shù)（1）半導(dǎo)體激光流式細胞技術(shù)。新型半導(dǎo)體激光采用633nm激光束進行細胞檢測，半導(dǎo)體激光較老一代的氣體（氦氖、氬氣）激光相比具有工作壽命長、體積小、啟動快、耗電省、功率小的優(yōu)點，從而降低使用成本并方便維護保養(yǎng)。通過采用流式細胞技術(shù)，儀器對每個通過檢測部位的細胞或顆粒進行逐個分析，具有檢測速度快、測量指標(biāo)多、數(shù)據(jù)采集量大、對所測細胞或顆?？梢赃M行分選等多項特點。（2）單獨的WBC/BASO和WBC DIFF檢測通道及DNA、RNA熒光染色、專用的BASO試劑，使XE2100獲得非常準確的WBC總數(shù)和分類結(jié)果。另外，IG（未成熟粒細胞）、%和OTHER（相當(dāng)于原始細胞和異常淋巴細胞）、%提供了準確的異常細胞參數(shù)。激光獲得的熒光信號、散射光信號繪制成WBC/BASO、WBC DIFF兩個散點圖，通過適應(yīng)性簇分析系統(tǒng)(.)進行結(jié)果分析，從而獲得準確、可靠的檢測結(jié)果。WBC DIFF檢測通道：加入特殊的WBC分類溶血劑和聚次甲基熒光染色液，采用半導(dǎo)體激光流式細胞檢測，獲得WBC DIFF散點圖并得到新的檢測參數(shù)IG和OTHER。WBC/BASO檢測通道：專用的BASO溶血劑使嗜堿性粒細胞保持原來的形態(tài)，其他細胞溶解或萎縮，經(jīng)半導(dǎo)體激光流式細胞檢測，得到WBC/BASO散點圖。（3）IMI幼稚白細胞檢測：采用專用IMI檢測通道和專用幼稚細胞試劑、RF（射頻）/DC（電阻抗）原理采用專用的幼稚細胞溶血素破壞成熟細胞，保持幼稚細胞原有形態(tài)，通過射頻與電阻抗方法將其檢測出來，并繪制成單獨的IM散點圖，其檢測靈敏度較一般五分類的幼稚細胞提示有了很大的提高。在此通道中，可以得到HPC（外周干細胞）、%的參數(shù)，與FCM CD34細胞有良好的相關(guān)性，應(yīng)用于白血病患者的自身干細胞移植的外周干細胞監(jiān)測。3． NRBC（有核紅細胞）分析NRBC檢測通道：采用半導(dǎo)體激光流式原理和DNA/RNA染色技術(shù)。雖然一般的五分類儀器均由NRBC提示，但NRBC往往當(dāng)作小淋巴細胞計數(shù)而被忽略，而同時WBC的結(jié)果也不準確。XE2100采用單獨的NRBC檢測通道，并使用NRBC溶血素溶解成熟紅細胞、白細胞膜破壞打孔，聚次甲基染色液對有核紅細胞和白細胞進行核酸染色，經(jīng)半導(dǎo)體激光流式細胞檢測，得到準確的NRBC 、%及NRBC散點圖。4． RET（網(wǎng)織紅細胞）分析RET網(wǎng)織紅細胞檢測通道：采用半導(dǎo)體激光流式原理和熒光染色技術(shù)。內(nèi)置的全自動網(wǎng)織紅細胞檢測采用了兩種熒光染色液POLYMETHINE和OXAZINE進行DNA和RNA染色，經(jīng)半導(dǎo)體激光流式原理檢測，得到RET散點圖，并得到新的檢測參數(shù)IRF、PLTO：當(dāng)電阻抗檢測RBC/PLT出現(xiàn)異常提示時，可選擇進行激光形態(tài)檢測血小板(PLTO)，以準確測定混有大血小板、血小板凝集塊、小紅細胞、紅細胞碎片、白細胞碎片的異常標(biāo)本的血小板數(shù)量。5． HGB檢測HGB檢測通道：SLSHGB無氰化物方法測定原理：亞鐵血紅素中的Fe2+離子被十二烷基磺酸鈉(月桂酰硫酸鈉)氧化，形成SLSHGB衍生物，在555nm波長進行比色測定。與ICSH參考方法的相關(guān)性：SLSHb法與ICSH的參考方法相比，具有非常高的相關(guān)性(r=)。三、性能規(guī)格1．檢測參數(shù)：36項白細胞檢測：WBC、LYMPH%、LYMPH、MONO%、MONO、NEUT%、NEUT、EO%、EO、BASO%、BASO、HPC、HPC%、IG↑、IG%↑紅細胞與血紅蛋白檢測：RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDWCV、RDWSD、NRBC、NRBC%血小板檢測：PLT、MPV、PDW、PCT、PLCR網(wǎng)織紅細胞檢測：RET%、RET、HFR、MFR、LFR、IRF、(PLTO)2．異常報警信息：40項WBC異常：WBC Abn Scattergram WBC散射圖異常 NRBC Abn ScattergramNRBC散射圖異常Neutropenia 嗜中性粒細胞減少 Neutrophilia 嗜中性粒細胞增加Lymphopenia 淋巴細胞減少 Lymphocytosis 淋巴細胞增加Monocytosis 單核細胞增加 Eosinophilia 嗜酸性粒細胞增加Basophilia 嗜堿性粒細胞增加 Leukocytopenia 白細胞減少Leukocytosis 白細胞增加 NRBC present 有核紅細胞增加WBC懷疑：Blasts? 原始細胞 Immature Gran? 未成熟粒細胞Left Shift? 左移 Atypical Lympho? 異形淋巴細胞Abn Lympho/LBlasts?異常淋巴/原始淋巴 NRBC 有核紅細胞RBC Lyse resistance 紅細胞溶解不全RBC異常：RBC Abn Distribution 紅細胞粒子分布異常 Dimorphic Population雙峰紅細胞RET Abn Scattergram RET 散射圖異常 Reticulocytosis RET增加Anisocytosis 紅細胞大小不均 Microcytosis 小紅細胞癥Macrocytosis 大紅細胞癥 Hypochromia 低血紅蛋白癥Anemia 貧血 Erythrocytosis 紅細胞增多癥RBC懷疑：RBC Agglutination 紅細胞凝聚 Turbidity/HGB Interference? 乳糜/HGB影響Iron Deficiency? 缺鐵性貧血 HGB Defect? HGB異常Fragments? 碎片 PLT異常PLT Abn Scattergram 血小板散射圖異常 PLT Abn Distribution血小板直方圖異常Thrombocytopenia 血小板減少 Trombocytos