制藥碩班潘婷婷20xx207354-資料下載頁
2025-07-18 10:11本頁面
【正文】 所有轉(zhuǎn)基因后代依然可以同時(shí)檢測(cè)到 HC和 LC 2個(gè)基因 ， T2代部分植株的 PCR擴(kuò)增結(jié)果見圖 2一 B。 連續(xù) 3代的 PCR鑒定結(jié)果表明 ， 基因 HC和 LC是連鎖的 ，而且能夠穩(wěn)定遺傳 。 2)基因槍介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因植株的篩選 3)轉(zhuǎn)基因植株的 PCR檢測(cè) 4)轉(zhuǎn)基因植株的 RTPCR檢測(cè)。 T2代轉(zhuǎn)基因小麥和未轉(zhuǎn)化植株開花后 21d時(shí) ， 分別提取幼嫩籽粒RNA， 用 IgG的重鏈和輕鏈特異引物進(jìn)行 RTPCR擴(kuò)增 。 如圖 3所示 ， 選取的 6株轉(zhuǎn)基因植株均可擴(kuò)增出預(yù)期大小的目的帶 ， 而未轉(zhuǎn)化對(duì)照中沒有目的帶 ， 說明轉(zhuǎn)基因株系的基因組中不僅整合了目的基因 ， 而且能在胚乳中形成正常的轉(zhuǎn)錄本 。 5)IgG蛋白的 ELISA檢測(cè)。 于開花后 21d時(shí) ， 取 T3代轉(zhuǎn)基因株系和未轉(zhuǎn)化植株幼嫩籽粒 ， 提取總蛋白進(jìn)行 ELISA檢測(cè) 。 結(jié)果表明 ， 轉(zhuǎn)基因株系蛋白提取液的 D值與陰性對(duì)照相比差異顯著 (圖 4)。 用 IgG重鏈作為抗體檢測(cè)時(shí) ， 樣品的 D值是對(duì)照的3． 6倍； IgG輕鏈作為抗體檢測(cè)時(shí) ，樣品的 D值是對(duì)照的 2． 5倍 ， 說明種子中 IgG蛋白重鏈和輕鏈表達(dá)積累量均較高 。 討論： 本研究利用基因槍共轉(zhuǎn)化法將單克隆抗體 IgG的重鏈和輕鏈基因同時(shí)導(dǎo)人小麥基因組 。 T。 代共得到 3株轉(zhuǎn)基因植株 ， 并同時(shí)含有 IgG重鏈和輕鏈 。 連續(xù) 3代的 PCR檢測(cè)結(jié)果表明 ， HC和 LC基因是連鎖的 ， 而且能夠穩(wěn)定遺傳 ， 說明目的基因已經(jīng)整合到小麥基因組中 。 為檢測(cè) IgG在小麥穎果中的表達(dá)情況 ， 取開花后 21 d的幼嫩籽粒提取 RNA， 進(jìn)行 RT— PCR鑒定 ， 在隨機(jī)選取的幾個(gè)樣品中都可以檢測(cè)到信號(hào) ， 說明工 gG基因在小麥胚乳中能正常轉(zhuǎn)錄 。ELISA結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)小麥胚乳中能產(chǎn)生正常的 IgG分子 。 Rademacher等在玉米胚乳中表達(dá)了重組抗體 2G12， 此抗體具有 HIV中和活性 ， 而且并不低于倉鼠卵巢細(xì)胞來源的抗體 ， 在煙草中也曾表達(dá)過 HIV有抑制作用的抗體 ， 但煙草中含有對(duì)人體有害的物質(zhì) ， 玉米雖是主要糧食作物之一 ， 但不及小麥應(yīng)用廣泛 。 小麥?zhǔn)侨祟惗喾N食物的原材料 ， 將小麥種子作為生產(chǎn) IgG的工廠 ， 既經(jīng)濟(jì)又安全 ， 而且直接口服轉(zhuǎn)基因種子磨成的面粉 ， 機(jī)體的抗性要高于純化的抗體 。 本研究在小麥胚乳中成功表達(dá)了抗體蛋白 IgG， 小麥種子數(shù)量多 ， 貯存方便 ， 而且蛋白質(zhì)貯存在種子中不影響其活性 ， 為以后大量純化抗體用于動(dòng)物免疫研究并用于生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ) 。
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