【正文】 例，Ⅲ級(jí)13例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者30例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者24例。患者均為女性，年齡23～68歲（平均52歲），術(shù)前均未經(jīng)任何治療。 　　 主要試劑 所用VEGF、CD34單克隆抗體及超敏（鼠）SP試劑盒，均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。 　　 SP免疫組化染色 操作步驟從略。其中鼠抗人VEGF單克隆抗體采用高溫高壓進(jìn)行抗原修復(fù)。每次試驗(yàn)以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照，以已知VEGF陽(yáng)性的切片作為陽(yáng)性對(duì)照?！　?結(jié)果判定 　　 VEGF表達(dá) 根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及染色強(qiáng)度進(jìn)行綜合判定，即按5%以上細(xì)胞漿或細(xì)胞膜呈棕黃色染色者為VEGF蛋白表達(dá)陽(yáng)性。 　　 MVD計(jì)數(shù) 參照Maeda等報(bào)道 ［2］ 的方法，即低倍鏡下，全面觀察CD34染色陽(yáng)性的血管，選取腫瘤微血管密度最高區(qū)域，然后在高倍鏡下（200）選取5個(gè)不重復(fù)視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，求其平均數(shù)即作為該病例的MVD值。統(tǒng)計(jì)的微血管標(biāo)準(zhǔn):單個(gè)的棕黃色內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞團(tuán)均計(jì)數(shù)為一個(gè)血管。肌層較厚及管腔紅細(xì)胞數(shù)8個(gè)的血管不被計(jì)數(shù)。　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用χ 2 檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)、F檢驗(yàn)及q檢驗(yàn)。 　　2 結(jié)果 　　 VEGF蛋白表達(dá) VEGF蛋白定位于腫瘤細(xì)胞胞漿及胞膜，陽(yáng)性表達(dá)為胞漿或胞膜染為棕黃色，呈彌漫或散在的顆粒狀。在54例乳腺癌組織中，VEGF表達(dá)陽(yáng)性41例（%），癌間質(zhì)內(nèi)皮細(xì)胞不表達(dá)或呈弱陽(yáng)性表達(dá)，癌旁組織幾乎不表達(dá)。 　　 MVD檢測(cè) CD34定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿，呈棕黃色。所有的病例的血管內(nèi)皮細(xì)胞均為CD34染色陽(yáng)性。癌組織MVD值11～106個(gè)不等，平均為（177。）個(gè)。　　 VEGF蛋白表達(dá)及MVD與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系 　　 組織學(xué)分級(jí) VEGF表達(dá)陽(yáng)性率及MVD值隨組織學(xué)分級(jí)增高而逐漸增加。VEGF表達(dá)在Ⅰ級(jí)與Ⅱ級(jí)、Ⅰ級(jí)與Ⅲ級(jí)間，差異具有顯著性（P均）。單因素方差分析顯示，三組間MVD值比較差異具有非常顯著性（P）。兩組間比較:Ⅰ級(jí)與Ⅱ級(jí)、Ⅰ級(jí)與Ⅲ級(jí)間差異有顯著性（P）。而Ⅱ級(jí)與Ⅲ級(jí)間VEGF表達(dá)陽(yáng)性率及MVD值差異均無顯著性（P）。 　　 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 VEGF表達(dá)陽(yáng)性率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P）。MVD值在兩組間差異也具有非常顯著性（P）。 　　 組織學(xué)類型 VEGF表達(dá)陽(yáng)性率和MVD值在兩個(gè)不同組織學(xué)類型間差異無顯著性（P）。 　　 VEGF表達(dá)與MVD值的關(guān)系 VEGF表達(dá)陽(yáng)性組的MVD值明顯高于VEGF表達(dá)陰性組（P）。 　　3 討論 　　VEGF是目前研究較為深入的促血管生成因子，對(duì)腫瘤基質(zhì)血管形成及腫瘤生物學(xué)行為均有重要影響。VEGF也稱血管滲透因子（VPF），是特異性的血管內(nèi)皮細(xì)胞刺激因子，它與血管內(nèi)皮細(xì)胞的相應(yīng)受體結(jié)合，刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，同時(shí)還可促進(jìn)血管內(nèi)物質(zhì)的泄露，導(dǎo)致血管形成和新的基質(zhì)形成，為腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移提供了合適的基礎(chǔ)。大量的實(shí)驗(yàn)研究證實(shí) ［3～5］ ，幾乎所有的惡性腫瘤都表達(dá)較高水平的VEGF，而在周圍正常組織中無或僅有極低水平的表達(dá) ［6］ ，因此可以說VEGF對(duì)腫瘤組織具有良好的特異性。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在54例乳腺癌中，%，而癌旁組織陰性，提示腫瘤細(xì)胞可分泌VEGF，通過VEGF刺激微血管形成，腫瘤增殖速度加快，反映了惡性腫瘤的特征。Toi等的研究也證實(shí)了VEGF表達(dá)與血管生成過程及乳腺癌預(yù)后不良有關(guān)。另外，我們發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞不表達(dá)或個(gè)別呈弱陽(yáng)性表達(dá)，與文獻(xiàn)一些報(bào)道相似，進(jìn)一步證實(shí)了VEGF主要以旁分泌途徑作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的推測(cè)。 　　腫瘤細(xì)胞的微血管數(shù)量是患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素。Weidner等的研究發(fā)現(xiàn):乳腺浸潤(rùn)性癌間質(zhì)中，具有突出的血管成分者更具有侵襲性。本研究顯示VEGF表達(dá)和MVD值均隨組織學(xué)分級(jí)的增高和淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移而明顯增加，與多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致，反映了VEGF、MVD與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系極為密切，提示血管形成是乳腺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要條件。已有研究表明VEGF與MVD值呈正相關(guān)。本研究中46例乳腺癌組織VEGF陽(yáng)性表達(dá)組MVD值明顯高于陰性表達(dá)組，顯示了腫瘤組織中VEGF狀態(tài)與MVD值的密切關(guān)系，說明VEGF可以通過促進(jìn)乳腺癌血管形成，從而在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用，這不僅為我們進(jìn)一步認(rèn)識(shí)腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)提供了理論依據(jù)，對(duì)進(jìn)一步探討腫瘤的預(yù)后及治療也具有重要的意義。 　　綜上所述，VEGF可促進(jìn)乳腺癌血管形成，進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。VEGF、MVD可作為反映乳腺癌生物學(xué)行為的指標(biāo)之一。聯(lián)合檢測(cè)VEGF和MVD可以更好地為臨床判斷預(yù)后及治療提供參考依據(jù)。 　　參考文獻(xiàn) 　　1 Deroanne CF，Hajiton A，Calberg CM，et by fibroblast growth facter4is mediated through an autocrin upregulation of vascular endothelial growth factor Res，1997，57（24）:55905597. 　　2 Maedak，Chung YS，Orana Y，et value of vascular endothelial growth factor experession in gastric ，1996，77:858863. 　　3 Takanami I，Tanaka F，Hashizume T，et endothelial growth factor and its receptor with angiogenesis and survova in pulmonary Cancer Res，1997，17（4A）:28112814. 　　4 Suzuki K，Hagashy N，Miyamoto Y，et of vascular permeability factor vascular endothelial growth factor in human hepatocellular Res，1996，56（13）:30043009. 　　5 Da Silva ID，De Lime GR，Gerbrim LH，et ductal carcinoma fibroadenoma and adjacent breast stromaangiogenesis:an immunohistochemical and morphometricoal Assoc Anat（Nancy），1996，80:1719. 　　6 ，2002，8（2）:6870. 13 / 1