【正文】 了保證水樣稀釋后有足夠的溶解氧，稀釋水通常要通入空氣進行曝氣（或通入氧氣） ，使稀釋水中溶解氧接近飽和。稀釋水中還應加入一定量的無機營養(yǎng)鹽和緩沖物質(zhì)（磷酸鹽、鈣、鎂和鐵鹽等） ，以保22 / 94證微生物生長的需要。對于不含或少含微生物的工業(yè)廢水，其中包括酸性廢水、堿性廢水、高溫廢水或經(jīng)營氯化處理的廢水，在測定 BOD5 時應進行接種，以引入能分解廢水中有機物的微生物。當廢水中存在著難于被一般生活污水中的微生物以政黨速度降解的有機物或含有劇毒物質(zhì)時，以將馴化后的微生物引入水樣中進行接種。本方法適用于測定 BOD5 大于或等于 2mg/L，最大不超過 6000mg/L 的水樣。當水樣 BOD5 大于6000mg/L 時，會因稀釋帶來一定的誤差。儀 器（1）恒溫培養(yǎng)箱（20℃177。1℃）（2）5—20L 細口玻璃瓶（3）1000—2022ml 量筒。（4）玻璃攪拌棒：棒的長度應比所用量筒高度長 200mm。在棒的底端固定一個直徑比量筒底小，并帶有幾個小孔的硬橡膠板。（5）溶解氧瓶：250ml 到 300ml 之間，帶有磨口玻璃塞并具有供水封用的釧形口。（6）虹吸管，供分取水樣和添加稀釋水用。試劑1 磷酸鹽緩沖溶液將 磷酸二氫鉀（KH 2PO4） ， 磷酸氫二鉀（K 2HPO4） ， 七水合磷酸氫二鈉（N aHPO47H2O）和 氯化銨（NH 4Cl）溶于水中，稀釋至 1000ml。此溶液的 PH 應為 。2 硫酸鎂溶液將 七水合硫酸鎂（MgSO 47H2O）深于水中，稀釋至 1000ml。3 氯化鈣溶液將 無水氯化鈣溶于水，稀釋至 1000ml。氯化鐵溶液將 六水合氯化鐵（FeCl 36H2O）溶于水，稀釋至 1000ml。鹽酸溶液（）將 40ml(p=)鹽酸溶于水，稀釋至 1000ml。氫氧化鈉溶液（）將 20g 氫氧化鈉溶于水，稀釋至 1000ml。亞硫酸鈉溶液（1/2Na 2SO3=）將 亞硫酸鈉溶于水，稀釋至 1000ml。此溶液不穩(wěn)定，需每人配制。葡萄糖—谷氨酸標準溶液23 / 94將葡萄糖（C 6H12O6）和谷氨酸（HOOCCH 2CH2CHNH2COOH）在 103℃干燥 1h 后，各稱取150mg 溶于水中，移入 1000ml 容量瓶為并稀釋至標線，混合均勻。此標準溶液臨用前配制。稀釋水在 529L 玻璃瓶內(nèi)裝入一定量的水，控制水濕在 20℃左右。然后用無油空氣壓縮機或薄膜泵，將吸入的空氣先后經(jīng)活性炭吸附管及水洗滌管后，導入稀釋水內(nèi)曝氣 28h，使稀釋水中的溶解氧接近于飽和。停止曝氣亦可導入適量純氧。瓶口蓋以兩層經(jīng)洗滌晾干的紗布，置于 20℃培養(yǎng)箱中放置數(shù)小時，使水中溶解氧含量達 8mg/L 左右。臨用前每升水中加入氯化鈣溶液、氯化鐵溶液、硫酸鎂溶液、磷酸緩沖溶液各 1ml，并混合均勻。稀釋水的 PH 值應為 ，其 BOD5 就應小于 。接種液可選擇以下任一種方法，以獲得適用的接種液。（1）城市污水，一般采用生活污水，在室溫下放置一夜，取上清液供用。（2）表層上壤浸出液，取 100g 花園或植物生長土壤，加入 1 升水，混合并靜置 10min。取上清液供用。（3）用含城市污水的可水或潮水。（4）污水處理廠的出水。（5）當分析含有難于降解物質(zhì)的廢水時，在其排污口下游 38km 處取水樣做為廢水的馴化接種液。如無此種水源，可取中和或經(jīng)適當稀釋后的廢水進行連續(xù)曝氣，每天加入少量該種廢水，同時加入適量表層土壤或生活污水，使能適應該種廢水的微生物大量繁殖。當水中出現(xiàn)大量絮狀物，或檢查其化學需氧量的降低值出現(xiàn)突變時，表明適用的微生物已進行繁殖，可用做接種液。一般馴化過程需要 38d。1接種稀釋水分取適量接種液，加于稀釋水中，混勻。每升稀釋水中接種液加入量為：生活污水 110ml，或表層土壤浸出液 2030ml；或河水，湖水 10100ml。接種稀釋水的 PH 值應為 ，BOD 5 值以在 —。接種稀釋水配制反應立即使用。步驟水樣的預處理（1）水樣的 PH 值若超出 范圍時，可用鹽酸或氫氧化鈉稀溶液調(diào)節(jié) PH 近于 7，但用量不要超過水樣體積的 %。若水樣的酸度或堿度很高，可改用高濃度的堿或酸液進行中和。（2）水樣中含有鋼、鉛、鋅、鎘、鉻、砷、氰等有有害物質(zhì)時，可使用經(jīng)馴化的微生物接種液的稀釋水進行稀釋，或提高稀釋倍數(shù)以減少毒物的的濃度。（3）含有少量流離氯的水樣，一般放置 12h，流離氯即可消失。對于游離氯在短時間不能消散的水24 / 94樣，可加入亞硫酸鈉溶液，以除去之。其加入量由下述方法決定。取已中和好的水樣 100ml，加入 1+1 乙酸 10ml，10% （m/v ）磺化鉀溶液 1ml，混勻。以淀粉溶液為指示劑，用亞硫酸鈉溶液滴定游離碘。山亞硫酸鈉溶液消耗的體積，計算出水樣中應加亞硫酸鈉溶液的量。（4）從水濕較低的水域或富營養(yǎng)化的湖泊中采集的水樣，可遇到含有過飽和溶解氧，此時應將水樣迅速升溫至 20℃左右，以不使?jié)M瓶的情況下，充分振搖，并時時開塞放氣，以趕出過飽和的溶解氧。從水溫較高的水域或廢水排放口取得的水樣，則應迅速使其冷卻至 20℃左右，并充分振搖，使與空氣中氧分壓接近平衡。不經(jīng)稀釋水樣的測定溶解氧含量較高、有機物含量較少的地面水，可不經(jīng)稀釋，而直接以虹吸法，將約 20℃的混勻水樣轉(zhuǎn)移入兩個溶解氧瓶內(nèi)，轉(zhuǎn)移過程中應注意不使產(chǎn)生氣泡。以同樣的操作使兩個溶解氧瓶充滿水樣后溢流出少許，加塞。瓶內(nèi)不應留有氣泡。其中一瓶隨即測定溶解氧，另一瓶的瓶口進行水封后，放入培養(yǎng)箱中，在 20177。1℃培養(yǎng) 5d。在培養(yǎng)過程中注意添加封口水。從開始放入培養(yǎng)箱算起，經(jīng)過五晝夜之后，棄去封口水，測定剩余的溶解氧。需經(jīng)稀釋水樣的測定（1）稀釋倍數(shù)的確定：根據(jù)實踐經(jīng)驗，提出下述計算方法，供稀釋時參考。①地面水，山測得的高錳酸鹽指數(shù)與一定的系數(shù)的乘積，即求得稀釋倍數(shù)，見表 21。高錳酸鹽指數(shù)（mg/L） 系數(shù)5 —510 、1020 、20 、 ②工業(yè)廢水，由重鉻酸鉀法測得的 COD 值為確定。通常需作三個稀釋比。使用稀釋水時，山 COD 值分別乘以系數(shù) ,，即獲得三個稀釋倍數(shù)。使用接種稀釋水時，則分別乘 , 和 三個系數(shù)。注：CODcr 值可在測定 COD 過程中，加熱回流至 60min 時，用由校核試驗的苯二甲酸氫鉀溶液按COD 測定相同操作步驟制備的標準色列進行估測。（2）稀釋操作：①一般稀釋法按照選定的稀釋比例，用虹吸法沿筒壁先引入部分稀釋水（或接種稀釋水）于 1000ml 量筒中，加入25 / 94需要量的均勻水樣，再引入稀釋水（或接種稀釋水）至 800ml，用帶膠板的玻棒小心上下攪勻。攪拌時勿使攪棒的膠板露出水面，防止產(chǎn)生氣泡。按不經(jīng)稀釋水樣的測定相同操作步驟，進行裝瓶、測定當天溶解氧和培養(yǎng) 5d 后的溶解氧。另取兩個溶解氧瓶，用虹吸法裝滿稀釋水（或接種稀釋水）作為空白試驗。測定 5d 前后的溶解氧。②直接稀釋放法直接稀釋法是在溶解氧瓶內(nèi)直接稀釋。在已知兩個容積相同（其差1ml）的溶解氧瓶內(nèi)，用虹吸法加入部分稀釋水（或接種稀釋水） ，再加入根據(jù)瓶容積和稀釋比例計算出的水樣量，然后用稀釋水（或接種稀釋水）使剛好充滿，加塞，勿留氣泡于瓶內(nèi)。其余操作與上述一般稀釋法相同。BOD5 測定中，一般采用疊氮化鈉改良法測定溶解氧。如遇干擾物質(zhì)，應根據(jù)具體情況采用其他測定法計算 不經(jīng)稀釋直接培養(yǎng)的水樣BOD5(mg/L) = c1c2式中 c1——水樣在培養(yǎng)前的溶解氧濃度（mg/L） ； c2——水樣經(jīng) 5d 培養(yǎng)后，剩余溶解氧濃度（mg/L）。經(jīng)稀釋后培養(yǎng)的水樣BOD5 (mg/L) = (c1c2)(B1B2) f1/f2式中 B1——稀釋水（或接種稀釋水）在培養(yǎng)前的溶解氧（mg/L ）。B2——稀釋水（或接種稀釋水）在培養(yǎng)后的溶解氧（mg/L）。f1——稀釋水（或接種稀釋水）在培養(yǎng)液中所占比例；f2——水樣在培養(yǎng)液中所占比例；注：f 1,f2 的計算：例如培養(yǎng)液的稀釋比為 3%，即 3 份水樣，97 份稀釋水，則 f1= ,f2=。精密度與準確度一個實驗室分析含 5mg/L 葡萄糖的統(tǒng)一分發(fā)標準液的 BOD5 值，實驗室內(nèi)相對標準偏差為 %實驗室間相對標準偏差為 32%。三個實驗室分析含 300mg/L 葡萄糖（BOD5 為 210mg/L）的統(tǒng)一分發(fā)標準液的 BOD5 值，實驗室內(nèi)相對標準偏差為 %；實驗室間相對標準偏差為 %。注意事項（1）水中有機物生物氧化過程，可分為二個階段。第一階段為有機物中的碳和氫氧化生成二氧化碳和水，此階段稱為碳化階段。完成碳化階段在 20℃人約需 20 天左右。第二階段為含氮物質(zhì)及部分氨，氧化為亞硝酸鹽及硝酸鹽，稱為硝化階段。完成硝化階段在 20℃時需要 100 天。因此，一般測定水樣 BOD5時，硝化作用很不顯著或根本不發(fā)生硝化作用。但對于生物處理池的出水，因其中含有大量的硝化細菌。26 / 94因此，在測定 BOD5 時也包括了部分含氮化驗室物的需氧量。對于這樣的水樣，如果我們只需要測定有機物降解的需氧量，可以加入硝化抑制，抑制硝化過程。為此目的，可在每升稀釋水樣中加入 1ml 濃度為500mg/L 的丙稀基硫脲（ATU，C 4H8N2S）或一定量固定在氯化鈉上的 2氯代6 三氯甲基吡啶（TCMP ，C1—C 5H3N—C—CH3） ，使 TCMP 在稀釋樣品中的濃度大約為 。（2）玻璃器皿應徹底洗凈。先用洗滌劑浸泡清洗，然后用稀鹽酸浸泡，最后依次用自來水、菡蒸餾水洗凈。（3）在兩個或三個稀釋比的樣品中，凡消耗溶解氧大于 2mg/L 和剩余溶解氧大于 1mg/L 時，計算結果時，應取其平均值。若剩余的溶解氧小于 1mg/L，甚至為零時，應加大稀釋比。溶解氧消耗量小于2mg/L 時，有兩種可能，一是稀釋倍數(shù)過大；另一種可能是微生物菌種不適應，活性差，或含毒物質(zhì)濃度過大。這時可能出現(xiàn)在兩個稀釋比中，稀釋倍數(shù)大的消耗溶解反而較多的現(xiàn)象。（4）為檢查稀釋水和接種液的質(zhì)量，以及化驗人員的操作水平，可將 20m l 葡萄糖—谷氨標準溶液用接種稀釋水稀釋至 1000ml，按測定 BOD5 的步驟操作。測得 BOD5 值應在 180230mg/L 之間。否則應檢查接種液、稀釋水的質(zhì)量或操作技術是否存在問題。（5）水樣稀釋倍數(shù)超過 100 倍時，應預告在容量瓶中用水初步稀釋后，再取適量進行最后稀釋培養(yǎng)。、溶解氧溶解在水中的分子態(tài)氧稱為溶解氧。天然水的溶解氧含量取決于水體與大氣中氧的平衡。溶解氧的飽和量和空氣中氧的分壓、水溫有密切關系。清潔地面水溶解氧一般接近飽和。由于藻類的生長，溶解氧可能過飽和。水體受有機、無機還原性物質(zhì)污染，使溶解氧降低。當大氣中的氧來不及補充時，水中溶解氧逐漸降低，以至趨近于零，此時壓氧菌繁殖，水質(zhì)惡化。廢水中溶解氧的含量取決于廢水排出前的工藝過程，一般含量較低，差異很大。、方法的選擇測定水中溶解氧常采用碘量法及其修正法和膜電極法。清潔水可直接采用碘量法測定。水樣有色或含有氧化性及還原性物質(zhì)、藻類、懸浮特等干擾測定。氧化性物質(zhì)可使碘化物游離出碘，產(chǎn)生正干擾：某些還原性物質(zhì)可把碘還原成碘化物，產(chǎn)生負干擾；有機物（如腐植酸、丹寧酸、木質(zhì)素等）可能被部分氧化，產(chǎn)生負干擾。所以大部分受污染的地面水和工業(yè)廢水，必須采用修正的碘量法或膜電極法測定。水樣中亞硝酸鹽氮含量高于 ，二價鐵低于 1mg/L，采用疊氮化鈉修正法。此法適用于多數(shù)污水及生化處理出水；水樣中二價鐵高于 1mg/L，采用高錳酸鉀修正法；水樣有色或有縣浮物，采用明礬絮凝修正法；含有活性污泥懸濁物的水樣，采用硫酸銅氨基磺酸絮凝修正法。膜電極法是根據(jù)分子氧透過薄膜的擴散速率來測定水中溶解氧。方法簡便、快速，干擾少，可用干現(xiàn)27 / 94場測定。、水樣的采集與保存用碘量法測定水中溶解氧，水樣常采集到溶解氧瓶中。采集水樣時，要注意不使水樣曝氣或有氣泡殘存在采樣瓶中?？捎盟畼記_洗溶解氧瓶后，沿瓶壁直接傾注水樣或用虹吸法將細管插入溶解氧瓶底部，注入水樣至溢流出瓶容積的 1/3—1/2 左右。水樣采集后，為防止溶解氧的變化，應立即加固定劑于樣品中，并豐于冷暗處，同時記錄水濕和大氣壓力。碘量法水樣中加入硫酸錳和堿性碘化鉀，水中溶解氧將低價錳氧化成高價錳，生成四價錳的氫氧化物棕色沉淀。加酸后，氫氧化物沉淀溶解并與碘離子反應而釋出游離碘。以淀粉作指示劑，用硫代硫酸鈉滴定釋出碘，可計算溶解氧的含量。儀器250—300ml 溶解氧瓶試劑（1）硫酸錳溶液：稱取 480g 硫酸錳（MnSO 44H2O 或 364gMnSO4H2O）溶于水，用水稀釋至1000ml。此溶液加至酸化過碘化鉀溶液中，遇淀粉不得產(chǎn)生藍色。（2）堿性碘化鉀溶液：稱取 500g 氫氧化鈉溶解于 300—400ml 水中，另稱取 150g 碘化鉀（或135gNal）溶于 200ml 水中，待氫氧化鈉溶液冷卻后，將兩溶液合并，混勻，用水稀釋至 1000ml。如有沉淀，則放置過夜后，傾出上清液，貯于棕色瓶中。用橡皮塞塞緊，避光保存，此溶液酸化后，遇淀粉應不呈藍色。（3）1+5 硫酸溶液（4）1%（m/V）淀粉溶液：稱取 1g 可溶性淀粉