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2025-07-15 04:16本頁面
  

【正文】 g,五水硫酸銅,30g檸檬酸鈉,加水溶解并稀釋至1L,混勻備用。 銅試劑溶液:取銅儲備溶液50ml,加水50ml,混勻后加入固體無水硫酸鈉,并使其溶解。臨用現(xiàn)配。 洗滌劑:取水50ml,加入10ml銅試劑溶液、10ml氫氧化鈉溶液,混勻。 硫酸溶液(10%):取100ml濃硫酸加入到800ml左右水中,混勻,冷卻后稀釋至1L。 苯酚溶液(50g/L):,加水溶解并稀釋至100ml,混勻,溶液置冰箱中可保存1個月。 葡萄糖標準儲備液:,加水溶解并定容至50mL,混勻,置冰箱中保存,此溶液1mL含葡萄糖10mg。 葡萄糖標準使用液:,至于100ml容量瓶中,加水至刻度,混勻,置冰箱中保存。 儀器 離心機:4000r/min 50mL離心管或15mL具塞離心管 分光光度計 水浴鍋 漩渦混合器 實驗步驟 試樣處理~,置于100mL容量瓶中,加水80mL左右,于沸水浴中加熱2小時,冷卻至室溫后補加水至刻度(V1),混勻后過濾,棄去初濾液,收集續(xù)濾液供沉淀粗多糖。 沉淀粗多糖(V2),置于50mL離心管中(),加入無水乙醇20mL(或8mL),混勻5min后,以4000r/min離心5分鐘,棄去上清液,殘渣用80%乙醇溶液數(shù)毫升洗滌,離心后棄去上清液,反復操作34次,(V3)(根據糖濃度而定)?;靹蚝?,供沉淀粗多糖。準確吸取終濾液2ml,置于20ml離心管中,加入氫氧化鈉溶液(100g/L)、置沸水浴中煮沸兩分鐘,冷卻,以3000r/min離心5min,棄去上清液。殘渣用洗滌液數(shù)毫升洗滌,離心后棄去上清液,反復操作3次。殘渣用10%,加水稀釋至刻度,混勻。此溶液為樣品測定液。 標準曲線的繪制準確吸取葡萄糖標準使用液0、、(相當于葡萄糖0、、)置于25mL比色管中,加入苯酚溶液(50g/L),,在漩渦混合器上混勻,置沸水浴中加熱2min,取出,在流水中冷卻20min后,用分光光度計在485nm波長處,以試劑空白溶液為參比,1cm比色皿測定吸光度值。以葡萄糖質量為橫坐標,吸光度值為縱坐標,繪制標準曲線。 樣品測定(含糖20~100μg)。同時做樣品空白試驗。 計算:式中:X:樣品中粗多糖含量(以葡萄糖計),mg/100g;m1:樣品測定液中葡萄糖的質量,mg;m2:樣品測空白中葡萄糖的質量,mg;m3:樣品的質量,g;V1:樣品提取液總體積,mL;V2:沉淀粗多糖所用樣品提取液體積,mL;V3:粗多糖溶液體積,mL;V4:沉淀葡萄糖所用粗多糖溶液體積,mLV5:測定用樣品液體積,mL;V6:測定用樣品測定溶液體積,mL;計算結果保留二位有效數(shù)字。
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