【正文】 考核技能點(diǎn)編號(hào)：JN125（1）任務(wù)描述淀粉酶是指能催化分解淀粉分子中糖苷鍵的一類酶，包括α淀粉酶、β淀粉酶、異淀粉酶。α淀粉酶可以從淀粉分子內(nèi)部切斷淀粉的α1，4糖苷鍵，形成麥芽糖、含6個(gè)葡萄糖單位的寡糖和帶有支鏈的寡糖，使淀粉的粘度下降，因此又稱為液化型淀粉酶。淀粉遇碘呈藍(lán)色。這種淀粉碘復(fù)合物在660nm處有較大的吸收峰，可以用分光光度計(jì)測(cè)定。隨著酶的不斷作用，淀粉長(zhǎng)鏈被切斷，生成小分子糊精，使其對(duì)碘的藍(lán)色反應(yīng)逐漸消失，因此可以根據(jù)一定時(shí)間內(nèi)藍(lán)色消失的程度為指標(biāo)來測(cè)定α淀粉酶的活力。對(duì)于給定的淀粉酶，要求考生采用上述原理和相應(yīng)的方法測(cè)定淀粉酶的酶活力，并寫出實(shí)驗(yàn)報(bào)告和實(shí)驗(yàn)結(jié)果。（2）實(shí)施條件粗酶液或商品淀粉酶試劑：碘原液：稱取碘化鉀22g，加少量蒸餾水溶解，加入碘11g，溶解后定容至500ml，貯于棕色瓶中。比色用稀釋碘液：取碘原液2ml，加碘化鉀20g，用蒸餾水定容至500ml，貯于棕色瓶中。2%可溶性淀粉：稱取可溶性淀粉（干燥至恒重）2g，用少量蒸餾水混合調(diào)勻，徐徐傾入煮沸的蒸餾水中，邊加邊攪拌，煮沸2min后冷卻，加水定容至100ml，需當(dāng)天配制。－檸檬酸緩沖液：稱取磷酸氫二鈉（Na2HPO412H2O），用水溶解并定容至100ml。設(shè)備與器材：離心機(jī)，分光光度計(jì)，恒溫水浴鍋，試管架，秒表；試管，移液管，燒杯，離心管。（3）考核時(shí)量 操作完成時(shí)間：120分鐘（4）評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目序號(hào)評(píng)分技術(shù)點(diǎn)得分?jǐn)?shù)備注（現(xiàn)場(chǎng)記錄）1樣品移液過程202加液過程的操作（慢速加堿液）203對(duì)指示劑的觀察204結(jié)果記錄105結(jié)果處理106實(shí)驗(yàn)結(jié)束整理臺(tái)面57操作過程的熟練程度15試題編號(hào)：ST1213糖化酶酶活測(cè)定 考核技能點(diǎn)編號(hào)：JN125（1）任務(wù)描述糖化酶，全名葡萄糖淀粉酶，是淀粉糖化發(fā)酵生產(chǎn)酒精和葡萄糖漿的主要酶類。特別是釀酒酵母利用淀粉原料發(fā)酵時(shí)，淀粉液化后的糖化作用是必不可少的工序，因?yàn)榇蠖鄶?shù)釀酒酵母只能利用可發(fā)酵的糖進(jìn)行酒精發(fā)酵。同時(shí)還廣泛地用于抗生素、氨基酸、有機(jī)酸的生產(chǎn)。 對(duì)于給定的糖化酶，要求考生能夠利用一定的測(cè)定方法測(cè)定糖化酶活力，并完成相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)報(bào)告。本題目給出的實(shí)驗(yàn)條件為采用次碘酸鈉法測(cè)定糖化酶所需要的。（2）實(shí)施條件試劑：糖化酶2%可溶性淀粉溶液；； ；； 2mol/L硫酸溶液； ；%淀粉指示劑。器材：微量滴定管、滴定臺(tái)、試劑瓶、試管、三角瓶、pH計(jì)、電子天平。（3）考核時(shí)量 操作完成時(shí)間：120分鐘（4）評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目序號(hào)評(píng)分技術(shù)點(diǎn)得分?jǐn)?shù)備注（現(xiàn)場(chǎng)記錄）1樣品移液過程202加液過程的操作（慢速加堿液）203對(duì)指示劑的觀察204結(jié)果記錄105結(jié)果處理106實(shí)驗(yàn)結(jié)束整理臺(tái)面57操作過程的熟練程度15項(xiàng)目（三） 生物化學(xué)試題編號(hào)：ST131 氨基酸的分離鑒定—紙層析法考核 技能點(diǎn)編號(hào)：JN131（1）任務(wù)描述紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法；層析溶劑由有機(jī)溶劑和水組成；物質(zhì)被分離后在紙層析圖譜上的位置可用Rf值（比移）來表示。Rf = 原點(diǎn)到層析中心的距離247。原點(diǎn)到層析劑前沿的距離在一定的條件下某種物質(zhì)的Rf 值是常數(shù)。Rf 值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)、層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)利用紙層析法分離氨基酸。（2） 實(shí)施條件試劑與材料：①擴(kuò)展劑：將20mL的正丁醇和5mL的冰醋酸放入分液漏斗中，與15mL水混合，充分振蕩，靜止后分層，放出下層水層，上層液備用。②氨基酸溶液：%的賴氨酸，脯氨酸，纈氨酸，苯丙氨酸，亮氨酸溶液及它們的混合液③顯色劑：50~100mL %水合茚三酮正丁醇溶液(3)儀器與器材層析缸，層析濾紙，毛細(xì)管，噴霧器，培養(yǎng)皿（4） 考核時(shí)量考核時(shí)間：90分鐘（5） 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目序號(hào)評(píng)分技術(shù)點(diǎn)得分?jǐn)?shù)備注（現(xiàn)場(chǎng)記錄）1擴(kuò)展劑制備過程252點(diǎn)樣過程253終點(diǎn)判斷154結(jié)果處理155實(shí)驗(yàn)結(jié)束整理臺(tái)面56操作過程的熟練程度15試題編號(hào)：ST132DNA的瓊脂糖凝膠電泳 技能點(diǎn)編號(hào)：JN132（1） 任務(wù)描述DNA分子帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中受到電荷效應(yīng)、分子篩效應(yīng)向正極移動(dòng)過程中，因DNA分子的大小及構(gòu)象差別而呈現(xiàn)遷移位置上的差異，對(duì)于線形DNA分子，其電場(chǎng)中的遷移率與其分子量的對(duì)數(shù)值成反比。電泳時(shí)加溴化乙錠（EB），其與DNA結(jié)合形成一種熒光絡(luò)合物，在254~365 nm紫外線照射下可產(chǎn)生熒光，可用于檢測(cè)DNA。如有必要可從凝膠中回收DNA片段，用于分子克隆或探針標(biāo)記等操作。掌握水平式瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA的原理和操作，通過DNA瓊脂糖凝膠電泳可知DNA的純度、含量和相對(duì)分子量。（2） 實(shí)施條件試劑與材料：5 TBE緩沖液（）：54 g Tris堿， g硼酸，20 mL mol／L EDTA (pH )，加水至1 L。 TBE緩沖液（pH ）。溴化乙錠（EB）（5 mg／mL）。1％~2％瓊脂糖凝膠：瓊脂糖1~2g加至100 mL TBE緩沖液，加熱熔解備用。6 凝膠上樣緩沖液：％ 溴酚藍(lán)，％ 二甲苯青FF，30％ 甘油溶于水中，于4℃ 保存。DNA標(biāo)準(zhǔn)分子量。儀器與器材：電泳儀，電泳槽，紫外檢測(cè)儀或凝膠成像系統(tǒng)，微波爐（電爐），手套，移液器，錐形瓶和玻璃棒（3） 考核時(shí)量考核時(shí)間：90分鐘（4） 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目序號(hào)評(píng)分技術(shù)點(diǎn)得分?jǐn)?shù)備注（現(xiàn)場(chǎng)記錄）1點(diǎn)樣過程252跑膠的時(shí)間控制253終點(diǎn)判斷154結(jié)果處理155實(shí)驗(yàn)結(jié)束整理臺(tái)面56操作過程的熟練程度15試題編號(hào)：ST133梯度PAGE分離血清蛋白 技能點(diǎn)編號(hào)：JN133（1） 任務(wù)描述丙烯酰胺與甲叉雙丙烯酰胺在過硫酸銨和TEMED的作用下，可以形成一定大小的網(wǎng)孔，丙烯酰胺與甲叉雙丙烯酰胺的濃度越高，形成的網(wǎng)孔越小。如果將丙烯酰胺與甲叉雙丙烯酰胺制成梯度，即平板的下面丙烯酰胺與甲叉雙丙烯酰胺濃度高，越往上濃度越小，這樣平板膠從上往下形成的網(wǎng)孔越來越小。由于不同蛋白質(zhì)的分子大小不同，在這樣的梯度膠中電泳，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)分子的直徑大于網(wǎng)孔的孔徑時(shí)，蛋白質(zhì)不能再往前泳動(dòng)，形成蛋白帶，因而通過梯度膠電泳可以將不同大小的蛋白質(zhì)分開。通過這一方法可以測(cè)定天然蛋白質(zhì)的分子量。掌握梯度PAGE電泳的原理與方法及其應(yīng)用。（2） 實(shí)施條件試劑與材料：20TBE緩沖液的配制：Tris +EDTA +硼酸 ，溶解后定溶至100mL（也可以用TrisHCl緩沖液）30%丙烯酰胺與甲叉雙丙烯酰胺：30g Acr + Bis,用TBE緩沖液溶解后定容至100 mL，過濾備用4%丙烯酰胺與甲叉雙丙烯酰胺：4g Acr + Bis,用TBE緩沖液溶解后定容至100 mL，%AP與TEMED蔗糖溴酚藍(lán)： 溴酚藍(lán) +30 % Ap：現(xiàn)配現(xiàn)用TEMED染色液：1g考馬斯亮藍(lán) R250 + 36mL冰醋酸 +182mL 甲醇 + 182mL 水脫色液：150mL 冰醋酸 + 100mL 甲醇 +1750mL 水混勻人血清+少量溴酚藍(lán)+甘油至甘油濃度達(dá)5%（也可以加入蔗糖代替甘油），作為上樣樣品豬血清+少量溴酚藍(lán)+甘油至甘油濃度達(dá)5%（也可以加入蔗糖代替甘油），作為上樣樣品兔血清+少量溴酚藍(lán)+甘油至甘油濃度達(dá)5%（也可以加入蔗糖代替甘油），作為上樣樣品魚血清+少量溴酚藍(lán)+甘油至甘油濃度達(dá)5%（也可以加入蔗糖代替甘油），作為上樣樣品儀器電泳儀與北京六一垂直電泳槽，天平，恒流泵，梯度混合器，移液器。（3） 考核時(shí)量考核時(shí)間：90分鐘（4） 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目序號(hào)評(píng)分技術(shù)點(diǎn)得分?jǐn)?shù)備注（現(xiàn)場(chǎng)記錄）1點(diǎn)樣過程252跑膠的時(shí)間控制253終點(diǎn)判斷154結(jié)果處理155實(shí)驗(yàn)結(jié)束整理臺(tái)面56操作過程的熟練程度15試題編號(hào)：ST134 血紅蛋白吸收曲線的繪制 技能點(diǎn)編號(hào)：JN134（1） 任務(wù)描述物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光吸收度是由該物質(zhì)的特性決定的，如果以光波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，對(duì)特定物質(zhì)的光吸收特性作圖，即為該物質(zhì)的吸收曲線。不同物質(zhì)由于有特定的吸收曲線，故可通過測(cè)定吸收曲線為物質(zhì)定性分析提供依據(jù)，同時(shí)也可為物質(zhì)的定量分析尋找最大吸收波長(zhǎng)。掌握可見分光光度計(jì)的使用方法，熟悉吸收曲線繪制的原理、操作及意義。（2） 實(shí)施條件試劑與材料：①蒸餾水②血紅蛋白水溶液：取抗凝血清約2mL于離心管中，2500rpm離心5min，棄上層血漿，每次加入5mL生理鹽水，攪起沉淀，1000rpm離心3min后，倒掉上清液，這樣用生理鹽水共洗滌沉淀2次。將血細(xì)胞用10mL蒸餾水溶解，破細(xì)胞后，3000rpm離心10min，取上清，再利用蒸餾水稀釋到415nm處的消光值為1左右，放入冰箱備用。儀器與器材：722S可見分光光度計(jì)，坐標(biāo)紙（3） 考核時(shí)量考核時(shí)間：90分鐘（4） 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目序號(hào)評(píng)分技術(shù)點(diǎn)得分?jǐn)?shù)備注（現(xiàn)場(chǎng)記錄）1曲線的制作252分光光度計(jì)的使用253比色皿的選擇154結(jié)果處理155實(shí)驗(yàn)結(jié)束整理臺(tái)面56操作過程的熟練程度15試題編號(hào)：ST135茯苓多糖和豬苓多糖水解和鑒定 技能點(diǎn)編號(hào)：JN135（1） 任務(wù)描述茯苓多糖和豬苓多糖，分別是中藥茯苓和豬苓的主要成分。茯苓多糖是含有β－l，3糖苷鍵和β－l，6糖苷鍵的葡聚糖；豬苓多糖是水溶性多聚糖。它們經(jīng)濃硫酸脫水產(chǎn)生糠醛或糠醛衍生物，再在無機(jī)酸作用下，能與α－萘酚生成紫紅色縮合物(molish反應(yīng))。茯苓多糖和豬苓多糖都是無還原性多糖，當(dāng)它們用酸水解后，則生成還原性單糖。利用班氏試劑與其作用，可生成磚紅色沉淀氧化亞銅，以反映其水解。掌握茯苓多糖和豬苓多糖的水解與鑒定的原理與方法。 （2） 實(shí)施條件試劑與材料： ①2％茯苓懸濁液：稱取1 g茯苓粉，加水調(diào)勻，傾入沸水，邊加邊攪，總水量為100 mL，煎煮至50 mL。②2％豬苓懸濁液：制備方法同茯苓懸濁液。③莫氏試劑：稱取a－萘酚5 g溶于95％酒精中，并稀釋到100 mL，需新鮮配制。④ 濃硫酸。⑤ 濃鹽酸。⑥20％ NaOH溶液。⑦ pH試紙。⑧ 班氏試劑：取硫酸銅（CuSO 4 5H2O) mL水中，另以檸檬酸鈉173 g，無水碳酸鈉l00 g溶于700 mL水中。將上述兩溶液合并，用水定溶至1000 mL。儀器與器材：水浴鍋，試管，滴管，移液管（3） 考核時(shí)量考核時(shí)間：90分鐘（4） 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目序號(hào)評(píng)分技術(shù)點(diǎn)得分?jǐn)?shù)備注（現(xiàn)場(chǎng)記錄）1移液管的操作202滴定管的使用253PH試紙的使用154結(jié)果處理155實(shí)驗(yàn)結(jié)束整理臺(tái)面106操作過程的熟練程度15試題編號(hào)：ST136肝組織中核酸的分離與鑒定 技能點(diǎn)編號(hào)：JN136（1） 任務(wù)描述組織細(xì)胞中的核糖核酸(RNA)與脫氧核糖核酸(DNA)大部分與蛋白質(zhì)結(jié)合而形成核蛋白。由于三氯醋酸可以沉淀蛋白質(zhì)，所以核蛋白可被三氯醋酸沉淀，再用10％NaCl溶液可以將核酸從沉淀中溶解出來，而70%左右的乙醇可以沉淀溶液中的核酸，故在10%NaCl溶出液中加入乙醇到適當(dāng)濃度后可使核酸沉淀析出。RNA與DNA均可被硫酸水解產(chǎn)生磷酸、有機(jī)堿(嘌呤和嘧啶)和戊糖(RNA含核糖，DNA含脫氧核糖)，此三類化合物可用下述方法鑒定。①磷酸與鉬酸銨作用產(chǎn)生磷鉬酸，后者在還原劑氨萘酚磺酸作用下形成藍(lán)色的鉬藍(lán)。②嘌呤堿與硝酸銀產(chǎn)生灰褐色的嘌呤銀化合物。③核糖經(jīng)濃鹽酸或濃硫酸作用生成糠醛，后者和3，5—二羥甲苯縮合而成綠色化合物。④脫氧核糖在濃酸中生成ω羥[基] –γ酮[基]戊醛，后者與二苯胺作用生成藍(lán)色化合物。⑤需要掌握離心機(jī)的使用以及核酸分離與鑒定的原理和方法。（2） 實(shí)施條件試劑與材料：2 2%三氯醋酸②95%乙醇③%NaCl溶液④10％NaCl溶液⑤5％H2S04溶液⑥5％AgNO3溶液⑦鉬酸銨試劑：，用水稀釋至100mL。此試劑可在冰箱中保存30天。⑧氨[基]萘酚磺酸：市售氨[基]萘酚磺酸(4Aminonaphthal Sulfonic acid)為暗紅色，純煉如下：在100mL熱水(90℃)中溶解15gNaHSO3及1gNa2S04，[基]萘酚磺酸，攪勻使其大部分溶解(僅少量雜質(zhì)不溶解)，趁熱過濾，再迅速使濾液冷卻。加1mL濃鹽酸(12mol／L)有白色氨基萘酚磺酸沉淀析出，過濾并用水洗滌固體數(shù)次，再用乙醇洗滌，直至純白色為止，最后用乙醚洗滌，并將固體放置在暗處，使乙醚揮發(fā)，將此提純的氨基萘酚磺酸保存于棕色瓶中。取15％NaHSO3溶液195mL(必須透明)，[基]奈酚磺酸及20％的Na2SO3 5 mL。并在熱水浴中攪拌使固體溶解(如不能全部溶解，再加20%Na2SO3溶液每次數(shù)滴，但加入量以lmL為限度)，置冷處可保存2~3周，如顏色變黃時(shí)，要重新配制。⑨二苯胺試劑：取1g純的二苯胺溶于100mL冰醋酸(AR)中，放在棕色瓶中，此試劑也須臨時(shí)配制。⑩3，5—二羥甲苯試劑： l00 mL加入FeCl36