高二生物基因工程和細胞工程-資料下載頁
2025-10-31 03:47本頁面
【導讀】又稱DNA文庫，是指某個生物的基因組DNA. 基因文庫由外源DNA片段、載體和宿主細胞。將某種生物體的全部基因組DNA用限制性內。應的宿主細胞獲得的所有陽性菌落。1)提取研究對象基因組DNA，制備合適大小的DNA片段，或提取組織或器官的mRNA并反轉錄成cDNA；3)重組DNA轉化宿主細胞或體外包裝后侵染受體菌；4)陽性重組菌落或噬菌斑的篩選。因此，要想從龐大的基因組中分離某個特定。探針是一小段帶標記的單鏈DNA或者RNA. 最初是使用帶放射性的DNA探針，通過放射自顯。設計合成一對引物，直接從基因組DNA中擴增該。依照其他物種中該基因的保守區(qū)段序列設計引物，cDNA文庫中釣出該基因。PCR法獲取目的基因的前提是：要有足夠制備。降解的DNA材料都可以作為起始材料；目的基因的獲得通常采用PCR法；化。子檢測混合樣品中未知核酸分子或蛋白質分子。根據(jù)其檢測對象的不同可分為Southern雜交。將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼。通過顯影檢查目的DNA所在的位置。中文一般稱為蛋白質印跡技術。
【正文】 嘌呤基形成嘌呤單磷酸核苷酸，而 TK可催化胸苷轉化為 5’單磷酸胸苷，作為胸苷脫氧核苷酸合成的材料。 HAT選擇培養(yǎng)基 ? 含次黃嘌呤（ H）、氨基蝶呤（ A）和胸腺嘧啶核苷（ T）的培養(yǎng)基，是動物雜交細胞篩選中最常用的方法。在這種培養(yǎng)基中細胞只能利用旁路途徑合成 DNA，因而只有具有 HGPRT+或 /和 TK+的細胞才能生長 。 在 HAT選擇培養(yǎng)基中 骨髓瘤瘤細胞（ HGPRT或 TK）及其同核體： 不能增殖， → 死亡； B淋巴細胞及其同核體： 體外培養(yǎng)條件下增殖次數(shù)有限， → 死亡； 雜交瘤細胞： → 存活 陽性細胞的篩選 ? 將融合細胞充分稀釋，進行克隆培養(yǎng)；然后再通過酶聯(lián)免疫吸附測定 ( ELISA) ，篩選出能夠分泌較高水平抗體的融合細胞，即陽性細胞，再進行克隆化培養(yǎng)。 雜交瘤細胞的克隆培養(yǎng) ? 有限稀釋法 ：將稀釋到一定密度的雜交瘤細胞接種到 96孔培養(yǎng)板中，盡可能使每個孔中只有一個細胞生長； ? 軟瓊脂培養(yǎng)法 ：軟瓊脂的半固態(tài)性質，使單個的雜交瘤細胞在相對固定的位置上增殖形成細胞克隆。 ? 一般情況下，雜交瘤細胞的染色體處于不穩(wěn)定狀態(tài)，因此當細胞分裂時，染色體分配不平衡，易造成雜交瘤細胞在分裂增殖過程中失去抗體分泌能力，所以克隆化培養(yǎng) 3～ 5次后，才能獲得穩(wěn)定基因型和穩(wěn)定分泌特異性抗體的細胞。 單克隆抗體的大量制備 ? 體內法：將穩(wěn)定的單克隆細胞注入到小鼠腹腔培養(yǎng)，然后從腹水中分離、提取單克隆抗體。 ? 細胞培養(yǎng)：體外克隆培養(yǎng)，再從培養(yǎng)液中回收產生的抗體。 單克隆抗體的純化 ? 通過上述培養(yǎng)之后獲得的培養(yǎng)液或腹水，其中除了單克隆抗體之外，還有無關的蛋白質等其他物質，因此必須對產品做分離純化。目前，常用的方法有硫酸銨沉淀法、鹽析法、離子交換、凝膠過濾或親和層析等等。一般是綜合采用幾種方法分步進行純化。 單克隆抗體的應用 ? 1. 作為親合層析的配體 ? 單克隆抗體能與其相應的抗原特異性結合，因而能夠從復雜系統(tǒng)中識別出單個成分。只要得到針對某一成分的單克隆抗體，利用它作為配體，固定在層析柱上，通過親合層析，即可從復雜的混和物中分離、純化這一特定成分。如用抗人絨毛膜促性腺激素 (hCG)親合層析柱，就可從孕婦尿中提取到純的 hCG。與其它提取方法 (沉淀法、高效疏水色譜法等 )相比，具有簡便、快速、經濟、產品活性高等優(yōu)點。 2. 作為生物治療的導向武器 ? 將針對某一腫瘤抗原的單克隆抗體與化療藥物或放療物質連接，利用單克隆抗體的導向作用，將化療藥物或放療物質攜帶至靶器官，可直接殺傷靶細胞。 ? 另外，將放射性標記物與單克隆抗體連接，注入患者體內可進行放射免疫顯像，協(xié)助腫瘤的診斷。 治療用脂質體 ? 單克隆抗體以其特異性強、純度高、均一性好等優(yōu)點，廣泛應用于酶聯(lián)免疫吸附試驗、放射免疫分析、免疫組化和流式細胞儀等技術，目前，應用單克隆抗體制作的商品化試劑盒廣泛應用于：①病原微生物抗原、抗體的檢測；②腫瘤抗原的檢測；③免疫細胞及其亞群的檢測；④激素測定；⑤細胞因子的測定。 4. 作為研究抗原的探針 ? 例如前面講的 Western blotting。 5. 作為免疫抑制劑 ? 抗人 T淋巴細胞單抗 (McAb)作為一種新型免疫抑制劑，已廣泛應用于臨床治療自身免疫疾病和抗器官移植的排斥反應。注射抗小鼠 Thy1抗原的單抗，可以抑制小鼠同種皮膚移植的排斥反應。此外，對用于同種骨髓移植的供體骨髓，在體外經抗 T細胞單抗加補體處理，能減輕移植物抗宿主病的發(fā)生。
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