【正文】 m——樣品質(zhì)量，g。6. 注意事項(xiàng)① 原子吸收分光光度計(jì)的型號(hào)不同，所用標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度應(yīng)按儀器的靈敏度進(jìn)行調(diào)整；② 原子吸收分光光度法中配制試劑要求使用去離子水，所用試劑為優(yōu)質(zhì)純或高純?cè)噭貌Ａ髅笥孟跛幔舛?0%~20%）浸泡24h以上，然后用水反復(fù)沖洗干凈，最后用去離子水沖洗干凈后晾干備用。7. 作業(yè)記錄檢測(cè)過(guò)程，計(jì)算檢測(cè)結(jié)果，寫出實(shí)習(xí)報(bào)告。（二）農(nóng)產(chǎn)品中銅的測(cè)定——比色法1. 原理 樣品經(jīng)消化后，在堿性溶液中與二乙氨基二硫代甲酸鈉（銅試劑）作用，生成棕黃色絡(luò)合物。此絡(luò)合物能溶于四氯化碳中，可用于比色測(cè)定。2. 試劑、儀器、材料（1）試劑① 檸檬酸銨乙二胺四乙酸二鈉溶液。稱取20g檸檬酸銨及乙二胺四乙酸二鈉溶于水中，并用水定容至100mL。② 硫酸溶液[c（H2SO4）= 1mol? L1]。量取20mL濃硫酸，慢慢倒入300mL水中，冷卻后用水稀釋至360mL。③ 硝酸溶液[c（HNO3）= 6mol? L1]。量取60mL硝酸，加水稀釋至160mL。④ 酚紅指示劑（1g?L1）。⑤ 二乙氨基二硫代甲酸鈉（1g?L1）。即銅試劑溶液，過(guò)濾后貯存于冰箱中。⑥ 氨水（1+1）。⑦ 四氯化碳。⑧ 銅標(biāo)準(zhǔn)貯備液。精確稱取1g金屬銅（%），分次加入硝酸[c（HNO3）= 6mol? L1]溶解，酸總量不超過(guò)37mL，移入1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于1mg銅。⑨ 銅標(biāo)準(zhǔn)使用液（10g?mL1，）。準(zhǔn)確吸取10mL銅標(biāo)準(zhǔn)貯備液，置于100mL容量瓶中，用硫酸溶液[c（H2SO4）= 1mol? L1]稀釋至刻度，如此再稀釋一次。（2）儀器① 分光光度計(jì)；② 消化裝置。（3）材料 商品茶葉。3. 操作方法（1）樣品處理與消化① 樣品處理：將茶葉待測(cè)樣品復(fù)火干燥，研末。② 消化：，置于500mL凱氏燒瓶中，先加少量水濕潤(rùn)，加數(shù)粒玻璃珠，加硝酸硫酸混合液10～15mL，放置片刻，以小火緩慢加熱，待作用緩和后，放冷，沿瓶壁加入5mL或10mL硫酸，再加熱，當(dāng)瓶中液體開(kāi)始變成棕色時(shí)，不斷沿瓶壁滴加硝酸硫酸混合液，直至有機(jī)物分解完全。加大火力，至濃白煙冒出、溶液澄清無(wú)色或微帶黃色為止，放冷。在操作過(guò)程中注意防止爆炸。加入20mL水煮沸，除去殘余的硝酸至產(chǎn)生白煙為止，如此處理2次。冷卻后轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中，用水洗滌凱氏燒瓶，洗液并入容量瓶中，放冷，加水至刻度，混勻。③ 空白試驗(yàn)：取與消化樣品相同量的硝酸硫酸混合液，按同一方法做試劑空白試驗(yàn)。（2）測(cè)定① 準(zhǔn)確吸取消化定容后的溶液和試劑空白溶液各10mL，分別置于125mL分液漏斗中，加水稀釋至20mL。② 、、分別置于125mL分液漏斗中，加硫酸溶液[c（H2SO4）= 1mol? L1]至20mL。③ 于樣品消化液、試劑空白和銅標(biāo)準(zhǔn)使用液中，各加檸檬酸銨乙二胺四乙酸二鈉溶液5mL和酚紅指示劑3滴，混勻后用氨水（1+1）調(diào)至紅色。再各加2mL銅試劑和10mL四氯化碳，劇烈振搖2min。靜置分層后，將四氯化碳層經(jīng)脫脂棉濾入2cm比色皿中，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)440nm處測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較。4. 計(jì)算式中 X——樣品中銅的含量，mg?L1 （或mg?kg1）；A1 ——測(cè)定用樣品消化液中銅的含量，μg；A2——試劑空白液中銅的含量，μg；V1——樣品消化液的總體積，mL；V2——測(cè)定用樣品消化液的體積，mL；m——樣品質(zhì)量（體積），g（mL）。5. 說(shuō)明① ，否則會(huì)使結(jié)果偏低；② ，測(cè)定的適宜范圍是4~20μg。6. 作業(yè) 記錄操作過(guò)程，計(jì)算檢測(cè)結(jié)果，寫出實(shí)習(xí)報(bào)告。（三）農(nóng)產(chǎn)品中硒的測(cè)定——熒光法1. 原理樣品經(jīng)混合酸硝化后，硒化合物被氧化為四價(jià)無(wú)機(jī)硒（Sn4+），與2,3二氨基萘反應(yīng)生成4,5苯并丕硒腦，其熒光強(qiáng)度與與硒的濃度在一定條件下成正比。用環(huán)己烷萃取后激發(fā)波長(zhǎng)376nm，發(fā)射波長(zhǎng)520nm處測(cè)定熒光強(qiáng)度，與繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。2. 儀器、材料（1）檢測(cè)儀器 熒光分光光度計(jì)。（2）檢測(cè)材料大米。3. 試劑⑴ 環(huán)己烷。⑵ 硝酸。⑶ 高氯酸。⑷ 鹽酸。⑸ 氫溴酸。⑹ 鹽酸溶液（1+9）。⑺ 氨水（1+1）。⑻ 去硒硫酸（5+95）。取200mL硫酸，加于200mL水中，再加30mL氫溴酸，混勻，置砂浴上加熱，蒸去硒與水，至出現(xiàn)濃白煙，此時(shí)體積應(yīng)為200mL。⑼ EDTA溶液[c（EDTA）= ?L1]。稱取37gEDTA二鈉鹽，加水并加熱溶解，冷卻后稀釋至500mL。⑽ 鹽酸羥氨溶液（100g?L1）。⑾ 混合酸（硝酸高氯酸2+1）。⑿ 2,3二氨基萘（1g?L1）。稱取200mg2,3二氨基萘（純度95%~98%）于一具塞錐形瓶中，加鹽酸溶液[c（HCl）= ?L1]200mL，振搖15min，使其全部溶解。約加40mL環(huán)己烷，繼續(xù)振搖5min，將此液轉(zhuǎn)入分液漏斗中，待溶液分層后，棄去環(huán)己烷層，收集2,3二氨基萘層溶液。如此用環(huán)己烷純化2,3二氨基萘，直至環(huán)己烷中的熒光數(shù)值降至最低時(shí)為此。將提純后的2,3二氨基萘貯存于棕色瓶?jī)?nèi)，約加1cm厚的環(huán)己烷覆蓋表面，置冰箱內(nèi)保存。⒀ 硒標(biāo)準(zhǔn)貯備液。（光譜純），溶于少量硝酸中，加2mL高氯酸，置沸水浴中加熱3~4h，再置沸水浴中加熱2min，準(zhǔn)確稀釋至1000mL，此貯備液的濃度為100g?mL1。⒁ 硒標(biāo)準(zhǔn)使用液。將標(biāo)準(zhǔn)貯備液用鹽酸溶液[c（HCl）= ?L1]?mL1，于冰箱內(nèi)保存。⒂ 甲酚紅指示劑（?L1）。稱取50mg甲酚紅溶于水中，加氨水（1+1）1滴，待甲酚紅完全溶解后加水稀釋至250mL。⒃ EDTA混合液。取EDTA[c（EDTA）= ?L1]和鹽酸羥氨溶液（100g?L1）各5mL，混勻后再加甲酚紅指示劑（?L1）5mL，用水稀釋至1000mL。4. 操作方法（1）樣品處理與消化① 樣品處理。大米樣品用水洗三次，60℃烘干，用不銹鋼磨磨成粉，貯于塑料瓶中，放一小包樟腦精，密封保存，備用。② 樣品消化。～，加10mL去硒硫酸（5+95），樣品濕潤(rùn)后，再加20mL混合酸放置過(guò)夜。次日于砂浴上逐漸加熱，當(dāng)激烈反應(yīng)發(fā)生后（此時(shí)溶液變無(wú)色），繼續(xù)加熱至產(chǎn)生白煙，溶液逐漸變?yōu)榈S色即為終點(diǎn)。（2）測(cè)定 于樣品消化液中加20mLEDTA混合8，用氨水（1+1）或鹽酸調(diào)至溶液呈淡紅色（或橙色），～。在暗室中進(jìn)行以下步驟：加3mL 2,3二氨基萘試劑，混勻，置沸水浴中加熱5min，取出立即冷卻，加3mL環(huán)己烷，振搖4min，將全部溶液移入分液漏斗中，待分層后棄去水層，環(huán)己烷層轉(zhuǎn)入具瓶塞試管中，小心勿使環(huán)己烷中混入水滴，于激發(fā)波長(zhǎng)376nm，發(fā)射波長(zhǎng)520nm處測(cè)定丕硒腦的熒光強(qiáng)度。（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 準(zhǔn)確吸取硒標(biāo)準(zhǔn)使用液0mL、加水至5mL，按樣品測(cè)定步驟進(jìn)行操作，熒光強(qiáng)度與硒含量成線性關(guān)系。5. 計(jì)算式中 X——樣品中硒的含量，μg?g1；A——標(biāo)準(zhǔn)管熒光讀數(shù)；B——空白管熒光讀數(shù)；C——樣品管熒光讀數(shù)；S——標(biāo)準(zhǔn)管硒含量，μg；m——樣品質(zhì)量，g。6. 作業(yè)詳細(xì)記錄檢測(cè)過(guò)程，寫出實(shí)習(xí)報(bào)告。實(shí)訓(xùn)項(xiàng)目十七、茶葉鮮葉中單寧物質(zhì)含量的測(cè)定各種植物中都含有單寧物質(zhì)。單寧物質(zhì)含量的多少，對(duì)果蔬的鮮食和加工有一定的影響，也是茶葉鮮葉適制茶類的依據(jù)之一。測(cè)定單寧物質(zhì)的含量，是制訂制茶工藝、鑒定果蔬質(zhì)量和成熟度的指標(biāo)之一。通過(guò)實(shí)訓(xùn)，使學(xué)生了解單寧物質(zhì)的測(cè)定原理，掌握測(cè)定的方法。農(nóng)產(chǎn)品中單寧物質(zhì)的測(cè)定，目前多采用高錳酸鉀滴定法、比色法、皮粉法、EDTA絡(luò)和滴定法。 （一） 高錳酸鉀滴定法1. 原理單寧物質(zhì)是一種強(qiáng)烈的還原劑，極易被氧化。因此可以用高錳酸鉀為氧化劑，根據(jù)單寧被活性炭吸收前后的氧化值之差計(jì)算單寧物質(zhì)的含量。靛紅（靛藍(lán)二磺酸鈉）能被高錳酸鉀氧化從藍(lán)變黃紅，從而指示終點(diǎn)。2. 材料、儀器用具、試劑（1）檢測(cè)材料茶葉鮮葉（2）儀器用具研缽，100mL、500mL、1000mL燒杯，100mL、500mL量筒，10mL、20mL移液管，250mL容量瓶，250mL錐形瓶，滴定管，漏斗，濾紙，水浴鍋等。（3）試劑及標(biāo)定① 高錳酸鉀[c（KMnO7）= ?L1]標(biāo)準(zhǔn)溶液。，冷卻后移入1000mL容量瓶中，定容至刻度，?L1草酸溶液標(biāo)定。② 靛紅溶液（1g?L1）。稱取靛紅（C16H8N2O8S2Na2）1g，溶解于50mL濃硫酸中，如難于溶解，可在水浴中加熱盜60℃，保持4h，然后稀釋到1000mL。③ 顆粒狀活性炭（骨炭）。3. 檢測(cè)方法（1）樣品液制備 稱取茶葉鮮葉20～30g，在研缽中磨碎，小心移入250mL錐形瓶中，用150mL蒸餾水沖洗附在研缽、錐形瓶上的樣品細(xì)粒。在錐形瓶?jī)?nèi)插一支溫度計(jì)，放入水浴鍋上加熱到80℃，持續(xù)30min，取出冷卻到室溫，再移入250mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，過(guò)濾到50mL燒杯中備用。（2）測(cè)定 ，于1000mL燒杯中，準(zhǔn)確加入靛紅液25mL，水750mL，用高錳酸鉀[c（KMnO4）= ?L1]標(biāo)準(zhǔn)溶液快速滴定至黃綠色，再緩慢滴定至明亮的金黃色，即為終點(diǎn)，記錄滴定結(jié)果。另取試液10mL，加入活性炭2～3g，置水浴上加熱攪拌，過(guò)濾，用熱水洗滌數(shù)次，于濾液中準(zhǔn)確加入靛紅液25mL，水750mL，用上法滴定，記錄滴定結(jié)果。4. 結(jié)果計(jì)算式中 X——茶葉鮮液中單寧的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%； c——高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol?L1； V1——滴定樣品所消耗的高錳酸鉀溶液的毫升數(shù)，mL； V2——樣品中單寧被吸收后所消耗的高錳酸鉀溶液的毫升數(shù)，mL； V3——滴定時(shí)所用樣品液毫升數(shù)，mL； V4——制成樣品液的總毫升數(shù)，mL； W——樣品的克數(shù)，g； 5——換算系數(shù)。5. 作業(yè)① 將測(cè)定數(shù)據(jù)填入下列表格中；樣 品名 稱樣品重量（g）樣品溶液用量（mL） 樣品溶液體積（mL）高錳酸鉀用量（mL）單寧含量（%）活性炭吸收前活性炭吸收后② 列出計(jì)算式并計(jì)算結(jié)果；③ 寫出實(shí)訓(xùn)報(bào)告。 （二） 比色法1. 原理 樣品中的單寧在堿性溶液中將磷鎢鉬酸還原，生成深藍(lán)色化合物，其顏色深淺與單寧的含量成正比，可與標(biāo)準(zhǔn)色階進(jìn)行比較定量。2. 材料、儀器與試劑(1) 檢測(cè)材料 茶葉鮮葉。（2）儀器 組織搗碎機(jī)或研缽、分光光度計(jì)。（3）試劑① 標(biāo)準(zhǔn)單寧溶液（mL1）。準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)單寧50mg，溶解后用水稀釋至100mL，用時(shí)現(xiàn)配。② FD（FolinDonis）試劑。稱取鎢酸鈉（Na2WO42H2O）50g，磷鉬酸10g，置于50mL錐形瓶中，加375mL水溶解，再加磷酸25mL，接上冷凝管，在沸水浴上加熱回流2h，冷卻后用水稀釋至500mL。③ 偏磷酸溶液（60gL1）。分析純，如有渾濁則需過(guò)濾。④ 碳酸鈉溶液[c(Na2CO3)=1molL1]。稱取無(wú)水碳酸鈉53g，加水溶解并稀釋至500mL。⑤ 乙醇（=95%）及乙醇（=75%）。分析純。3. 方法步驟(1) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 、、各加入乙醇（=75%） mL，偏磷酸溶液（60mgL1），水25 mL， mL，碳酸鈉溶液[c(Na2CO3)=1molL1]10 mL，劇烈震搖，以水稀釋至刻度，充分混合。于30℃，用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)680nm處測(cè)定吸光度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。(2) 樣品測(cè)定 稱取茶葉鮮葉50g，加入乙醇（=95%）50 mL，偏磷酸溶液（60mgL1）50mL，水50 mL，置于高速組織搗碎機(jī)中打漿1min（或研缽中研磨成糊狀）。稱取勻漿20g于100mL容量瓶中，加入乙醇（=75%）40mL，在沸水浴上放置20min，冷卻后用乙醇（=75%）稀釋至刻度。充分混合，以慢速定量濾紙過(guò)濾，棄去初濾液。吸取上述濾液2mL，置于已盛有25 mL水、 mL的50 mL容量瓶中，然后加入碳酸鈉溶液[c(Na2CO3)=1molL1]10 mL，劇烈震搖后，以水稀釋至刻度，充分搖勻（此時(shí)溶液的藍(lán)色逐漸產(chǎn)生）。同時(shí)進(jìn)行一空白試驗(yàn)。待測(cè)液于30℃，用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)680nm處，以試劑空白調(diào)零，測(cè)定吸光度。4. 結(jié)果計(jì)算式中 X—樣品中單寧的質(zhì)量分?jǐn)?shù)：%； c—比色用樣品溶液中單寧含量：μg； m—樣品質(zhì)量：g； K—稀釋倍數(shù)：如按上述方法取樣50g時(shí)，K=（20/200）（2/100）=1/500。5. 注意事項(xiàng)① 樣品處理時(shí)要盡快進(jìn)行，以免單寧氧化而造成誤差。② 維生素C也能與FD試劑作用產(chǎn)生藍(lán)色，因此若樣品中含有維生素C時(shí)需進(jìn)行校正。6. 作業(yè) 寫出實(shí)習(xí)報(bào)告。36 / 3