【正文】 順著肌纖維方向，而且止血鉗插入不宜過(guò)深，以防損傷深層的氣管和血管。（2）頸總動(dòng)脈插管 頸總動(dòng)脈插管是將一根充滿肝素或其它抗凝劑溶液的導(dǎo)管插入頸總動(dòng)脈，可用于檢測(cè)多種生理、病理、藥物因素作用時(shí)動(dòng)脈血壓的變化，也可用于采集動(dòng)脈血樣，是機(jī)能實(shí)驗(yàn)最常用的技術(shù)。所需實(shí)驗(yàn)器材與上述“氣管插管”的相同，但需增加動(dòng)脈導(dǎo)管、動(dòng)脈夾、三通管、1%肝素生理鹽水。肝素粉劑用于體外抗凝時(shí),～1%的肝素生理鹽水溶液；肝素針劑用于體外抗凝時(shí),可配成500U～1000U/ml的肝素生理鹽水溶液。體外抗凝還可用6%的枸櫞酸鈉溶液。動(dòng)物的麻醉與固定、頸部剪毛，切開(kāi)頸部皮膚并進(jìn)行氣管插管等操作技術(shù)與前面所述相同。術(shù)者用左手拇、食指捏起頸部皮膚切口緣和部分頸前肌肉稍向外側(cè)牽拉，中指和無(wú)名指從外面將背側(cè)皮膚向腹側(cè)輕輕頂起，即可清晰顯露頸總動(dòng)脈；右手持玻璃分針順頸總動(dòng)脈走行方向輕輕劃開(kāi)其周?chē)慕Y(jié)締組織，游離頸總動(dòng)脈2～3cm，并在其下方穿兩根絲線備用。取直徑適宜的動(dòng)脈導(dǎo)管并將其連接三通管，檢查其插入端是否光滑，確定無(wú)尖無(wú)鉤，讓導(dǎo)管內(nèi)充滿1%肝素生理鹽水，并排盡導(dǎo)管內(nèi)氣泡。用一根絲線結(jié)扎游離頸總動(dòng)脈段遠(yuǎn)心端，用動(dòng)脈夾夾閉其近心端，另一絲線置于結(jié)扎部位與動(dòng)脈夾之間。術(shù)者左手拇、中指提起結(jié)扎線，食指自下方托起血管，右手持眼科剪在靠近結(jié)扎線處成45176。角剪開(kāi)頸總動(dòng)脈，剪口的大小約為頸總動(dòng)脈直徑的1/3～1/2，將動(dòng)脈導(dǎo)管向心臟端插入頸總動(dòng)脈1～，用絲線結(jié)扎動(dòng)脈與動(dòng)脈導(dǎo)管，并固定導(dǎo)管，以防導(dǎo)管滑脫（見(jiàn)圖62）。剪除多余絲線后，將導(dǎo)管連于傳感器，放開(kāi)動(dòng)脈夾，即可檢測(cè)動(dòng)脈血壓。注意：①頸總動(dòng)脈剪口不宜過(guò)大或過(guò)小，過(guò)小時(shí)導(dǎo)管不易插入，過(guò)大時(shí)易于使頸總動(dòng)脈插斷。如不小心將頸總動(dòng)脈插斷，可將剪口處結(jié)扎，再向心臟端分離一段頸總動(dòng)脈，重新剪口插管。②動(dòng)脈導(dǎo)管頂部要光滑，不能過(guò)尖，以防刺破動(dòng)脈壁，引起大出血。如刺破動(dòng)脈壁，應(yīng)立即用動(dòng)脈夾夾閉頸總動(dòng)脈心臟端，再向心臟端分離一段頸總動(dòng)脈，重新插管，必要時(shí)改插對(duì)側(cè)頸總動(dòng)脈。③導(dǎo)管內(nèi)肝素濃度不宜過(guò)低，以防導(dǎo)管內(nèi)凝血，堵塞導(dǎo)管。如已出現(xiàn)凝血，可通過(guò)三通管向頸總動(dòng)脈注入肝素生理鹽水，沖出血凝塊，必要時(shí)撥出導(dǎo)管，清除凝血塊，沖洗后重新插管。三、思考題根據(jù)實(shí)驗(yàn)錄像，簡(jiǎn)述家兔實(shí)驗(yàn)手術(shù)步驟及每步的主要操作過(guò)程。實(shí)驗(yàn)二：不同身體素質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)狀況、性別和年齡特征對(duì)人血細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白含量的影響和人ABO血型鑒定 [目的要求]1．掌握紅細(xì)胞、白血胞的人工計(jì)數(shù)方法2．學(xué)會(huì)測(cè)定血紅蛋白含量的基本方法3．掌握鑒別血型的基本方法，分析比較的某班級(jí)學(xué)生ABO血型與漢族人分部規(guī)律之間差異4．理解人血細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白含量因性別、年齡、外界環(huán)境變化、機(jī)體不同生理狀況（運(yùn)動(dòng)狀況、患病、營(yíng)養(yǎng)狀況等）而出現(xiàn)一定的差異。[基本原理]本實(shí)驗(yàn)采用稀釋法計(jì)數(shù)單位容積血液內(nèi)的紅細(xì)胞和白細(xì)胞數(shù)。由于血液中紅、白血細(xì)胞數(shù)很多無(wú)法直接計(jì)數(shù)，故需用適當(dāng)?shù)娜芤簩⒀合♂?。將一定量的血液?jīng)一定倍數(shù)的等滲鹽水稀釋后，置于血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室內(nèi)，計(jì)數(shù)一定容積溶液內(nèi)的血細(xì)胞、白細(xì)胞，然后推算出1mm3或1L血液內(nèi)的紅、白細(xì)胞數(shù)。血紅蛋白測(cè)定的方法有多種如改良沙利氏法（參見(jiàn)生理學(xué)實(shí)驗(yàn)）氰化高鐵血紅蛋白法。氰化高鐵血紅蛋白法 血紅蛋白被高鐵氰化鉀氧化為高鐵血紅蛋白（Hi），再與氰結(jié)合成穩(wěn)定的紅棕色氰化高鐵血紅蛋白（HiCN），在規(guī)定的波長(zhǎng)540nm和液層厚度的條件下，具有一定的吸光系數(shù)，根據(jù)其吸光度，即可求得血紅蛋白濃度。一般用標(biāo)準(zhǔn)液作對(duì)照校準(zhǔn)，用專(zhuān)用的血紅蛋白儀進(jìn)行測(cè)定。血型通常是指紅細(xì)胞的血型．是根據(jù)存在于紅細(xì)胞膜外表面的特異性抗原(鑲嵌于紅細(xì)胞膜上的特異性糖蛋白)來(lái)確定的，這種抗原或稱(chēng)凝集原是由遺傳基因決定的。血清中的抗體或稱(chēng)凝集素，可與紅細(xì)腦膜上不同的相應(yīng)抗原結(jié)合，產(chǎn)生凝集反應(yīng)，最后發(fā)生紅細(xì)胞溶解。由于這種現(xiàn)象，臨床上在輸血前必須進(jìn)行血型鑒定．以確保安全輸血；在血型系統(tǒng)中最重要的是ABO血型系統(tǒng)(只要ABO血型系統(tǒng)相合，％)，其次為Rh系統(tǒng)。[實(shí)驗(yàn)對(duì)象] 人[器材與試劑]顯微鏡、血紅蛋白儀、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、載玻片、消毒牙簽、一次性定量毛細(xì)取血管（20μl）、毛細(xì)取血管吸頭、移液管（1ml、2 ml 、5 ml）、滴管、小試管、一次性刺血針、消毒棉簽、玻璃棒、紅細(xì)胞稀釋液、白細(xì)胞稀釋液、75%酒精、無(wú)水乙醇、HiCN 液、“84”消毒液、ABO血型鑒定抗體，生理鹽水。[方法與步驟]一、紅、白血細(xì)胞計(jì)數(shù)，用l 。采用螺旋式消毒法，用蘸有75%酒精的棉簽消毒左手中指或無(wú)名指遠(yuǎn)節(jié)指腹，用刺血針刺破皮膚，讓血液自然流出，擦去第一滴血液，用一次性毛細(xì)取血管分別2次準(zhǔn)確吸取血液每次20μl，擦凈管外沾染之血，依次分別將滴管插入盛有上述稀釋液的試管底部，輕輕吹出血液，并用上清液清洗晰毛細(xì)吸血管2－3次，輕輕搖動(dòng)試管1－2min，使血液與稀釋液充分混勻。（1）熟悉血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的構(gòu)造：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板為一長(zhǎng)方形厚玻璃板。其中計(jì)數(shù)室方格大小的劃分，各種產(chǎn)品略有不同，但基本原理相同。其中央橫溝的兩邊各有一計(jì)數(shù)室，兩計(jì)數(shù)室的劃分完全相同（圖151）。在顯微鏡低倍下觀察，可見(jiàn)每個(gè)計(jì)數(shù)室用雙線劃分成9個(gè)大方格（圖152）。四角的大方格每個(gè)又分為16個(gè)中方格，這是用以計(jì)數(shù)白細(xì)胞的。中央的一個(gè)大方格用雙線分成25個(gè)中方格，每個(gè)中方格又等分成16個(gè)小方格（用單線），計(jì)數(shù)紅細(xì)胞時(shí)，數(shù)中央大方格的5個(gè)中方格（即四角和中央的中方格）內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)目（圖152）。，因此，放上蓋玻片后，此為計(jì)數(shù)室的高度。（2）充液：將蓋玻片先蓋在計(jì)數(shù)板上，用潔凈的吸血管吸取搖勻的稀釋血液，然后將吸管口輕輕斜置蓋玻片的邊緣，滴出少量稀釋血液，使溶液借毛細(xì)管現(xiàn)象而流入計(jì)數(shù)室內(nèi)。但必須注意，如滴入過(guò)多時(shí)，流出室外凹溝中，易造成蓋玻片浮起，體積不準(zhǔn)；過(guò)少時(shí)，經(jīng)多次充液，易造成氣泡，所以都應(yīng)洗去重新充液。（3）計(jì)數(shù)：稀釋血液滴入計(jì)數(shù)室后，須靜置2—3分鐘，然后低倍鏡下計(jì)數(shù)（顯微鏡焦距準(zhǔn)確，縮小光圈并降低聚光器。使視野較暗）。計(jì)數(shù)白細(xì)胞時(shí)，數(shù)四角四個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)。計(jì)數(shù)紅細(xì)胞時(shí)數(shù)中央大方格四角的四個(gè)中方格和中央的一個(gè)中方格（共5個(gè)中方格）內(nèi)的紅細(xì)胞總數(shù)，計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)循一定的路徑以免遺漏或重復(fù)。對(duì)于分布在劃線上的血細(xì)胞，依照“數(shù)上不數(shù)下， 數(shù)左不數(shù)右”的原則進(jìn)行計(jì)數(shù)（圖153）。計(jì)數(shù)室內(nèi)細(xì)胞分布要均勻。計(jì)數(shù)數(shù)紅細(xì)胞時(shí)．如果發(fā)現(xiàn)各中格的紅細(xì)胞數(shù)目相差20個(gè)以上；或計(jì)數(shù)白細(xì)胞時(shí)，如果各大格的白細(xì)胞數(shù)目相差8個(gè)以上，表示血細(xì)胞分布不均勻，必須把稀釋液搖勻后重新計(jì)數(shù)。圖153 血細(xì)胞計(jì)數(shù)方式（實(shí)心圈表示計(jì)數(shù)的紅細(xì)胞，空心圈表示不應(yīng)計(jì)數(shù)的紅細(xì)胞）紅細(xì)胞數(shù)目：將5個(gè)中方格內(nèi)數(shù)得的紅細(xì)胞總數(shù)乘以10，000．即得每立方mm血液中紅細(xì)胞總數(shù)。計(jì)算公式為：紅細(xì)胞數(shù)/mm3 = 5個(gè)中格紅細(xì)胞數(shù)稀釋倍數(shù)/計(jì)數(shù)的5個(gè)中格容積（1）稀釋倍數(shù)等于稀釋液2ml除以加入血10μL（），為200倍。（2）計(jì)數(shù)室5 5 = mm3。白細(xì)胞數(shù)目：將4個(gè)大方格內(nèi)數(shù)得白細(xì)胞總數(shù)乘以50，即每立方mm血液的白細(xì)胞總數(shù)。計(jì)算公式為：白細(xì)胞數(shù)/ mm3 = 4個(gè)大方格白細(xì)胞數(shù)稀釋倍數(shù)/ 計(jì)數(shù)的4 個(gè)大格容積（3）+血20μL（）/，為20倍。（4）計(jì)數(shù)室4個(gè)大方格容積為114= mm3。二、血紅蛋白含量的測(cè)定（血紅蛋白儀測(cè)量）1．取全血20μl，加到5ml的HiCN試劑中，充分混合，靜置5min。2．以HiCN試劑調(diào)零。3．以標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照，調(diào)節(jié)斜率使數(shù)顯顯示出標(biāo)準(zhǔn)品的含量。4．將稀釋血液放在儀器的吸管下，壓下進(jìn)樣鍵，然后數(shù)顯出所測(cè)樣品的Hb含量。三、血紅蛋白含量的測(cè)定（分光光度計(jì)測(cè)量）1．，作為測(cè)定管。2．用血紅蛋白吸管準(zhǔn)確吸取全血20u1，擦去管端血跡，置于試劑中，沖洗3次，混和。3．將混合液放置3分鐘以后，倒入光徑1cm比色皿，用分光光度計(jì)在540nm進(jìn)行比色。以蒸餾水或HiCN稀釋試劑作空白管，校正光密度到0點(diǎn)，讀取測(cè)定管光密度讀數(shù)。4．計(jì)算： 血紅蛋白（g/L）= 測(cè)定管光密度（64458/44000）251 = 測(cè)定管光密度 式中：（1）64458 是目前國(guó)際公認(rèn)的血紅蛋白分子量。（2）44000 是國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)公布的血紅蛋白摩爾吸光度。（3）251是稀釋倍數(shù)。四、ABO血型鑒定－玻片法1．取一塊潔凈的雙凹載玻片，用蠟筆在其兩端分別標(biāo)上抗A、抗B的字。2．在兩端的凹陷內(nèi)分別加一滴生理鹽水。3．在抗A端凹陷內(nèi)加一滴抗A試劑，在抗B端凹陷內(nèi)加一滴抗B試劑。4．用消毒過(guò)的牙簽一端蘸取少許的血液迅速與雙凹片的抗A或抗B試劑混勻，然后用牙簽的另一端蘸取少許的血液迅速與雙凹片另一端的試劑混勻。5．室溫下靜置5min左右，肉眼或顯微鏡下觀察結(jié)果。[方法評(píng)估]采用顯微鏡目視計(jì)數(shù)法為血液紅、白細(xì)胞數(shù)量測(cè)定的最常用的基本方法，目前雖有各種自動(dòng)化分析方法，但該方法由于經(jīng)典、方便、實(shí)用，仍較廣泛用于血液檢驗(yàn)和科研實(shí)踐中。采用目視比色法測(cè)定血紅蛋白含量是比較常用及簡(jiǎn)便的方法，但此法誤差較大，而且同儀器的準(zhǔn)確度有關(guān)。HiCN法操作簡(jiǎn)便，試劑單一，除SHb外所有血紅蛋白均可迅速轉(zhuǎn)化為HiCN，顯色快且穩(wěn)定，可以根據(jù)吸光度直接計(jì)算結(jié)果，因此被列為國(guó)際血紅蛋白測(cè)定的參考方法，也是我國(guó)推薦的首選方法，但其試劑中氰化鉀為劇毒藥品，須妥善保存、處理。無(wú)論采用何種方法測(cè)量血紅蛋白含量，都必須以HiCN法為標(biāo)準(zhǔn)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。另外，高球蛋白血癥和白細(xì)胞明顯增高的標(biāo)本可導(dǎo)致反應(yīng)液渾濁而影響結(jié)果。[應(yīng)用意義]紅細(xì)胞是血液中數(shù)量最多的有形成分，在正常情況下幾乎占血容量的1／2，故使血液呈紅色粘稠混懸液。紅細(xì)胞數(shù)量正常情況下保持相對(duì)穩(wěn)定的。多數(shù)魚(yú)100—300萬(wàn)個(gè)/mm ，高者可達(dá)400萬(wàn)個(gè)/mm3 低者數(shù)十萬(wàn)/ mm3。血細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白含量與年令、性別、性周期、營(yíng)養(yǎng)狀況、活動(dòng)情況、季節(jié)變化等有關(guān)，營(yíng)養(yǎng)不良或長(zhǎng)期饑餓可引起血細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白量顯著降低。[注意事項(xiàng)]1．血液加入試管后、須充分搖勻，但動(dòng)作要輕，避免出氣泡和防止血細(xì)胞被破壞。2．所用吸管、試管、計(jì)數(shù)板等必須十分干凈，清洗吸管時(shí)按照蒸餾水（兩次）→ 95%酒精（兩次）→ 乙醚（兩次）的方法清洗。計(jì)數(shù)室用蒸餾水洗后，再用軟紗布或擦鏡紙吸干。各種稀釋液嚴(yán)防混入雜質(zhì)或有細(xì)菌生長(zhǎng)。3．應(yīng)待血細(xì)胞完全下沉后計(jì)數(shù)。4．如果遇冷凝集現(xiàn)象，可把標(biāo)本置37℃溫箱中溫育幾分鐘，搖勻后計(jì)數(shù)。5．過(guò)去在采血時(shí)曾普遍應(yīng)用紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)專(zhuān)用吸管．現(xiàn)在多已不用，而代之以一次性毛細(xì)取血管，該管上面有標(biāo)記，可—次性取血10μl或20μl。6．血紅蛋白試劑中，氰化鉀為劇毒藥品，雖然濃度較低，但配制和保存過(guò)程中必須提高警惕，防止污染。7．血紅蛋白試劑不能貯存在塑料瓶中，否則CN下降，使結(jié)果偏低。應(yīng)該貯存在棕色的試劑瓶中， 4℃冰箱保存一般可用數(shù)月，但不能在0℃以下保存，因?yàn)榻Y(jié)冰可引起高鐵氰化鉀還原，使溶液褪色失效。8．每測(cè)一號(hào)樣品后應(yīng)用蒸餾水清洗一次，用下一號(hào)樣品清洗兩次，然后測(cè)定下一號(hào)樣品。9．廢液的處理：氰化鉀是劇毒品，配制稀釋液時(shí)要按劇毒品管理程序操作。配制好的HiCN稀釋液中因氰化鉀含量低，又有高鐵氰化鉀存在，毒性不是很大。若進(jìn)入體內(nèi)，高鐵氰化鉀氧化血紅蛋白，生成高鐵血紅蛋白。后者結(jié)合CNˉ，起到一定的解毒作用，但仍應(yīng)妥善保管。測(cè)定后的廢液不能與酸性溶液混合，因?yàn)榍杌浻鏊峥僧a(chǎn)生劇毒的氰氫酸氣體。為防止氰化鉀污染環(huán)境，比色測(cè)定后的廢液集中于廣口瓶中。應(yīng)注意廢液處理，可用除毒液除毒。廢液按每升HiCN廢液加次氯酸鈉溶液（安替福民）40ml或“84”消毒液40ml，充分振搖混勻，敞開(kāi)容器，置室溫3h后派入下水道。HiCN廢液遇酸則產(chǎn)生氰化鉀?；蛉×蛩醽嗚F（FeSO47H2O）二份加NaOH一份，在研缽中研細(xì)，配成100g／L的懸液。每1000ml廢液加上述除毒液5ml，放置3小時(shí)，不時(shí)攪拌，使劇毒的氰化鉀成為無(wú)毒的亞鐵氰化鉀。10．ABO血型鑒定時(shí)，注意是否有溶血，切不可將溶血當(dāng)作凝集。在操作中，應(yīng)嚴(yán)格分離各種檢驗(yàn)用品，防止污染。[建議實(shí)驗(yàn)課題方向][參考文獻(xiàn)]，（第二版）. 高等教育出版社.，嚴(yán)定友，. 科學(xué)出版社. .. 衛(wèi)生檢驗(yàn)員. 人民衛(wèi)生出版社：1998年. 全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第二版）.東南大學(xué)出版社：1997年。 泰主編. 生理學(xué)（第五版），人民衛(wèi)生出版社.. 動(dòng)物生理學(xué)（第二版），高教出版社.（第四版）.人民衛(wèi)生出版社.，（第二版）.高等教育出版社。，張志雄，1995，8（2）：185～186.，何俊，鄭善曲. 重慶地區(qū)2005例健康人靜脈血血細(xì)胞各參數(shù)參考值調(diào)查分析. 廠礦醫(yī)藥衛(wèi)生，2000， 16（3）：219～220.[思考題]1．綜合實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果，與紅、白細(xì)胞的正常值相對(duì)照，有何變異？為什么？2．為什么機(jī)體正常血細(xì)胞數(shù)可維持在相對(duì)穩(wěn)定的數(shù)量水平？3．試討論紅細(xì)胞的正常值及其應(yīng)用意義？白細(xì)胞數(shù)量的變化有何生理意義？4．實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果，與血紅蛋白正常值相對(duì)照，有何變異？為什么？血紅蛋白含量相對(duì)穩(wěn)定有何生理意義？試討論血紅蛋白含量與生理機(jī)能的關(guān)系。附：試劑的配制1．白細(xì)胞稀釋液冰醋酸（破壞紅細(xì)胞） 1%龍膽紫（染白細(xì)胞核便于計(jì)數(shù)） 1毫升蒸餾水 加至100毫升2．紅細(xì)胞稀釋液NaCl (維持滲透壓) Na2SO4 (使溶液比重增加，紅細(xì)胞分布不易下沉) HgCl （固定紅細(xì)胞形狀）