世界上最完善最詳細的神經(jīng)元原代培養(yǎng)完全黃金版-資料下載頁
2025-06-27 07:18本頁面
【正文】 原因是：超過12小時，混在細胞懸液中的大量細胞碎片也會牢牢貼壁，而細胞碎片直接影響神經(jīng)元存活和正常代謝；另外12小時后，膠質(zhì)細胞會開始分裂，這時候就很難抑制了。筆者推薦是4小時，但是別超過8小時。注意事項四：4小時后換液時，請輕輕搖晃板幾下再換。原因：細胞碎片貼壁很慢而且不牢固，這時候的搖晃可以最大程度去掉細胞碎片。然后，注意：細胞請再用沒有加血清的，種板時候用的培養(yǎng)液清洗一次，也是要輕微搖晃，來進一步去除細胞碎片，從而得到良好的細胞生長環(huán)境。有條件也可以洗兩次，但是筆者覺得一次足夠。洗了之后吸干液體，換成neurbasal+B27+谷氨酰胺的神經(jīng)元專用無血清培養(yǎng)基。對于原代培養(yǎng)，是細節(jié)決定成敗，一個地方不夠好會滿盤皆輸，所以請嚴肅對待。（德國隊的fans于凌晨）ugly分界線下面是對版面一些犯錯誤的研究方法中最嚴重的錯誤之一的提醒，請大家注意，我把回帖編輯到這里了。enjoy.剛回答了一系列形形色色的問題，我把這個問題挑明了說。如果您不相信 neurobasal最好的而還是堅持用DMEM之類的培養(yǎng)液，麻煩檢查一下你們的DMEM或者MEM或者DMEMF12的invitrogen產(chǎn)品序列號，到網(wǎng)站上檢查下相應(yīng)的組成公式。很多這種培養(yǎng)液都是含有谷氨酸，而且是mmol級的。成熟的神經(jīng)元10um的谷氨酸即可照成細胞凋亡，而谷氨酸受體46天就開始表達，如果胎鼠神經(jīng)元經(jīng)歷了mmol濃度的培養(yǎng)液中的谷氨酸還不被毒死，那就是怪事了。新生鼠不受這個限制，新生鼠原代培養(yǎng)沒有有功能的 NMDA受體，ugly 分界線最雷到我的，是板上有人用材料非常混亂，一會用胎鼠，一會用新生鼠，一會成年鼠的你們這叫對自己不負責(zé)任！ we do all cases seriously！ 而不是憑借肉眼觀察和猜測。做原代培養(yǎng)的，首先就是收集大量背景文獻，看看你的相關(guān)要求的國際公認的做法是用哪種。胎鼠和新生鼠雖然形狀一樣，但是神經(jīng)元的功能一點都不一樣，表達受體都不一樣。 大部分實驗都是用胎鼠，而新生鼠往往用來培養(yǎng)測一些LTD之類的（not quite sure,文獻太少），所以有人問我新生鼠的問題，我都是說你先看下背景文獻是不是你搞錯了。而成年鼠是另外的培養(yǎng)方法，要求更小心仔細和特別的處理。硬套胎鼠的原代培養(yǎng)必然導(dǎo)致失敗。另外，在一些藥物保護實驗中，不要以為NGF就一定對神經(jīng)有很大作用，筆者的經(jīng)驗是，想要細胞存活，F(xiàn)GF2是最佳選擇但是，F(xiàn)GF2會導(dǎo)致細胞變化很大，所以還是別用在原代培養(yǎng)中，不過成年鼠培養(yǎng)一定要用FGF2。對于一些雷到我的，我只能再次說，請收集足夠的背景文章在去選擇合適材料，please do it carefully and seriously!祝大家都能培養(yǎng)出健康漂亮的神經(jīng)元，歡迎大家來問問題（如果是美女的話，給個電話我會很開心）聲明，除了最后一幅圖是來自別的文獻，前面所有的經(jīng)驗都是我的原創(chuàng)，從無數(shù)失敗總結(jié)出的我認為最完美的神經(jīng)原代培養(yǎng)。最后提醒大家注意：nycoprep(optiprep)可能有很多濃度，但是NycoPrep? 以前是最常用的，筆者默認的就是用這個溶液配置的密度梯度。如果您買到的不是這個密度，請換算一下。筆者當時只有NycoPrep? ，現(xiàn)在可能會有更多濃度供選擇，請大家注意換算。
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