世界上最完善最詳細(xì)的神經(jīng)元原代培養(yǎng)完全黃金版-資料下載頁
2025-06-27 07:18本頁面
【正文】 原因是：超過12小時(shí)，混在細(xì)胞懸液中的大量細(xì)胞碎片也會牢牢貼壁，而細(xì)胞碎片直接影響神經(jīng)元存活和正常代謝；另外12小時(shí)后，膠質(zhì)細(xì)胞會開始分裂，這時(shí)候就很難抑制了。筆者推薦是4小時(shí)，但是別超過8小時(shí)。注意事項(xiàng)四：4小時(shí)后換液時(shí)，請輕輕搖晃板幾下再換。原因：細(xì)胞碎片貼壁很慢而且不牢固，這時(shí)候的搖晃可以最大程度去掉細(xì)胞碎片。然后，注意：細(xì)胞請?jiān)儆脹]有加血清的，種板時(shí)候用的培養(yǎng)液清洗一次，也是要輕微搖晃，來進(jìn)一步去除細(xì)胞碎片，從而得到良好的細(xì)胞生長環(huán)境。有條件也可以洗兩次，但是筆者覺得一次足夠。洗了之后吸干液體，換成neurbasal+B27+谷氨酰胺的神經(jīng)元專用無血清培養(yǎng)基。對于原代培養(yǎng)，是細(xì)節(jié)決定成敗，一個(gè)地方不夠好會滿盤皆輸，所以請嚴(yán)肅對待。（德國隊(duì)的fans于凌晨）ugly分界線下面是對版面一些犯錯(cuò)誤的研究方法中最嚴(yán)重的錯(cuò)誤之一的提醒，請大家注意，我把回帖編輯到這里了。enjoy.剛回答了一系列形形色色的問題，我把這個(gè)問題挑明了說。如果您不相信 neurobasal最好的而還是堅(jiān)持用DMEM之類的培養(yǎng)液，麻煩檢查一下你們的DMEM或者M(jìn)EM或者DMEMF12的invitrogen產(chǎn)品序列號，到網(wǎng)站上檢查下相應(yīng)的組成公式。很多這種培養(yǎng)液都是含有谷氨酸，而且是mmol級的。成熟的神經(jīng)元10um的谷氨酸即可照成細(xì)胞凋亡，而谷氨酸受體46天就開始表達(dá)，如果胎鼠神經(jīng)元經(jīng)歷了mmol濃度的培養(yǎng)液中的谷氨酸還不被毒死，那就是怪事了。新生鼠不受這個(gè)限制，新生鼠原代培養(yǎng)沒有有功能的 NMDA受體，ugly 分界線最雷到我的，是板上有人用材料非?；靵y，一會用胎鼠，一會用新生鼠，一會成年鼠的你們這叫對自己不負(fù)責(zé)任！ we do all cases seriously！ 而不是憑借肉眼觀察和猜測。做原代培養(yǎng)的，首先就是收集大量背景文獻(xiàn)，看看你的相關(guān)要求的國際公認(rèn)的做法是用哪種。胎鼠和新生鼠雖然形狀一樣，但是神經(jīng)元的功能一點(diǎn)都不一樣，表達(dá)受體都不一樣。 大部分實(shí)驗(yàn)都是用胎鼠，而新生鼠往往用來培養(yǎng)測一些LTD之類的（not quite sure,文獻(xiàn)太少），所以有人問我新生鼠的問題，我都是說你先看下背景文獻(xiàn)是不是你搞錯(cuò)了。而成年鼠是另外的培養(yǎng)方法，要求更小心仔細(xì)和特別的處理。硬套胎鼠的原代培養(yǎng)必然導(dǎo)致失敗。另外，在一些藥物保護(hù)實(shí)驗(yàn)中，不要以為NGF就一定對神經(jīng)有很大作用，筆者的經(jīng)驗(yàn)是，想要細(xì)胞存活，F(xiàn)GF2是最佳選擇但是，F(xiàn)GF2會導(dǎo)致細(xì)胞變化很大，所以還是別用在原代培養(yǎng)中，不過成年鼠培養(yǎng)一定要用FGF2。對于一些雷到我的，我只能再次說，請收集足夠的背景文章在去選擇合適材料，please do it carefully and seriously!祝大家都能培養(yǎng)出健康漂亮的神經(jīng)元，歡迎大家來問問題（如果是美女的話，給個(gè)電話我會很開心）聲明，除了最后一幅圖是來自別的文獻(xiàn)，前面所有的經(jīng)驗(yàn)都是我的原創(chuàng)，從無數(shù)失敗總結(jié)出的我認(rèn)為最完美的神經(jīng)原代培養(yǎng)。最后提醒大家注意：nycoprep(optiprep)可能有很多濃度，但是NycoPrep? 以前是最常用的，筆者默認(rèn)的就是用這個(gè)溶液配置的密度梯度。如果您買到的不是這個(gè)密度，請換算一下。筆者當(dāng)時(shí)只有NycoPrep? ，現(xiàn)在可能會有更多濃度供選擇，請大家注意換算。
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