樣本采集與處理-資料下載頁
2025-06-26 16:53本頁面
【正文】 酸。臨床體液標(biāo)本長期（超過2周）保存應(yīng)在70℃下。按常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法提取腫瘤組織和癌旁、正常組織的基因組DNA、總RNA。定量后分裝提取的核酸，保證每份標(biāo)本可供五個(gè)研究者使用，具備50100次核酸研究用量，并保存使用記錄。由于靶核酸（尤其是RNA）易受核酸酶的作用而迅速降解，因此標(biāo)本的保存對于核酸擴(kuò)增測定的有效性極為重要。檢測靶核酸為DNA的標(biāo)本，可在28℃下保存3d，也可于10mmol/L Tris，1mmol/L EDTA（）緩沖液中4℃下保存。而檢測靶核酸為RNA的標(biāo)本，一旦采集送到實(shí)驗(yàn)室后，則應(yīng)在20℃以下凍存。為使臨床標(biāo)本中可能存在的核酸酶失活，可加入chaotropic物質(zhì)，最常用的是4mol/L異硫氰酸胍鹽（Guanidinium isothiocyanate，GITC），并同時(shí)與還原劑如β巰基乙醇或二巰基乙醇一起使用。使用終濃度為5mol/L的GITC，可使RNase不可逆的失活，如濃度4mol/L則失去對RNase的抑制作用，而使RNA迅速降解。使用GITC作為穩(wěn)定劑保存靶核酸為RNA的標(biāo)本，標(biāo)本可在室溫下穩(wěn)定約7d。此外，如測定的靶核酸為血循環(huán)中的RNA，為避免室溫放置過久而致RNA的降解，最好不要使用血清標(biāo)本，而應(yīng)使用EDTA抗凝后盡快分離后的血漿標(biāo)本。臨床標(biāo)本置于經(jīng)過處理的濾紙片上，如靶核酸為DNA，可室溫保存數(shù)月至數(shù)年，如靶核酸為RNA，則可穩(wěn)定數(shù)周。研究表明，保存在濾紙上的標(biāo)本，保存時(shí)間長，還可因?yàn)闃?biāo)本中的PCR抑制物如血紅蛋白、酶、免疫球蛋白等吸附于濾紙上，而不對后面的擴(kuò)增檢測造成影響。標(biāo)本加于濾紙片上，對于標(biāo)本的室溫運(yùn)送非常方便，適用于特定病原體的分子流行病學(xué)研究，并且不管是全血、血清（漿），還是尿液、分辨、分泌物等均可用此種方法。樣本運(yùn)輸標(biāo)本一經(jīng)采集，則應(yīng)盡可能快的送至檢測實(shí)驗(yàn)室。對于靶核酸為DNA的標(biāo)本，如是在無菌條件下采集，則可以在室溫下運(yùn)送，建議采集后，在8h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室。靶核酸為RNA的標(biāo)本，采集后建議在4h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室，短時(shí)間內(nèi)的運(yùn)送如10min左右，則可室溫下運(yùn)送，如為較長時(shí)間，則應(yīng)在加冰條件下運(yùn)送。如標(biāo)本中加入了適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑如GITC的血清（漿）標(biāo)本，則可在室溫下運(yùn)送或郵寄。所有臨床標(biāo)本在采集后送至實(shí)驗(yàn)室之前，均應(yīng)暫放在28℃臨時(shí)保存。運(yùn)輸容器應(yīng)為密閉的一次性無菌裝置標(biāo)本的收集、標(biāo)記、運(yùn)輸和發(fā)放（1）標(biāo)本在設(shè)施內(nèi)的傳遞 為了避免意外泄露或溢出，應(yīng)當(dāng)使用盒子等二級容器，并將其固定在架子上使裝有標(biāo)本的容器保持直立。二級容器可以是金屬或塑料制品，應(yīng)該可以耐高壓蒸汽滅菌或耐受化學(xué)消毒劑的作用。（2）標(biāo)本的接收與發(fā)放 標(biāo)本接收與發(fā)放形式有如下三種：1）新鮮組織標(biāo)本：組織標(biāo)本可在切割后用細(xì)胞培養(yǎng)液及磷酸鹽緩沖液（PBS）和生理鹽水保存。在運(yùn)送過程中，新鮮組織的組織標(biāo)本和血清標(biāo)本置于冰浴中。同時(shí)可根據(jù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)要求，利用RNA保護(hù)劑防止RNA降解。2）冷凍組織和血清標(biāo)本：冷凍標(biāo)本從70℃冰箱中取出后，立即置于液氮或干冰中，避免組織和血清標(biāo)本運(yùn)輸過程中融化。異地發(fā)放最好采用航空方式。3）石蠟包埋的組織標(biāo)本：核對編號后，觀察蠟塊是否有變形、擠壓、損壞，檢查證明完好后放入保存盒中。具體的臨床PCR實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)根據(jù)待測靶核酸的特性，對各種臨床標(biāo)本的運(yùn)送條件作出相應(yīng)的規(guī)定。此外，標(biāo)本的運(yùn)送還應(yīng)充分考慮生物安全問題，應(yīng)符合相應(yīng)的生物安全要求
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