【正文】
件與表達(dá)Cas9的元件連接,得到可以同時(shí)表達(dá)兩者的質(zhì)粒,將其轉(zhuǎn)染細(xì)胞,便能對(duì)目的基因進(jìn)行操作。構(gòu)建高活性的sgRNA也是進(jìn)行Cas8克隆的關(guān)鍵步驟之一。多個(gè)sgRNA克隆與一個(gè)Cas9克隆共轉(zhuǎn)染可同時(shí)在基因組中編輯多個(gè)位點(diǎn)。crRNA與tracrRNA融合后如下圖:以上內(nèi)容整合了各網(wǎng)站介紹內(nèi)容以及個(gè)人理解。參考文獻(xiàn):1. F Ann Ran, Feng Zhang et al. Genome engineering using the CRISPRCas9 system. nature protocols | |2013 | 2. Mali, P., L. Yang, et al. (2013). RNAguided human genome engineering via Cas9. Science 339(6121): 823826.3. Cong, L., F. A. Ran, et al. (2013). Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems. Science 339(6121): 819823