【正文】 心穿過(guò)，使紙芯與圓形濾紙垂直。在培養(yǎng)皿內(nèi)放一小鋁盒，平放在培養(yǎng)皿上，盒內(nèi)加適量汽油并加入12滴苯，把已處理好的濾紙芯下端浸入汽油中，迅速蓋好培養(yǎng)皿蓋，此時(shí)汽油借毛細(xì)管引力順紙條擴(kuò)散到圓形濾紙上，并把葉綠素沿著濾紙向四周推動(dòng)，不久即可看到被分離的各種色素的同心圓環(huán)。五、結(jié)果計(jì)算 ? Ca(mg/L)= OD645 ? Cb (mg/L) = OD663 ? 葉綠素含量(mg/)= 實(shí)驗(yàn)六 光合強(qiáng)度的測(cè)定（改良半葉法）一、原理改良半葉法是將植物對(duì)稱葉片的一部分遮光或取下置于暗處，另一部分則留在光下進(jìn)行光合作用，過(guò)一定時(shí)間后，在這兩部分葉片的對(duì)應(yīng)部位取同等面積，分別烘干稱重，因?yàn)閷?duì)稱葉片的兩對(duì)應(yīng)部位的等面積的干重原來(lái)相等，光照后葉片重量超過(guò)暗中的葉重、超過(guò)部分即為光合作用產(chǎn)物的重量，并通過(guò)一定的計(jì)算可得到光合作用強(qiáng)度。二、儀器藥品 剪刀 分析天平 稱量皿 烘箱 刀片 金屬模板 紗布 錫紙 三氯乙酸 三、實(shí)驗(yàn)步驟 1． 選擇測(cè)定樣品在田間選擇有代表性的植株葉片（如葉片在植株上的部位、葉齡、受光條件等）20片，用小紙牌編號(hào)。2． 葉子基部處理為了不使選定葉片中光合作用產(chǎn)物往外運(yùn)而影響測(cè)定效果的準(zhǔn)確性可采用下列方法進(jìn)行處理。（1）可將葉片輸導(dǎo)系統(tǒng)的韌皮部破壞。（2）如小麥、水稻等單子葉植物，由于韌皮部和木質(zhì)部難以分開(kāi)處理，可用剛在開(kāi)水中浸過(guò)的紗布或棉花做成夾子在葉子基部燙傷一小段即可（一般90℃以上的開(kāi)水燙20秒）。（3）由于棉花葉柄木質(zhì)化程度低，葉柄易受折斷。用開(kāi)水燙又難以掌握燙傷的程度，往往不是燙得不夠便是燙得過(guò)重使葉片下垂、改變了葉片的角度。因此可改用化學(xué)方法來(lái)處理，選用適量濃度的三氯乙酸點(diǎn)涂葉柄以阻止光合產(chǎn)物的輸出。三氯乙酸是一種強(qiáng)烈的蛋白質(zhì)沉淀劑，滲入葉柄后可將篩管生活細(xì)胞殺死而起到阻止有機(jī)物質(zhì)運(yùn)輸?shù)淖饔?。三氯乙酸的濃度視葉柄幼嫩的程度而異，以能顯著灼傷葉柄而又不影響水分供應(yīng)，不改變?nèi)~片角度為宜。一般使用5%的三氯乙酸。為了使?fàn)C后或環(huán)割等處理后的葉片不致下垂影響葉片的自然生長(zhǎng)角度可用錫紙或塑料管包圍之，使葉片保持原來(lái)生長(zhǎng)角度。3．剪取樣品 葉基部處理完畢后，即可剪取樣品，記錄時(shí)間，開(kāi)始進(jìn)行光合作用測(cè)定。一般按編號(hào)次序分別剪下對(duì)稱葉片的一半（主脈不剪下），按編號(hào)順序夾于濕潤(rùn)的紗布中，貯于暗處。過(guò)四、五小時(shí)后，再依次剪下另外半葉，同樣按編號(hào)夾于濕潤(rùn)紗布中，兩次剪葉的速度應(yīng)盡量保持一致，使各葉片經(jīng)歷相等的光照時(shí)間。 4．稱重比較 將各同號(hào)葉片兩半按對(duì)應(yīng)部位迭在一起，在無(wú)粗葉脈處用已知面積的打孔器取小圓葉片數(shù)個(gè)分別置于光照及暗中的兩個(gè)稱量皿中，在8090℃下烘至恒重（約5小時(shí)），在分析天平上稱重比較。 5．計(jì)算結(jié)果 葉片干重差之總和（以mg表示）除以葉片面積（換成dm2，1dm2=100cm2）及光照時(shí)數(shù)，即得光合作用強(qiáng)度，以干物質(zhì)mg/dm2h表示之。計(jì)算公式如下： 光合強(qiáng)度= 由于葉片內(nèi)貯存的光合產(chǎn)物一般為蔗糖和淀粉等，得二氧化碳同化量，單位為CO2mg/dm2h。實(shí)驗(yàn)七 呼吸強(qiáng)度的測(cè)定（小籃子法廣口瓶法）一、目的呼吸強(qiáng)度是植物生命活動(dòng)最重要的指標(biāo)之一，在植物生理研究及生產(chǎn)實(shí)踐等方面都有測(cè)定的必要。本實(shí)驗(yàn)練習(xí)用廣口瓶法（小籃子法）測(cè)定呼吸強(qiáng)度的技術(shù)，并了解不同條件對(duì)呼吸強(qiáng)度的影響。二、原理植物進(jìn)行呼吸放出CO2，計(jì)算一定的植物材料在單位時(shí)間內(nèi)放出CO2的數(shù)量，即能測(cè)知該植物材料的呼吸強(qiáng)度。呼吸放出的CO2可用氫氧化鋇溶液吸收，再用滴定法測(cè)得之。如比較不同條件下的呼吸強(qiáng)度，則可得知不同條件對(duì)呼吸強(qiáng)度的影響。三、材料與設(shè)備植物材料：（1）干小麥種子；（2）發(fā)芽的小麥種子；（3）浸濕但未發(fā)芽的小麥種子。儀器與用具：（1）廣口瓶測(cè)呼吸裝置一套，（2）托盤(pán)天平1架；（3）酸滴定管及堿滴定管各1支；（4）滴管架1套；（5）恒溫水浴鍋1具。試劑：（1）1N的草酸溶液（每ml 1N草酸相當(dāng)于1mgCO2）；（2）；（3）酚酞指示劑。四、方法呼吸強(qiáng)度的測(cè)定：（1）取500ml廣口瓶一個(gè)，加一個(gè)一孔橡皮塞?？字睆郊s1厘米，供滴定用之，平時(shí)用一個(gè)小橡皮塞塞緊，瓶塞下面掛一鐵絲小籃，以便裝植物材料。整個(gè)裝置可稱“廣口瓶測(cè)呼吸裝置”。（2），立即塞緊橡皮塞（不帶小籃）。充分搖動(dòng)廣口瓶幾分鐘，待瓶?jī)?nèi)全部CO2被吸收后，拔出小橡皮塞加入酚酞試劑3滴，把滴定管插入孔中，1/22N草酸溶液進(jìn)行空白滴定，直至紅色剛剛消失為止。（3）倒出廢液，用無(wú)CO2的蒸餾水（煮沸過(guò)的）洗凈后，重加同一氫氧化鋇溶液20ml，同時(shí)稱取植物材料（發(fā)芽的小麥種子）5克，裝入小鐵絲筐中，掛于橡皮塞下，把塞子蓋在瓶上，開(kāi)始記錄時(shí)間，經(jīng)20—30分鐘，其間輕輕搖動(dòng)數(shù)次，使溶液表面的碳酸鋇薄膜被破壞而利于CO2的充分吸收。到預(yù)定時(shí)間后，輕輕開(kāi)塞，把裝有植物材料的小籃子迅速取下立即重新塞緊，充分搖動(dòng)2分鐘，使瓶中CO2完全被吸收，然后拔出小橡皮塞，加入酚酞3滴，用草酸滴定如前。注意防止口中呼出氣體侵入瓶?jī)?nèi)。（4）計(jì)算呼吸強(qiáng)度（每克組織每小時(shí)放出CO2毫克數(shù)）：呼吸強(qiáng)度（毫克CO2/克組織小時(shí)）=不同條件對(duì)呼吸強(qiáng)度的影響：（1）用前面描述過(guò)的大小一致的呼吸瓶四個(gè)（可四個(gè)實(shí)驗(yàn)小組聯(lián)合作），進(jìn)行如上處理： ① 加干種子100粒（小麥或其它種子，以下相同）在30℃恒溫水浴鍋上：② 加入浸濕種子100粒，在30℃恒溫水浴鍋上；③ 加催芽種子100粒，在30℃恒溫水浴鍋上；④ 加催芽種子100粒，在10℃左右室溫下。 （2）30分鐘后，輕輕從呼吸瓶中取出種子，然后用草酸滴定如前，并用下式計(jì)算各瓶呼吸強(qiáng)度（100粒種子1小時(shí)內(nèi)放出CO2毫克數(shù)）：呼吸強(qiáng)度（小時(shí)）=（3）把不同處理的測(cè)定結(jié)果記于下表，并加以解釋。呼吸強(qiáng)度測(cè)定記錄表處理號(hào)處理方式材料量（粒）測(cè)定時(shí)間（分鐘）空白滴定值（ml）正式滴定值（ml）呼吸強(qiáng)度1干種子30℃1002濕種子30℃1003催芽種子30℃1004催芽種子10℃100實(shí)驗(yàn)八 植物抗逆性的鑒定（電導(dǎo)儀法）一、目的植物抗逆性的研究，在科研上有一定重要性，與生產(chǎn)關(guān)系也很密切，因此抗逆性的大小常有測(cè)定的必要。本實(shí)驗(yàn)練習(xí)根據(jù)電導(dǎo)度變化來(lái)測(cè)定細(xì)胞透性變化（透性變化能反應(yīng)抗逆性大?。┑募夹g(shù)，并觀察干旱、高溫等因子對(duì)細(xì)胞透性的影響，為深入開(kāi)展抗逆性的研究提供條件。二、原理當(dāng)植物組織受干旱或其它不良條件如高溫、低溫等影響時(shí)，常能傷害原生質(zhì)體的結(jié)構(gòu)而引起透性增大，結(jié)果細(xì)胞內(nèi)含物將有不同程度的外滲，使外滲液的電導(dǎo)度增大，用電導(dǎo)儀即可明顯地測(cè)定出來(lái)，透性變化愈大，表示受傷愈重、抗性愈弱。三、材料與設(shè)備 植物材料：小麥、玉米或其它作物葉片。 儀器與用具：（1）電導(dǎo)儀（DDS11型或DDS11A型）1臺(tái)；（2）分析天平（感量萬(wàn)分之一）1臺(tái)；（3）溫箱1個(gè)；（4）真空泵1臺(tái)；（5）真空干燥器1個(gè)；（6）恒溫水浴鍋1個(gè)；（7）燒杯、50毫升10只；（8）量瓶：100毫升6個(gè)，1000毫升1個(gè)；（9）玻璃蒸餾器或離子交換純水器1套；（10）玻棒10根；（11）濾紙若干；（12）洗瓶1個(gè)；（13）解剖剪1把。試劑： （1）重蒸餾水或無(wú)離子水； （2）100ppm氯化鈉標(biāo)準(zhǔn)液：取分析純氯化鈉100毫克，先溶于少量無(wú)離子水或重蒸餾水中，用1000毫升量瓶定容并搖勻； （3）硫酸重鉻酸鉀洗滌液適量。四、操作步驟1. 清洗用具，由于電導(dǎo)變化極為靈敏，稍有雜質(zhì)即產(chǎn)生很大誤差，故清洗為重要步驟，所以玻璃用具均需先用肥皂洗，再用新配洗滌液洗，然后用自來(lái)水、無(wú)離子水（或重蒸餾水）各洗四五遍（最后容器向下用水沖），然后倒置于洗凈而墊有潔凈濾紙的盤(pán)中，上用潔凈紗布或玻璃板覆蓋，需要干的可入烘箱烘干。 2．作標(biāo)準(zhǔn)曲線：如需要定量測(cè)定透性變化，可用分析純NaCl配成0，10，20，40，60，80，100ppm的標(biāo)準(zhǔn)液，在20～25℃恒溫下用電導(dǎo)度測(cè)定，讀出電導(dǎo)數(shù)，并作成標(biāo)準(zhǔn)曲線，如只需定性，則作標(biāo)準(zhǔn)曲線這一步可以省去。3．準(zhǔn)備試驗(yàn)材料： 選用小麥或其它植物一定部位生長(zhǎng)及葉齡相似的葉子若干，剪下后先用紗布洗拭凈，取2份，各重2克，一份在40℃溫箱內(nèi)萎蔫半至1小時(shí)，一部分插入水杯中做對(duì)照。處理后分別用蒸餾水沖洗兩次，并用潔凈濾紙吸干，然后剪成長(zhǎng)約1厘米的小段，放入硬質(zhì)小玻璃杯中（大小能容電極為度），并用玻棒壓住，在燒杯中準(zhǔn)確加入1015毫升無(wú)離子水浸沒(méi)葉片。然后放入真空干燥器，用抽氣機(jī)抽氣78分鐘，以抽出細(xì)胞間隙中的空氣。然后緩緩放入空氣，水即被滲入組織中而使葉片變成半透明狀。注意在整個(gè)過(guò)程中，葉片及與葉片接觸的用具必須絕對(duì)潔凈，也不應(yīng)用手直接接觸葉片，以免污染。此外還應(yīng)防止口中呼出的CO2溶于杯中。4．把盛有葉片的水杯放入恒溫水浴中：維持水溫2025℃，1小時(shí)后，用潔凈玻璃棒輕輕攪拌，然后輕輕夾出葉片，仍在原溫度下用電導(dǎo)儀測(cè)定，記錄讀數(shù)。與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，即可求出溶液滲出的電解質(zhì)相當(dāng)于NaCl的ppm數(shù)。另用不加葉片而同樣處理的水杯作空白測(cè)定。由正式測(cè)定減去空白測(cè)定的數(shù)值，即為葉子外滲量。如只作定性測(cè)定，則用二處理直接比較即可。比較經(jīng)萎蔫處理及對(duì)照的測(cè)定結(jié)果，可知干旱高溫的影響。測(cè)定致少要有三個(gè)重復(fù)。實(shí)驗(yàn)九 植物缺水程度的測(cè)定（脯氨酸法）一、原理：當(dāng)植物缺水時(shí)體內(nèi)的脯氨酸含量增加。植物體內(nèi)脯氨酸含量在一定程度上反映了植物體內(nèi)的水分情況，因而可以作為植物缺水情況的參考性生理指標(biāo)。 用人造沸石(Permutit)在pH17范圍內(nèi)振蕩溶液可除去干擾的氨基酸或使其不與茚三酮反應(yīng)（如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、纈氨酸、胱氨酸、苯柄氨酸、精氨酸等），脯氨酸與茚三酮試劑呈顯色反應(yīng)，其含量與顏色的深淺呈正相關(guān)，可用分光度計(jì)測(cè)定。該法有專一性。二、儀器藥品（1）721分光光度計(jì)；（2）水浴鍋；（3）離心機(jī)；（4）移液管；（5）燒杯；（6）容量瓶；（7）研缽；（8）冰醋酸；（9）具塞試管；（10）脯氨酸；（11）80%乙醇；（12）茚三酮試劑： 6M磷酸中，加熱（70℃）溶解，試劑至少在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。三、實(shí)驗(yàn)步驟 1. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 取脯氨酸溶于80%乙醇中，然后稀釋成下列濃度：0、、1230μg/ml。分別取標(biāo)準(zhǔn)溶液2ml，冰醋酸2ml，茚三酮試劑2ml加入試管中，用橡皮塞塞緊，于沸水浴中加熱15分鐘。用分光光度計(jì)于波長(zhǎng)515nm下進(jìn)行比色測(cè)定，以濃度0為空白對(duì)照。將測(cè)定結(jié)果以脯氨酸濃度為橫坐標(biāo)，以光密度為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。 2. 植株樣品液的提取 選取植株功能葉片2g，用3ml 80%乙醇研磨（放少許石英砂），成漿狀，用80%乙醇洗研缽，將提取物和洗液置于試管中，80%乙醇總量為10ml。加蓋置于黑暗中室溫下提取24小時(shí)或水浴。 將提取液在放有活性炭的濾紙上進(jìn)行過(guò)濾，重復(fù)過(guò)濾一次，除去色素和殘?jiān)?。將提取液置于試管中，加其?/5的人造沸石強(qiáng)烈振蕩5分鐘。將上層液在離心機(jī)上離心10分鐘，取上清液備用。 3. 樣品溶液的測(cè)定 將離心后所得上清液，取2ml置于試管中，再加入2ml冰醋酸和2ml茚三酮試劑，加蓋密封，在沸水浴上加熱15分鐘。用3ml 80%乙醇代替樣品液作對(duì)照。在分光光度計(jì)上用515nm進(jìn)行比色測(cè)定。讀出光密度后，從坐標(biāo)曲線上求出樣品溶液中脯氨酸含量。 4. 結(jié)果計(jì)算： 脯氨酸含量（mg/g）= 103 5. 問(wèn)題：脯氨酸和植物缺水程度有何關(guān)系？三、過(guò)氧化氫酶的活性測(cè)定——紫外吸收法【原理】H2O2在240nm波長(zhǎng)下有強(qiáng)烈吸收，過(guò)氧化氫酶能分解過(guò)氧化氫，使反應(yīng)溶液吸光度(A240)隨反應(yīng)時(shí)間而降低。根據(jù)測(cè)量吸光率的變化速度即可測(cè)出過(guò)氧化氫酶的活性?！緝x器與用具】 紫外分光光度計(jì)；離心機(jī)；研缽；250ml容量瓶1個(gè)；，2ml刻度吸管1支；10ml試管3支；恒溫水?。弧驹噭浚▋?nèi)含1%聚乙烯吡咯烷酮）；（）。 【方法】 ：，加入2～3ml 4℃，轉(zhuǎn)入25ml容量瓶中，并用緩沖液沖洗研缽數(shù)次，合并沖洗液，并定容到刻度。混合均勻?qū)⒘科恐?℃冰箱中靜置10min，取上部澄清液在4000rpm下離心15min，上清液即為過(guò)氧化氫酶粗提液。5℃下保存?zhèn)溆?。：?0ml試管3支，其中2支為樣品測(cè)定管，1支為空白管，按表402順序加入試劑。表402 紫外吸收法測(cè)定H2O2樣品液配置表管 號(hào)S1S2S3粗酶液(ml)(ml)蒸餾水(ml) 25℃預(yù)熱后, ，每加完一管立即記時(shí)，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下測(cè)定吸光度，每隔1min讀數(shù)1次，共測(cè)4min，待3支管全部測(cè)定完后，按下式計(jì)算酶活性。 ： （u）。 過(guò)氧化氫酶活性(u/gFW/min)=式中 A240 = AS0－ AS0—加入煮死酶液的對(duì)照管吸光值； AS1, AS2—樣品管吸光值； Vt—粗酶提取液總體積（ml）；