【正文】 左右）與預(yù)期相符，而且通過(guò)和Plfy::antiLFY酶切后的結(jié)果并排跑電泳，更充分證明了切出的小片段確實(shí)是來(lái)自于Plfy::antiLFY的Plfy。同理，::GFP并排作酶切、跑電泳，證明了切出的小片段是來(lái)自于Pnfl::GFP的GFP。Plfy::GFP質(zhì)粒構(gòu)建成功。 圖3：質(zhì)粒Plfy::GFP的構(gòu)建: 檢測(cè)Plfy::antiLFY (Plfy)Lane 1: λDNA/EcoRI+HindIII DNA Marker Lane 2: Plfy::antiLFY plasmid Lane 3: Plfy::antiLFY/EcoRI+XbaI Lane 4: Plfy::antiLFY/EcoRI+XhoI Lane 5: Plfy::antiLFY/EcoRI+KpnI Lane 6: Plfy::antiLFY/PstI+XbaI Lane 7: Plfy::antiLFY/PstI+XhoI Lane 8: Plfy::antiLFY/PstI+KpnI Lane 9: DL2000 DNA Marker: 檢測(cè)Plfy::antiLFY（antiLFY）Lane 1: λDNA/EcoRI+HindIII DNA Marker Lane 2: Plfy::antiLFY質(zhì)粒 Lane 3: Plfy::antiLFY/XbaI+SacI Lane 4: Plfy::antiLFY/XhoI+SacI Lane 5: Plfy::antiLFY/KpnI+SacI Lane 6: Plfy::antiLFY/XbaI+BamHI Lane 7: Plfy::antiLFY/XhoI+BamHI Lane 8: Plfy::antiLFY/KpnI+BamHI Lane 9: DL2000 DNA Marker：檢測(cè)Pnfl::GFP（GFP）Lane 1: DL2000 DNA Marker Lane 2: Pnfl::GFP/XbaI+SacI Lane 3: Pnfl::GFP質(zhì)粒：檢測(cè)Pnfl::GFP（GFP）Lane 1: 以無(wú)菌水為模板的PCR產(chǎn)物（負(fù)對(duì)照） Lane 2: 正對(duì)照 Lane 3: 以Pnfl::GFP為模板的PCR產(chǎn)物 Lane 4: DL2000 DNA Marker: 新構(gòu)建的Plfy::GFP酶切鑒定（檢測(cè)Plfy）Lane 1: Plfy::antiLFY質(zhì)粒 Lane 2: 新構(gòu)建的Plfy::GFP質(zhì)粒 Lane 3: Plfy::antiLFY/PstI+XbaI Lane 4: Plfy::GFP/PstI+XbaI Lane 5: Plfy::GFP/PstI+BamHI Lane 6: Plfy::antiLFY/EcoRI+XbaI Lane 7: Plfy::GFP/EcoRI+XbaI Lane 8: Plfy::GFP/EcoRI+BamHI Lane 9: DL2000 DNA Marker: 新構(gòu)建的Plfy::GFP酶切鑒定（檢測(cè)GFP）Lane 1: Pnfl::GFP質(zhì)粒 Lane 2: Pnfl::GFP/XbaI+SacI Lane 3: Plfy::GFP/XbaI+SacI Lane 4: Plfy::GFP質(zhì)粒: 新構(gòu)建的Plfy::GFP PCR鑒定（檢測(cè)GFP）Lane 1: DL2000 DNA Marker Lane 2: Plfy::GFP PCR產(chǎn)物 Lane 3: Pnfl::GFP PCR 產(chǎn)物 Lane 4: 以水為模板的PCR結(jié)果 Lane 5: DL2000 DNA Marker 討論本實(shí)驗(yàn)的目的是深入研究LFY類(lèi)基因的功能。我們的假設(shè)是：LFY類(lèi)基因與SAM的形成與活動(dòng)直接相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)已獲得的證據(jù)有：1. LFY基因的啟動(dòng)子在植物發(fā)育早期即定位活動(dòng)于SAM，而不單與開(kāi)花相關(guān)。 2. 以沒(méi)有LFY基因啟動(dòng)子活動(dòng)的根作為外植體進(jìn)行植株再生， LFY基因啟動(dòng)子活動(dòng)從無(wú)到有的轉(zhuǎn)變可能與SAM的重組直接相關(guān)。3. 用原位雜交的方法對(duì)LFY基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行直接檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)與以GUS為報(bào)告基因的啟動(dòng)子活動(dòng)具有一致性。目前，此工作還將進(jìn)一步進(jìn)行下去。主要從以下兩個(gè)方面著手：1. 完成根外植體植株再生整個(gè)過(guò)程中LFY基因的RNA水平整體原位雜交；2. 將Plfy::GFP轉(zhuǎn)入擬南芥，在熒光下跟蹤檢測(cè)Plfy的活動(dòng)，看Plfy活動(dòng)部位和出芽部位是否具有一致性。如果確有一致性，也就是說(shuō)莖端分生組織的那團(tuán)細(xì)胞的確是來(lái)自莖端分生組織形成前有LFY表達(dá)活性的細(xì)胞，則更進(jìn)一步的證明了我們的假設(shè)。致謝實(shí)驗(yàn)至此，我想對(duì)我的導(dǎo)師白書(shū)農(nóng)教授表達(dá)深深的謝意。白老師對(duì)科學(xué)現(xiàn)象獨(dú)到的見(jiàn)解使我大大加深了對(duì)很多問(wèn)題的理解，讓我體會(huì)到什么是真正的科學(xué)研究；白老師言語(yǔ)上的鼓勵(lì)和行為上的幫助使我克服了并將繼續(xù)克服實(shí)驗(yàn)中碰到的一個(gè)又一個(gè)困難；白老師嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度更使我受益匪淺。我還要感謝我們實(shí)驗(yàn)室的全部師兄師姐師弟師妹，感謝他們對(duì)我的幫助和大家共同創(chuàng)造的積極向上的氛圍。參考文獻(xiàn)[1] Kerstetter, and S. Hake. 1997. Plant Cell 9:10011010[2] Coen, E. S. et al. 1990. Cell 63: 13111322[3] Kelly, A. J. et al. 1995. Plant Cell 7: 225234[4] Hofer, J. et al. 1997. Current Biology 7: 581587[5] Pouteau, S. et al. 1997. Development 124: 33433351[6] Souer, E. et al. 1998. Development 125: 733742[7] Samach, A. et al. 1997. Plant Cell 9: 559570[8] Weigel, D. et al. 1992. Cell 69: 843859[9] Kyozuka, J. et al. 1998. PNAS 95: 19791982[10] Mouradov. A. et al. 1998. PNAS 95: 65376542[11] Bradly, D. et al. 1997. Science 275: 8083[12] Weigel, D. and O. Nilsson. 1995. Nature 377: 495500[13] Blazquez, M. et al. 1997. Development 124: 38353844[14] Engler, G. et al. 1994. Plant Mol. Biol. Reporter 12: 321331[15] SchwarzSommer, Z. et al. 2000. The Plant Journal. 23: 697702作者簡(jiǎn)介：劉曼，北京大學(xué)生命科學(xué)院細(xì)胞生物及遺傳學(xué)系98級(jí)本科生，2000年5月受“政基金”資助。感悟與寄語(yǔ)：參加“政基金”科研項(xiàng)目會(huì)讓我受益終生，深深感謝李政道先生的慷慨資助，深深感謝我的導(dǎo)師白書(shū)農(nóng)教授，深深感謝所有為“政基金”做過(guò)貢獻(xiàn)的老師和同學(xué)。指導(dǎo)教師簡(jiǎn)介：白書(shū)農(nóng)，北京大學(xué)生命科學(xué)院植物發(fā)育生物學(xué)教授。391 / 1