植物花藥和花粉培養(yǎng)(1)-資料下載頁(yè)
2025-05-26 12:10本頁(yè)面
【正文】 板密度與花培效率有很大的相關(guān)性。 5 103到 2 104／ ml密度均能有效培養(yǎng)。一般來(lái)說，足夠數(shù)量的、但相對(duì)低密度的小孢子濃度有利于小孢子競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)、氧氣、細(xì)胞分裂的空間，從則有利于胚狀體發(fā)生。 （七）花藥壁因素 花藥組織的存在對(duì)小孢子的胚性分裂具有明顯的促進(jìn)作用。但花藥壁損傷會(huì)釋放有毒物質(zhì)影響小雄核的發(fā)育。 單倍體植株鑒定和染色體加倍 一、倍性鑒定 （ 為什么要進(jìn)行倍性鑒定？ ） 染色體直接計(jì)數(shù)法 通常取根尖、莖尖等分生組織區(qū)進(jìn)行制片，直接計(jì)數(shù)染色體數(shù)目。 間接鑒定 （ 1） 掃描細(xì)胞光度儀鑒定（流式細(xì)胞儀） 主要測(cè)定葉片單個(gè)細(xì)胞中 DNA的含量確定細(xì)胞的倍性，材料的使用量可少到 1cm2。 （ 2）細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定法 葉片保衛(wèi)細(xì)胞大小、單位面積上的氣孔數(shù)及保衛(wèi)細(xì)胞中葉綠體的大小和數(shù)目與倍性具有高度的相關(guān)性。 （ 3）植株形態(tài)學(xué)鑒定法 單倍體植株瘦弱，葉片窄小，花小柱頭長(zhǎng)，花粉粒小，不結(jié)實(shí)。 （ 4）雜交鑒定法 自交或測(cè)交鑒定，看后代分離情況確定二倍體植株是來(lái)自小孢子還是體細(xì)胞。 （ 5）分子標(biāo)記鑒定 包括生化標(biāo)記（如同工酶標(biāo)記）和分子標(biāo)記（如 RFLP、 RAPD、 AFLP等） 二、染色體加倍 （ 為什么要進(jìn)行加倍？ ） （一）莖段培養(yǎng) 將單倍體植株的莖段進(jìn)行培養(yǎng)，誘導(dǎo)愈傷組織形成。由于單倍體愈傷組織在培養(yǎng)過程中會(huì)有一定頻率的核內(nèi)有絲分裂，從而形成二倍體細(xì)胞，分化出純合的二倍體植株。 二、染色體加倍 （ 為什么要進(jìn)行加倍？ ） （二）化學(xué)試劑誘變 有秋水仙素、 Oryzalin、 trifluralin、 APM等。 秋水仙素誘導(dǎo) （ 1）浸泡法 無(wú)菌條件下以一定濃度的秋水仙素浸泡再生小植株，再轉(zhuǎn)移至新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。 （ 2）生長(zhǎng)錐處理 秋水仙素水溶液直接涂抹生長(zhǎng)點(diǎn)（頂芽或腋芽）。 （ 3）培養(yǎng)基處理 將單倍體植株和任何一部分作為外植體，種植在附加一定濃度和秋水仙素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間后，轉(zhuǎn)入無(wú)秋水仙素的相同培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)誘導(dǎo)胚狀體。 除草劑誘導(dǎo) （毒性小，引起植株的變異幾率小） 花藥和花粉培養(yǎng)基本流程： 預(yù)處理花藥（物理或生理逆境） 收集具胚性小孢子的花藥，或離心收集胚性小孢子 培養(yǎng)（充足的營(yíng)養(yǎng)、合適的溫光、或條件培養(yǎng)）形成胚狀體 胚狀體轉(zhuǎn)移至固化培養(yǎng)基上”萌發(fā)”形成小植株。 選擇合適的供體植株（ F1？ ） 倍性鑒定或染色體加倍 花藥和花粉培養(yǎng)基本流程： 選擇合適的供體植株（ F1？） ? 預(yù)處理 （物理或生理逆境） (pretreatments, media, etc.) ? REGENERATE MANY PLANTS ? RECOVER DIPLOIDS BY CHROMOSOME DOUBLING ? EVALUATE PLANTS/ PROGENY FOR DESIRED GENE COMBINATIONS ? ? USE IN BREEDING PROGRAM?
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