冠狀病毒實驗室檢測-資料下載頁
2025-05-26 03:37本頁面
【正文】 以測定核苷酸序列，確定病原需要較好的經驗 冠狀病毒檢測通用引物對 : CorFW (539。ACWCARHTVAAYYTNAARTAYGC339。) CorRV (539。TCRCAYTTDGGRTARTCCCA3‘) 冠狀病毒通用引物 RTPCR擴增產物電泳 Onestep RTPCR assays (OneStep RTPCR kit。 QIAGEN) a 50 μl reaction volume containing 10 μL RNAextract, 10 μl 5x QIAGEN OneStep RTPCR Buffer, 2 μl dNTP mix (final concentration of 400 μM of each dNTP), μl QIAGEN OneStep RTPCR Enzyme Mix (a bination of Omniscript and Sensiscript reverse transcriptase and HotStarTaq DNA polymerase), 4 μM of each primer, and RNasefree water to 50 μl. The reaction was carried out with an initial reverse transcription step at 50176。 C for 30 min, followed by PCR activation at 95176。 C for 15 min, 50 cycles of amplification (30 sec at 94176。 C。 30 sec at 48176。 C。 1min at 72176。 C), and a final extension step at 72176。 C for 10 min 定量 PCR， TaqMan體系 ? ABI 公司首先推出 (PRISM 7000系列 ) 。 ? 實時檢測 : 每個循環(huán)都會產生與 PCR產物成正比的熒光物質 定量 RT PCR檢測 ? 試劑盒： RealTime OneStep RTPCR Master Mix (Applied Biosystems). ? 25μL 反應體系含： μL of 2X Master Mix, μL of the 40X MultiScribe and RNase Inhibitor mix, μL of 10 μM probe, μL each of 50 μM forward and reverse primers, μL of nucleasefree water, and 5 μL of nucleic acid extract ? 反應條件： 30 min at 48176。 C （反轉錄） , 10 min at 95176。 C ； 45 cycles of 15 s at 95176。 C and 1 min at 60176。 C. ? 對照設置： HCoV 陽性模板； 2個陰性模板（核酸提取開始）；無模板對照（ PCR擴增步驟） . ? 陽性結果判讀 :對照成立條件下， CT 45 cycles 后續(xù)工作 ? 代獲得全基因組序列后，進行進一步分析與引物優(yōu)化設計驗證，研制更好的分子檢測試劑 ? 表達純化結構抗原，制備單克隆抗體，研制免疫學檢測試劑 ? 結合感染病例及相關樣品，確定實驗室檢測規(guī)程。 SARS是否會再次出現？ ?? 研究表明 ， SARSCoV是動物中 SARS樣冠狀病毒在反復與人接觸中跨種屬突變后產生的 。 但對其原始宿主 、 中間宿主 ， 以及如何跨種屬突變造成人間流行尚不十分清楚 ， SARS再次出現的威脅依然存在 ！ 病毒病應急技術中心簡介 位于昌平區(qū)中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所新址主樓 5層西側，總面積約為 700平方米，含常規(guī)分子生物學、細胞培養(yǎng)、血清學及 BSLBSL2及 BSL3（主樓 6層）等病原研究實驗室 . 衛(wèi)生部 SARS 參比實驗室設在本科室內；承擔天花猴痘等重要病毒病的應急檢測和相關的技術儲備任務；同時開展病毒病預防控制新 技術及產品的研發(fā)等工作。 謝 謝
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