種煙草病毒tmvppt課件-資料下載頁
2025-05-25 23:57本頁面
【正文】 草蝕紋病毒 ( TEV) 、馬鈴薯 Y 病毒 ( PVY)和煙草脈帶花葉病毒 ( TVBMV)都有發(fā)生，且多為復(fù)合侵染 . 采集復(fù)合侵染的煙葉進(jìn)行多重 RTPCR 檢測，結(jié)果顯示煙草中 2 種、 3 種和 4 種病毒復(fù)合侵染都存在。 小結(jié) 一直以來多重 RTPCR 靈敏度沒有單重 RTPCR 高。本研究針對影響多重 RTPCR 的引物濃度、 Mg2 + 濃度和退火溫度等方面進(jìn)行優(yōu)化。研究發(fā)現(xiàn)，引物設(shè)計是多重 RTPCR 中非常關(guān)鍵的一步。引物的選擇對實(shí)驗(yàn)的成敗起著關(guān)鍵作用，既要使引物具有特異性，又要避免引物之間的相互影響，同時要盡量使各對引物的退火溫度相一致。通過 Blast 在線序列比對調(diào)整引物，使各條引物之間盡量不存在互補(bǔ)，有效減少了引物二聚體的存在。設(shè)計引物時使各對引物的 Tm 值較一致，保證在同一退火溫度下同時擴(kuò) TMV、 CMV、 TEV、 PVY 和TVBMV 5種病毒 DNA 擴(kuò)增片段的大小是影響多重 RTPCR 的另一個重要因素，若片段大小差別過大會影響到片段延伸時間的設(shè)定，因此本研究擴(kuò)增 5 個片段大小選擇在 200 ～ 500 bp 之間。由于多重RTPCR 需要在同一體系中同時擴(kuò)增出多條片段，擴(kuò)增片段的大小存在差異，再加上不同引物的特異性程度不盡相同，因此引物濃度和模板的量是影響多重 RTPCR的一個至關(guān)重要的因素，在建立多重 RTPCR體系的過程中需要對引物濃度和模板的量進(jìn)行反復(fù)摸索，以獲得一個最適量 生技 1102 黃雪婷
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