【正文】 。③ 利用 不對稱融合 獲得胞質(zhì)雜種。④ 是研究多種細(xì)胞生物學(xué)的基本問題的良好實(shí)驗(yàn)材料。123必須解決以下 四個(gè)基本技術(shù)問題 ： （ 1） 細(xì)胞壁降解酶的制備； （ 2） 各種植物體細(xì)胞的分離和培養(yǎng)技術(shù)； （ 3） 提高原生質(zhì)體的融合率； （ 4） 有效的雜種細(xì)胞篩選和雜種細(xì)胞培養(yǎng)再生植株的技術(shù)。1242)、體細(xì)胞雜交的步驟和方法 體細(xì)胞雜交過程中沒有減數(shù)分裂，由兩個(gè)二倍體體細(xì)胞原生質(zhì)體融合，便產(chǎn)生異源四倍體 的雜種植株。125① 原生質(zhì)體的分離126② 誘導(dǎo)原生質(zhì)體的融合 原生質(zhì)體的融合是體細(xì)胞雜交的關(guān)鍵，分為： 同核體的自發(fā)融合是沒有價(jià)值的。 將異源原生質(zhì)體用高濃度的 PEG溶液處理，就會形成粘連的團(tuán)聚體，然后再用高鈣（ Ca2+）、高pH的溶液處理，提高誘導(dǎo)融合率到 3050%。127③ 異核體的識別和雜種細(xì)胞的選擇 異核體識別方法： 。 ，即利用選擇性培養(yǎng)基供雜種細(xì)胞選擇生長。 。如利用光敏感性，葉綠素缺陷 突變體供互補(bǔ)選擇等。128④ 雜種植株的再生 u 在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上促進(jìn)雜種細(xì)胞持續(xù)分裂，逐漸形成肉眼可見的愈傷組織。u 轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)，誘導(dǎo)其分化出胚狀體、芽和根等，形成完整植株。129二、園藝作物基因工程育種概況u全球轉(zhuǎn)基因植物已達(dá) 35科 120多種。u轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)品市場銷售額 2022年增至 200億美元 。u全球轉(zhuǎn)基因作物 種植面積達(dá) 3990萬公頃 。u研究方向上， 第一代轉(zhuǎn)基因作物以抗病蟲為主 ，目前 第二代轉(zhuǎn)基因作物把培育品質(zhì)優(yōu)良 （高維生素、高營養(yǎng)、低脂肪）。130園藝植物基因工程技術(shù)要點(diǎn)u 目的基因的分離、克隆與修飾u 植物表達(dá)載體的構(gòu)建u 遺傳轉(zhuǎn)化u 轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞的篩選u 植株再生u 轉(zhuǎn)基因植株鑒定u 發(fā)放或進(jìn)一步培育各種新優(yōu)品種（系）131園藝植物基因工程主要應(yīng)用進(jìn)展u 花卉遺傳轉(zhuǎn)化中涉及到的目的基因 ：花色相關(guān)基因、花期相關(guān)基因、光溫周期相關(guān)基因、形態(tài)相關(guān)基因、抗性（包括抗寒、旱、熱、病、蟲、鹽堿）相關(guān)基因等。u 成功利用的有 ：花色素合成相關(guān)基因、形態(tài)建成基因、抗蟲基因、抗除草劑基因、乙烯合成抑制基因等。132u 果樹的基因遺傳轉(zhuǎn)化研究 首先在 核桃 上取得突破，相繼在 核桃 (美州山核桃 )、蘋果、桃、洋李、葡萄、獼猴桃、草莓、梨、等多種果樹上獲得了轉(zhuǎn)化體或轉(zhuǎn)基因植株。u 蔬菜作物的遺傳轉(zhuǎn)化 目前獲得轉(zhuǎn)基因植株的蔬菜作物主要有 ：番茄、馬鈴薯、芹菜、花椰菜、青花菜、白菜、黃瓜、菜豆、茄子等。 涉及的園藝性狀主要包括 抗病、抗除草劑、抗蟲及果實(shí)的延熟保鮮等方面。1331)、園藝植物抗蟲基因工程育種 抗蟲轉(zhuǎn)基因是目前進(jìn)展最快的領(lǐng)域 。自將1987年從蘇云金芽孢桿菌中分離到的 Bt毒蛋白基因?qū)霟煵菖c番茄表現(xiàn)抗蟲性以來，已相繼在玉米、馬鈴薯、甘藍(lán)、棉花等作物上獲得成功。 主要是針對鱗翅目、雙翅目、鞘翅目昆蟲。目前經(jīng)常使用的基因主要有三種： Bt毒蛋白 基因；蛋白酶抑制 基因； 植物凝集素 基因。1342)、園藝植物抗病基因工程 ① 抗病毒病基因工程 抗病基因工程中最成功的是抗病毒病。目前我國轉(zhuǎn) CMVcp的甜椒、番茄已獲得商品化生產(chǎn)；國外已商品化生產(chǎn)的轉(zhuǎn)基因抗病毒作物有西葫蘆和番木瓜等。 ② 抗細(xì)菌病基因工程 馬鈴薯轉(zhuǎn)殺菌肽基因植株對黑腫病菌和軟腐病菌有明顯的抗性。135③ 抗真菌病基因工程 目前較成功的策略是導(dǎo)入抗真菌蛋白基因，如幾丁質(zhì)酶基因和葡聚糖酶基因。1363)、園藝植物抗除草劑基因工程育種 通過基因工程技術(shù)提高作物對除草劑抗性：u 導(dǎo)入編碼特定除草劑作用的靶酶或靶蛋白基因 。獲得對該除草劑抗性，如抗草苷磷的番茄、油菜、大豆等。u 導(dǎo)入表達(dá)產(chǎn)物可使除草劑解毒的基因 。如抗 PPT的番茄、馬鈴薯、苜蓿等。1374)、其他方面u 園藝植物抗逆基因工程育種： 耐鹽性 、 耐旱性 、耐寒性 、 抗熱性 ；u 園藝植物品質(zhì)、產(chǎn)量基因工程育種： 雄性不育基因工程 、 控制果實(shí)成熟期 、 產(chǎn)生無籽果實(shí)以及其他品質(zhì)性狀改良基因工程 ，如馬鈴薯蛋白質(zhì)改良、提高維生素含量、改變花色、生產(chǎn)藥用蛋白等方面。138三、分子標(biāo)記技術(shù)與園藝作物遺傳育種遺傳標(biāo)記 遺傳標(biāo)記是指可以識別、可遺傳的、反映遺傳多態(tài)性的表現(xiàn)形式，主要包括形態(tài)學(xué)標(biāo)記、細(xì)胞學(xué)標(biāo)記、生化標(biāo)記與分子標(biāo)記。 廣義的分子標(biāo)記包括 蛋白質(zhì)標(biāo)記， 但目前分子標(biāo)記多指 以 DNA為基礎(chǔ)、可遺傳的標(biāo)記 。139分子標(biāo)記類型與基本原理1)、分子標(biāo)記特點(diǎn) ① 表現(xiàn)穩(wěn)定 ② 多態(tài)性直接以 DNA形式表現(xiàn) ，無組織器官、發(fā)育時(shí)期特異性， 不受環(huán)境條件、基因互作影響 ； ③ 數(shù)量多 理論上遍及整個(gè)基因組； ④ 多態(tài)性高 為大量重要性狀緊密連鎖的標(biāo)記篩選創(chuàng)造了條件；140 ⑤ 表現(xiàn)為 “ 中性 ” 對目標(biāo)性狀表達(dá)無不良影響，與不良性狀無必然連鎖； ⑥ 部分標(biāo)記遺傳方式為共顯性 可方便鑒別基因型純合與雜合類型； ⑦ 成本不是太高 。1412)、分子標(biāo)記類型① 以分子雜交為基礎(chǔ)的 DNA標(biāo)記技術(shù) ，主要有限制性片段長度多態(tài)性標(biāo)記（ RFLP）等；② 以 PCR為基礎(chǔ)的各種 DNA標(biāo)記技術(shù) ，主要為 隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA標(biāo)記 （ RAPD）， 簡單重復(fù)序列間區(qū)域標(biāo)記 (ISSR)， 擴(kuò)增片段長度多態(tài)性 （ AFLP）標(biāo)記，簡單序列重復(fù)標(biāo)記（ SSR） , 等；③ 新型分子標(biāo)記 ，如單核苷酸多態(tài)性 (SNP), 表達(dá)序列標(biāo)簽 (EST)等。142分子標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用 已廣泛用于植物 遺傳圖譜構(gòu)建 ； 系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系分析 ； 種質(zhì)資源分類鑒定 ； 品種注冊 ； 專利保護(hù) ； 病毒鑒定 ； 體細(xì)胞雜種鑒定 等。 1）分析親緣關(guān)系 分子標(biāo)記可為物種、變種、品種和親緣類群間的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系提供大量的 DNA分子水平證據(jù)。1432）分子標(biāo)記輔助選擇 利用分子標(biāo)記進(jìn)行親本種質(zhì)材料多樣性或品種間的遺傳差異（遺傳距離）分析和評價(jià)，有利于雜交親本的選擇和選配。144概述 良種繁育 就是迅速擴(kuò)大新品種種子的數(shù)量和提高種子質(zhì)量以滿足生產(chǎn)需要的過程。它是決定一個(gè)新育成或新引進(jìn)的優(yōu)良品種能否盡快地得以推廣應(yīng)用的關(guān)鍵。 良種繁育的目的 ：向生產(chǎn)提供足夠數(shù)量和高質(zhì)量的良種種子。防止品種混雜、退化和保持優(yōu)良種性。 良種繁育145一、品種審定 是專指由權(quán)威性的專門機(jī)構(gòu) (如品種審定委員會等 )，對新選育或新引進(jìn)的品種是否能推廣，和在什么范圍內(nèi)推廣，作出審查決定的步聚。 目的 為了加強(qiáng)品種管理，加速利用育種新成果，有計(jì)劃地、因地制宜地推廣優(yōu)良品種。 依據(jù) 就是品種試驗(yàn)。新品種必須通過多點(diǎn)的、二至三年的區(qū)域試驗(yàn)和一至二年生產(chǎn)試驗(yàn)。 146二、良種繁育 良種繁育的意義 良種繁育的任務(wù) 主要作物良種繁育技術(shù) 辣椒種子生產(chǎn)技術(shù)147三、良種繁育的基本原理和方法 品種保純和防止退化1)、品種退化的現(xiàn)象 品種在繁殖過程中，由于種種原因會逐漸喪失其優(yōu)良性狀，失去原品種的典型性，這一現(xiàn)象通常稱為 品種退化 。 具體表現(xiàn)： 產(chǎn)量下降、品質(zhì)變劣、成熟期改變、生活力降低、抗逆力減弱、性狀極不整齊甚至完全喪失品種的典型性。1482)、品種退化的原因① 機(jī)械混雜 是自花授粉作物混雜退化的主要原因。② 生物學(xué)混雜 在品種繁殖過程中，由于隔離不夠而發(fā)生的天然雜交（串花）。異花授粉作物的混雜退化一般主要是由生物學(xué)混雜引起的。149 ③ 自然突變和品種本身遺傳性的變化 ④ 不正確的選擇和留種方式的影響 ⑤ 不適宜的自然條件和栽培技術(shù)的影響1503)、品種保純和防止退化的方法 ① 嚴(yán)格執(zhí)行種子收獲調(diào)制的技術(shù)操作規(guī)程 ，不同品種要分別堆放，在更換品種時(shí)，必須徹底清除前一品種殘留的種子。 、脫粒、清選、晾曬、消毒、貯藏，事先都應(yīng)對場所和用具進(jìn)行清潔，并認(rèn)真檢查，清除以前殘留的種子。151② 隔離留種 在留種時(shí)對易于相互雜交的變種、品種或類型進(jìn)行隔離。隔離的方式有： 其方法是在開花期采取花序套袋，網(wǎng)罩隔離或溫室隔離留種等。 分期播種，分期，春化處理和光照處理等措施，使不同品種的開花期前后措開。 將容易發(fā)生雜交的品種、變種、類型之間相互適當(dāng)?shù)木嚯x進(jìn)行留種即可。152