【正文】 。③ 利用 不對稱融合 獲得胞質雜種。④ 是研究多種細胞生物學的基本問題的良好實驗材料。123必須解決以下 四個基本技術問題 ： （ 1） 細胞壁降解酶的制備； （ 2） 各種植物體細胞的分離和培養(yǎng)技術； （ 3） 提高原生質體的融合率； （ 4） 有效的雜種細胞篩選和雜種細胞培養(yǎng)再生植株的技術。1242)、體細胞雜交的步驟和方法 體細胞雜交過程中沒有減數分裂，由兩個二倍體體細胞原生質體融合，便產生異源四倍體 的雜種植株。125① 原生質體的分離126② 誘導原生質體的融合 原生質體的融合是體細胞雜交的關鍵，分為： 同核體的自發(fā)融合是沒有價值的。 將異源原生質體用高濃度的 PEG溶液處理，就會形成粘連的團聚體，然后再用高鈣（ Ca2+）、高pH的溶液處理，提高誘導融合率到 3050%。127③ 異核體的識別和雜種細胞的選擇 異核體識別方法： 。 ，即利用選擇性培養(yǎng)基供雜種細胞選擇生長。 。如利用光敏感性，葉綠素缺陷 突變體供互補選擇等。128④ 雜種植株的再生 u 在適當的培養(yǎng)基上促進雜種細胞持續(xù)分裂，逐漸形成肉眼可見的愈傷組織。u 轉移至分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)，誘導其分化出胚狀體、芽和根等，形成完整植株。129二、園藝作物基因工程育種概況u全球轉基因植物已達 35科 120多種。u轉基因植物產品市場銷售額 2022年增至 200億美元 。u全球轉基因作物 種植面積達 3990萬公頃 。u研究方向上， 第一代轉基因作物以抗病蟲為主 ，目前 第二代轉基因作物把培育品質優(yōu)良 （高維生素、高營養(yǎng)、低脂肪）。130園藝植物基因工程技術要點u 目的基因的分離、克隆與修飾u 植物表達載體的構建u 遺傳轉化u 轉化植物細胞的篩選u 植株再生u 轉基因植株鑒定u 發(fā)放或進一步培育各種新優(yōu)品種（系）131園藝植物基因工程主要應用進展u 花卉遺傳轉化中涉及到的目的基因 ：花色相關基因、花期相關基因、光溫周期相關基因、形態(tài)相關基因、抗性（包括抗寒、旱、熱、病、蟲、鹽堿）相關基因等。u 成功利用的有 ：花色素合成相關基因、形態(tài)建成基因、抗蟲基因、抗除草劑基因、乙烯合成抑制基因等。132u 果樹的基因遺傳轉化研究 首先在 核桃 上取得突破，相繼在 核桃 (美州山核桃 )、蘋果、桃、洋李、葡萄、獼猴桃、草莓、梨、等多種果樹上獲得了轉化體或轉基因植株。u 蔬菜作物的遺傳轉化 目前獲得轉基因植株的蔬菜作物主要有 ：番茄、馬鈴薯、芹菜、花椰菜、青花菜、白菜、黃瓜、菜豆、茄子等。 涉及的園藝性狀主要包括 抗病、抗除草劑、抗蟲及果實的延熟保鮮等方面。1331)、園藝植物抗蟲基因工程育種 抗蟲轉基因是目前進展最快的領域 。自將1987年從蘇云金芽孢桿菌中分離到的 Bt毒蛋白基因導入煙草與番茄表現抗蟲性以來，已相繼在玉米、馬鈴薯、甘藍、棉花等作物上獲得成功。 主要是針對鱗翅目、雙翅目、鞘翅目昆蟲。目前經常使用的基因主要有三種： Bt毒蛋白 基因；蛋白酶抑制 基因； 植物凝集素 基因。1342)、園藝植物抗病基因工程 ① 抗病毒病基因工程 抗病基因工程中最成功的是抗病毒病。目前我國轉 CMVcp的甜椒、番茄已獲得商品化生產；國外已商品化生產的轉基因抗病毒作物有西葫蘆和番木瓜等。 ② 抗細菌病基因工程 馬鈴薯轉殺菌肽基因植株對黑腫病菌和軟腐病菌有明顯的抗性。135③ 抗真菌病基因工程 目前較成功的策略是導入抗真菌蛋白基因，如幾丁質酶基因和葡聚糖酶基因。1363)、園藝植物抗除草劑基因工程育種 通過基因工程技術提高作物對除草劑抗性：u 導入編碼特定除草劑作用的靶酶或靶蛋白基因 。獲得對該除草劑抗性，如抗草苷磷的番茄、油菜、大豆等。u 導入表達產物可使除草劑解毒的基因 。如抗 PPT的番茄、馬鈴薯、苜蓿等。1374)、其他方面u 園藝植物抗逆基因工程育種： 耐鹽性 、 耐旱性 、耐寒性 、 抗熱性 ；u 園藝植物品質、產量基因工程育種： 雄性不育基因工程 、 控制果實成熟期 、 產生無籽果實以及其他品質性狀改良基因工程 ，如馬鈴薯蛋白質改良、提高維生素含量、改變花色、生產藥用蛋白等方面。138三、分子標記技術與園藝作物遺傳育種遺傳標記 遺傳標記是指可以識別、可遺傳的、反映遺傳多態(tài)性的表現形式，主要包括形態(tài)學標記、細胞學標記、生化標記與分子標記。 廣義的分子標記包括 蛋白質標記， 但目前分子標記多指 以 DNA為基礎、可遺傳的標記 。139分子標記類型與基本原理1)、分子標記特點 ① 表現穩(wěn)定 ② 多態(tài)性直接以 DNA形式表現 ，無組織器官、發(fā)育時期特異性， 不受環(huán)境條件、基因互作影響 ； ③ 數量多 理論上遍及整個基因組； ④ 多態(tài)性高 為大量重要性狀緊密連鎖的標記篩選創(chuàng)造了條件；140 ⑤ 表現為 “ 中性 ” 對目標性狀表達無不良影響，與不良性狀無必然連鎖； ⑥ 部分標記遺傳方式為共顯性 可方便鑒別基因型純合與雜合類型； ⑦ 成本不是太高 。1412)、分子標記類型① 以分子雜交為基礎的 DNA標記技術 ，主要有限制性片段長度多態(tài)性標記（ RFLP）等；② 以 PCR為基礎的各種 DNA標記技術 ，主要為 隨機擴增多態(tài)性DNA標記 （ RAPD）， 簡單重復序列間區(qū)域標記 (ISSR)， 擴增片段長度多態(tài)性 （ AFLP）標記，簡單序列重復標記（ SSR） , 等；③ 新型分子標記 ，如單核苷酸多態(tài)性 (SNP), 表達序列標簽 (EST)等。142分子標記技術的應用 已廣泛用于植物 遺傳圖譜構建 ； 系統發(fā)育關系分析 ； 種質資源分類鑒定 ； 品種注冊 ； 專利保護 ； 病毒鑒定 ； 體細胞雜種鑒定 等。 1）分析親緣關系 分子標記可為物種、變種、品種和親緣類群間的系統發(fā)育關系提供大量的 DNA分子水平證據。1432）分子標記輔助選擇 利用分子標記進行親本種質材料多樣性或品種間的遺傳差異（遺傳距離）分析和評價，有利于雜交親本的選擇和選配。144概述 良種繁育 就是迅速擴大新品種種子的數量和提高種子質量以滿足生產需要的過程。它是決定一個新育成或新引進的優(yōu)良品種能否盡快地得以推廣應用的關鍵。 良種繁育的目的 ：向生產提供足夠數量和高質量的良種種子。防止品種混雜、退化和保持優(yōu)良種性。 良種繁育145一、品種審定 是專指由權威性的專門機構 (如品種審定委員會等 )，對新選育或新引進的品種是否能推廣，和在什么范圍內推廣，作出審查決定的步聚。 目的 為了加強品種管理，加速利用育種新成果，有計劃地、因地制宜地推廣優(yōu)良品種。 依據 就是品種試驗。新品種必須通過多點的、二至三年的區(qū)域試驗和一至二年生產試驗。 146二、良種繁育 良種繁育的意義 良種繁育的任務 主要作物良種繁育技術 辣椒種子生產技術147三、良種繁育的基本原理和方法 品種保純和防止退化1)、品種退化的現象 品種在繁殖過程中，由于種種原因會逐漸喪失其優(yōu)良性狀，失去原品種的典型性，這一現象通常稱為 品種退化 。 具體表現： 產量下降、品質變劣、成熟期改變、生活力降低、抗逆力減弱、性狀極不整齊甚至完全喪失品種的典型性。1482)、品種退化的原因① 機械混雜 是自花授粉作物混雜退化的主要原因。② 生物學混雜 在品種繁殖過程中，由于隔離不夠而發(fā)生的天然雜交（串花）。異花授粉作物的混雜退化一般主要是由生物學混雜引起的。149 ③ 自然突變和品種本身遺傳性的變化 ④ 不正確的選擇和留種方式的影響 ⑤ 不適宜的自然條件和栽培技術的影響1503)、品種保純和防止退化的方法 ① 嚴格執(zhí)行種子收獲調制的技術操作規(guī)程 ，不同品種要分別堆放，在更換品種時，必須徹底清除前一品種殘留的種子。 、脫粒、清選、晾曬、消毒、貯藏，事先都應對場所和用具進行清潔，并認真檢查，清除以前殘留的種子。151② 隔離留種 在留種時對易于相互雜交的變種、品種或類型進行隔離。隔離的方式有： 其方法是在開花期采取花序套袋，網罩隔離或溫室隔離留種等。 分期播種，分期，春化處理和光照處理等措施，使不同品種的開花期前后措開。 將容易發(fā)生雜交的品種、變種、類型之間相互適當的距離進行留種即可。152