【導(dǎo)讀】1．明確藥品生物檢定的概念和任務(wù)。3．熟悉實(shí)踐操作。2．供試品（固體）溶液的配制。性檢定、升降壓物質(zhì)檢查的原理、方法和注意事項(xiàng)。具備獨(dú)立完成藥品檢驗(yàn)的。驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范進(jìn)行操作，全面控制藥品質(zhì)量。進(jìn)行觀察，避免與減少實(shí)驗(yàn)誤差。生物學(xué)密切相關(guān)。驗(yàn)數(shù)據(jù)，誤差原因，進(jìn)行報(bào)告。⑵實(shí)踐考核：實(shí)踐操作40%，實(shí)踐結(jié)果與報(bào)告50%，實(shí)踐紀(jì)律與預(yù)習(xí)10%。制成的培養(yǎng)基凝固后應(yīng)透明，不得有沉淀。調(diào)PH宜為一次性，避免反復(fù)加酸、堿影響培養(yǎng)基質(zhì)量。制備好的培養(yǎng)基，使用期限為1個(gè)月，并貯存在冰箱中。在抗生素效價(jià)測定中，裝有培養(yǎng)基和試驗(yàn)菌的玻璃培養(yǎng)皿稱為雙碟。用100℃水?。ㄎ⒉t）使培養(yǎng)基熔化后，在室溫冷卻至70℃左右，并仔細(xì)檢查瓊脂培養(yǎng)基是否熔化均勻，有無凝塊。用大口的滅菌刻度吸管，迅速吸取20ml培養(yǎng)基，注入各個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)，培養(yǎng)基上，蓋上干燥陶瓦圓蓋，，待凝固。熱，這樣倒菌層時(shí)，培養(yǎng)基易于攤布水平。搖勻菌層培養(yǎng)基時(shí)，一定注意不能搖出氣泡。

　　

【正文】 或規(guī)定的函數(shù)（ y）按劑量分組列成方陣表。 （ 2）特異反應(yīng)剔除和缺項(xiàng)補(bǔ)足。 目的：運(yùn)用統(tǒng)計(jì)方法來驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否符合量反應(yīng)的平行線設(shè)計(jì)原理，是否偏離了直線性和平行性，以便評價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。 （ l）可靠性測驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)方法 ① 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的方差分析 ② 劑間變異的分析 （ 2）可靠性測驗(yàn)結(jié)果分析 （ 3）可靠性測驗(yàn)結(jié)果判斷 （ ）法、（ ）法 ： 回歸、劑間應(yīng)非常顯著（ P＜ ） 、 偏離平行應(yīng)不顯著（ P＞ ） （ ）法、（ .3 ）法 ： 回歸、劑間應(yīng)非常顯著（ P＜ ） 、 偏離平行應(yīng)不顯著（ P＞ ） 、 二次曲線與反向二次曲線均應(yīng)不顯著（ P＞ ） 四、不同劑型藥品的供試液配制 （ 20分鐘） ⑴注射用凍干 粉末 ⑵水針劑 ⑶片劑 ①素片 ②糖衣片、腸衣片 ⑷膠囊劑 ⑸顆粒劑或干糖漿 ⑹軟膏劑或眼膏劑： 本 節(jié) 小結(jié) ： （ 10 分鐘） 1． 瓊脂擴(kuò)散法實(shí)驗(yàn)流程 2． 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理 作 業(yè) 主要 參考 資 料 ⑴《中國藥典》 2020 年版二部 ⑵《中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》 2020 年版 ⑶《生物藥物分析》 2020 年版 白秀峰主編 中國醫(yī)藥科技出版社 課后自我 總結(jié)分析 《藥品生物檢定技術(shù)》教案 第 14 次課 ２學(xué)時(shí) 章 節(jié) 第七章 生物檢定統(tǒng)計(jì)法與微機(jī)運(yùn)算 第一節(jié) 必備 知識(shí) 第二節(jié) 實(shí)踐操作 教學(xué)目的 和 要求 1． 熟悉生物檢定統(tǒng)計(jì)法的有關(guān)概念。 2．掌握常用的生物檢定統(tǒng)計(jì)法。 3．掌握微機(jī)運(yùn)算實(shí)踐操作。 教 學(xué) 重 點(diǎn) 難 點(diǎn) 【 重點(diǎn) 】 １ ． 常用的生物檢定統(tǒng)計(jì)法。 2． 微機(jī)運(yùn)算實(shí)踐操作。 【 難點(diǎn) 】 微機(jī)運(yùn)算實(shí)踐操作 教 學(xué) 過 程 【教學(xué)方法】 講授法、提問法、練習(xí)法 【輔助手段】 多媒體教學(xué) 【教學(xué)內(nèi)容】 一、總則 （ 25 分鐘） 生物檢定法是利用藥物對生物體或其離體器官組織等所起的藥理作用來檢定藥物效價(jià)的方法。用于無適當(dāng) 理化方法進(jìn)行檢定的藥物。凡生物檢定法測定效價(jià)的品種必須進(jìn)行實(shí)驗(yàn)可靠性測驗(yàn)及可信限計(jì)算等。 生物檢定標(biāo)準(zhǔn)品 供試品 等反應(yīng)劑量對比 控制生物變異必須注意以下幾點(diǎn)： 誤差項(xiàng) 指從實(shí)驗(yàn)結(jié)果的總變異中分去不同劑量及不同因級對變異的影響后，剩余的變異成分，用方差（ S2）表示。對于因?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)類型的限制無法分離的變異成分，或估計(jì)某種因級對變異的影響小，可不予分離者，都并入 S2。但劑間變異必須分離。 可靠性測驗(yàn) （ 1）可靠性測驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)方法，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否符合量反應(yīng)的平行線原理，是否偏離了直線性 和平行性，從而評價(jià)實(shí)驗(yàn)的可靠程度。對于偏離不顯著（在一定的概率水平下）的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，認(rèn)為可靠性成立時(shí)，方可按有關(guān)公式計(jì)算供試品的效價(jià)和可信限。 （ 2）可靠性測驗(yàn)方法：實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性是以方差分析法測驗(yàn)的，測驗(yàn)多組均數(shù)之間的差別是否顯著。在實(shí)驗(yàn)中存在著 S 和 T 的差別，直線及平行線的關(guān)系，劑量與雙碟之間的關(guān)系。通過統(tǒng)計(jì)以上各組數(shù)之間方差，以試品間、回歸、偏離平行、劑間（列）、碟間（行）的方差與誤差項(xiàng)（ S2）的比值（稱 F值），來確定各自的差異的顯著性程度。 可信限 可信限（ FL）標(biāo)志檢定結(jié)果的精密度。 各品種的檢定方法 項(xiàng)下都有其可信限率的規(guī)定 。 對同批供試品重復(fù)試驗(yàn)所得 n 次實(shí)驗(yàn)結(jié)果（包括 FL％超過規(guī)定的結(jié)果），可按實(shí)驗(yàn)結(jié)果的合并計(jì)算法算得 PT 的均值及其 FL％作為檢定結(jié)果。 二、生物檢定的常用方法 （ 60 分鐘） 質(zhì)反應(yīng)的直接測定法、平行線測定法。量反應(yīng)的平行線測定法。 （一）直接測定法 直接測定法：直接測得藥物對各個(gè)動(dòng)物最小效量或最小致死量的檢定方法。如洋地黃及其制劑的效價(jià)測定。 xS和 xT為 S 和 T 組各只動(dòng)物的對數(shù)最小致死量，它們的均值 xS和 xT為 S和 T 的等反應(yīng)劑量， ns和 nT為 S 和 T 組的動(dòng)物數(shù)。 1．效價(jià)計(jì)算 2．誤差 項(xiàng)及可信限計(jì)算 當(dāng)兩批以上供試品（ T、 U）和標(biāo)準(zhǔn)品同時(shí)比較時(shí)，按（ 9）式計(jì)算 S、 T、U 的合并方差 S2。 效價(jià) PT、 PU 則是 T、 U 分別與 S 比較，按（ 1）～（ 3）式計(jì)算。 例 1 直接測定法的微機(jī)運(yùn)算（軟件運(yùn)用） （二）量反應(yīng)的平行線測定法 量反應(yīng)：藥物對生物體所引起的反應(yīng)隨著藥物劑量的增加產(chǎn)生的量變可以測量者，稱 ~，如血壓、血糖的變化值。 量反應(yīng)平行線測定法要求：在一定劑量范圍內(nèi)， S 和 T 的對數(shù)劑量 X 和反應(yīng)或反應(yīng)的特定函數(shù) Y 呈直線關(guān)系，當(dāng) S 和 T 的活性組分基本相同時(shí)，兩直線平行。 1．實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)類型 （ 1）隨機(jī) 設(shè)計(jì) （ 2）隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì) 生物檢定品種的量反應(yīng)檢定主要有：（ ）法；（ ）法或（ ）法、（ ）法，即 S， T（或 U）各用 2 個(gè)劑量組或 3 個(gè)劑量組，統(tǒng)稱（ k． k）或（ ）法。一般都是按（ ）法實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。中國藥典平行線測定法的計(jì)算都用簡算法。 簡算法要求（ ）法實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)必須符合以下條件： （ 1） S 和 T 相鄰高低劑量組的比值（ r）要相等，一般 r 用 1:～ 1:， lgr=I （ 2）各劑量組的反應(yīng)個(gè)數(shù)（ m）應(yīng)相等。 本 節(jié) 小結(jié) ： （ 5 分鐘） 1． 直接測定法定義 2． 量反應(yīng) 定義 作 業(yè) 主要 參考 資 料 1．《中國藥典》 2020 年版二部 2．《中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》 2020 年版 3．《生物藥物分析》 2020 年版 白秀峰主編 中國醫(yī)藥科技出版社 課后自我 總結(jié)分析 《藥品生物檢定技術(shù)》教案 第 15 次課 ２學(xué)時(shí) 章 節(jié) 第七章 生物檢定統(tǒng)計(jì)法與微機(jī)運(yùn)算 第一節(jié) 必備知識(shí) 第二節(jié) 實(shí)踐操作 教學(xué)目的 和 要求 。 。 。 教 學(xué) 重 點(diǎn) 難 點(diǎn) 【 重點(diǎn) 】 。 。 【 難點(diǎn) 】 微機(jī)運(yùn)算實(shí)踐操作 教 學(xué) 過 程 【教學(xué)方法】 講授法、提問法、練習(xí)法 【輔助手段】 多媒體教學(xué) 【教學(xué)內(nèi)容】 2．效價(jià)及誤差計(jì)算 （ 45 分鐘） 效價(jià)及誤差計(jì)算處理步驟如下： （ 1）將反應(yīng)值或規(guī)定的函數(shù)（ y）按劑量分組列成方陣表。 （ 2）特異反應(yīng)剔除和缺項(xiàng)補(bǔ)足 ①特異反應(yīng)剔除（隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)） ②缺項(xiàng)補(bǔ)足 缺項(xiàng)不得超過反應(yīng)總個(gè)數(shù)的 5％。 練習(xí) 1（ ）法隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)特異剔除和缺項(xiàng)補(bǔ)足 練習(xí) 2（ ）法隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)特異剔除和缺項(xiàng)補(bǔ)足 （ 3）方差分析與可靠性測驗(yàn)。 ①可靠性測驗(yàn)采用 F 測驗(yàn)，即實(shí)驗(yàn)結(jié)果的方差分析。 將實(shí)驗(yàn)結(jié)果求得的 F 值與查表 F 值比較 若大于 F（ f1,f2） 的 F 值，則 P＜ ，表示差別有非常顯著意義。 若大于 F（ f1,f2） 的 F 值，則 P＜ ，表示差別有顯著意義。 若小于 F（ f1,f2） 的 F 值，則 P＞ ，表示差別無顯著意義。 ②可靠性測驗(yàn)結(jié)果判斷 （ ）法、（ ）法：回歸、劑間應(yīng)非常顯著（ P＜ ）、偏離平行應(yīng)不顯著（ P＞ ） （ ）法、（ ）法：回歸、劑間應(yīng)非常顯著（ P＜ ）、偏離平行應(yīng)不顯著（ P＞ ）、二次曲線與反向二次曲線均應(yīng)不顯著（ P＞ ） （ 4）進(jìn)行效價(jià)及可信限計(jì)算 （ 2． 2）法的微機(jī)運(yùn)算（軟件運(yùn)用） （三）實(shí)驗(yàn)結(jié)果的合并計(jì)算 （ 40 分鐘） 同一批供試品重復(fù) n 次測定，所得 n 個(gè)測定結(jié)果，可用合并計(jì)算的方法求其效價(jià) PT 的均值及其 FL。 參加合并計(jì)算的 n 個(gè)結(jié)果應(yīng)該是： （ 1）各個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果是獨(dú)立的，完整的，是在動(dòng)物來源、實(shí)驗(yàn)條件相同的情況下，與標(biāo)準(zhǔn)品同時(shí)比較所得的檢定結(jié)果 (PT） 。 （ 2）各次檢定結(jié)果，經(jīng)用標(biāo)示量或估計(jì)效價(jià)（ AT）校正后，取其對數(shù)值（ lgPT）參加合并計(jì)算。 計(jì)算時(shí)，令 lgPT=M n 次實(shí)驗(yàn)結(jié)果共 n 個(gè) M 值，按（ 35）式進(jìn)行χ 2測驗(yàn) 當(dāng)χ 2 計(jì)算小于χ 2（ f） 查表值時(shí)，認(rèn)為 n 個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均一，可按（ 37）式、（ 38）式、（ 39）式計(jì)算 n 個(gè) M 的加權(quán)均值 M、 SM 及其 FL。 合并計(jì)算的自由度（ f ）是 n 個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的 S2 自由度之和。 ，按此 f查 t 值表（表一）得 t 值。 PT 及其可信限按（ 40）式、（ 41）式計(jì)算： FL％按（ 8）式計(jì)算。 當(dāng)χ 2 計(jì)算值大于χ 2（ f） 查表值時(shí)，則 n 個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不均一，可用以下方法進(jìn)行合并計(jì)算。 （ 1）如為個(gè)別實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響 n 次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的均一性，可以剔除個(gè)別結(jié)果，將其余均一的結(jié)果按以上公式進(jìn)行合并計(jì)算。 （ 2）如果 n 次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不均一性并非個(gè)別實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，則按（ 42）式、（ 43）式計(jì)算 n 個(gè) M 的不加權(quán)均值 M 及其 SM，再按（ 39）式、（ 40）式、（ 41）式計(jì)算 M 的 FL、 PT 及其 FL。如洋地黃及其制劑的效價(jià)測定。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果合并計(jì)算的微機(jī)運(yùn)算（軟件運(yùn)用） 本 節(jié) 小結(jié) ： （ 5 分鐘） 1． 效價(jià)及誤差計(jì)算 的 處理步驟 2．可靠性測驗(yàn)結(jié)果判斷 作 業(yè) 1． 簡算法要求（ ）法實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)必須符合的條件 2． 效價(jià)及誤差計(jì)算 的 處理步驟 3．可靠性測驗(yàn)結(jié)果判斷 主要 參考 資 料 1．《中國藥典》 2020 年版二部 2．《中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》 2020 年版 3．《生物藥物分析》 2020 年版 白秀峰主編 中國醫(yī)藥科技出版社 課后自我 總結(jié)分析 《藥品生物檢定技術(shù)》教案 第 16 次課 ２學(xué)時(shí) 章 節(jié) 第八章 毒力及異常毒性檢查 第一節(jié) 必備知識(shí) 第二 節(jié) 異常毒性檢查法 教學(xué)目的 和 要求 1． 熟悉藥品的有害物質(zhì)檢查。 2． 熟悉限度實(shí)驗(yàn)。 3． 熟悉葡萄糖酸銻鈉。 4． 熟悉異常毒性檢查法的概念。 5． 掌握藥品的異常毒性試驗(yàn)概念。 6． 掌握藥品異常毒性試驗(yàn)試劑劑量確定方法。 7． 掌握異常毒性檢查法。 8． 掌握 葡萄糖酸銻鈉毒力檢查法。 教 學(xué) 重 點(diǎn) 難 點(diǎn) 【 重點(diǎn) 】 １ ． 藥品的異常毒性試驗(yàn)概念。 2．藥品異常毒性試驗(yàn)試劑劑量確定方法。 3．異常毒性檢查法及 SOP。 【 難點(diǎn) 】 異常毒性檢查法及 SOP 教 學(xué) 過 程 【教學(xué)方法】 講授法、提問法、練習(xí)法 【輔助手段】 多媒體教學(xué) 、錄像 【教學(xué)內(nèi)容】 第一節(jié) 必備知識(shí) 一、相關(guān)知識(shí) （ 5 分鐘） 藥物雜質(zhì)來源：一是生產(chǎn)制備中產(chǎn)生，二是貯藏過程中產(chǎn)生。 雜質(zhì)檢查實(shí)質(zhì)：限度實(shí)驗(yàn)。該測試物并不一定要定量測出其準(zhǔn)確值，只是確定其是否超過限度。主要適用于藥物的毒性成分及有害物質(zhì)的檢測。 藥品的有毒雜質(zhì)及有害雜質(zhì)檢查應(yīng)用： 有毒雜質(zhì)檢查：一種新藥或一種新制劑，以及一些毒性較大的藥品和生化制品，在臨床使用前； 有害雜質(zhì)檢查：在生產(chǎn)、貯藏過程中對有害雜質(zhì)作追蹤考察，及時(shí)采 取措施預(yù)防或去除。 二、毒性試驗(yàn) （ 5 分鐘） 毒性試驗(yàn)分為：一般毒性試驗(yàn)和特殊毒性試驗(yàn)。此外，還有依賴性試驗(yàn)、過敏試驗(yàn)和局部刺激試驗(yàn)等。一般毒性試驗(yàn)包括急性毒性試驗(yàn)、長期毒性試驗(yàn)。特殊毒性試驗(yàn)包括致突變試驗(yàn)、致癌試驗(yàn)、致畸試驗(yàn)。 藥品的異常毒性試驗(yàn)：是用穩(wěn)定劑量按指定的操作方法和給藥途徑給予規(guī)定體重的某種動(dòng)物，觀察其急性毒性反應(yīng)。反應(yīng)的判斷以試驗(yàn)動(dòng)物死亡與否為終點(diǎn)，這實(shí)際上是一個(gè)限度試驗(yàn)。在此劑量下，一般供試品不應(yīng)使動(dòng)物中毒致死；如果出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物急性中毒而死亡，則反映該供試品中含有的急性毒性物質(zhì)超過了正常水平 。本試驗(yàn)又稱為異常毒性檢查法 三、藥品異常毒性試驗(yàn)試劑劑量確定方法 （ 30 分鐘） 1．給藥途徑：可根據(jù)藥物的性質(zhì)、使用方法等加以選擇。 2．給藥劑量：可根據(jù)臨床人用劑量乘以一定的安全系數(shù)，然后再折算成小鼠體重的劑量。 安全系數(shù)的確定：一般治療性藥品的安全系數(shù)可定為 50～ 100，長期服用藥品的安全系數(shù)可定為 100 以上。亦可用實(shí)驗(yàn)方法求出： 例：某藥品的劑量為 4ml，當(dāng)劑量為 （以 ％氯化鈉注射液稀釋至），給小鼠靜脈注射時(shí)引起死亡， 減劑量再試，在 ／ 20g 沒有引