【導讀】1．明確藥品生物檢定的概念和任務。3．熟悉實踐操作。2．供試品（固體）溶液的配制。性檢定、升降壓物質(zhì)檢查的原理、方法和注意事項。具備獨立完成藥品檢驗的。驗標準操作規(guī)范進行操作，全面控制藥品質(zhì)量。進行觀察，避免與減少實驗誤差。生物學密切相關(guān)。驗數(shù)據(jù)，誤差原因，進行報告。⑵實踐考核：實踐操作40%，實踐結(jié)果與報告50%，實踐紀律與預習10%。制成的培養(yǎng)基凝固后應透明，不得有沉淀。調(diào)PH宜為一次性，避免反復加酸、堿影響培養(yǎng)基質(zhì)量。制備好的培養(yǎng)基，使用期限為1個月，并貯存在冰箱中。在抗生素效價測定中，裝有培養(yǎng)基和試驗菌的玻璃培養(yǎng)皿稱為雙碟。用100℃水?。ㄎ⒉t）使培養(yǎng)基熔化后，在室溫冷卻至70℃左右，并仔細檢查瓊脂培養(yǎng)基是否熔化均勻，有無凝塊。用大口的滅菌刻度吸管，迅速吸取20ml培養(yǎng)基，注入各個培養(yǎng)皿內(nèi)，培養(yǎng)基上，蓋上干燥陶瓦圓蓋，，待凝固。熱，這樣倒菌層時，培養(yǎng)基易于攤布水平。搖勻菌層培養(yǎng)基時，一定注意不能搖出氣泡。

　　

【正文】 或規(guī)定的函數(shù)（ y）按劑量分組列成方陣表。 （ 2）特異反應剔除和缺項補足。 目的：運用統(tǒng)計方法來驗證實驗結(jié)果是否符合量反應的平行線設計原理，是否偏離了直線性和平行性，以便評價實驗結(jié)果的可靠性。 （ l）可靠性測驗的統(tǒng)計方法 ① 實驗結(jié)果的方差分析 ② 劑間變異的分析 （ 2）可靠性測驗結(jié)果分析 （ 3）可靠性測驗結(jié)果判斷 （ ）法、（ ）法 ： 回歸、劑間應非常顯著（ P＜ ） 、 偏離平行應不顯著（ P＞ ） （ ）法、（ .3 ）法 ： 回歸、劑間應非常顯著（ P＜ ） 、 偏離平行應不顯著（ P＞ ） 、 二次曲線與反向二次曲線均應不顯著（ P＞ ） 四、不同劑型藥品的供試液配制 （ 20分鐘） ⑴注射用凍干 粉末 ⑵水針劑 ⑶片劑 ①素片 ②糖衣片、腸衣片 ⑷膠囊劑 ⑸顆粒劑或干糖漿 ⑹軟膏劑或眼膏劑： 本 節(jié) 小結(jié) ： （ 10 分鐘） 1． 瓊脂擴散法實驗流程 2． 實驗數(shù)據(jù)處理 作 業(yè) 主要 參考 資 料 ⑴《中國藥典》 2020 年版二部 ⑵《中國藥品檢驗標準操作規(guī)范》 2020 年版 ⑶《生物藥物分析》 2020 年版 白秀峰主編 中國醫(yī)藥科技出版社 課后自我 總結(jié)分析 《藥品生物檢定技術(shù)》教案 第 14 次課 ２學時 章 節(jié) 第七章 生物檢定統(tǒng)計法與微機運算 第一節(jié) 必備 知識 第二節(jié) 實踐操作 教學目的 和 要求 1． 熟悉生物檢定統(tǒng)計法的有關(guān)概念。 2．掌握常用的生物檢定統(tǒng)計法。 3．掌握微機運算實踐操作。 教 學 重 點 難 點 【 重點 】 １ ． 常用的生物檢定統(tǒng)計法。 2． 微機運算實踐操作。 【 難點 】 微機運算實踐操作 教 學 過 程 【教學方法】 講授法、提問法、練習法 【輔助手段】 多媒體教學 【教學內(nèi)容】 一、總則 （ 25 分鐘） 生物檢定法是利用藥物對生物體或其離體器官組織等所起的藥理作用來檢定藥物效價的方法。用于無適當 理化方法進行檢定的藥物。凡生物檢定法測定效價的品種必須進行實驗可靠性測驗及可信限計算等。 生物檢定標準品 供試品 等反應劑量對比 控制生物變異必須注意以下幾點： 誤差項 指從實驗結(jié)果的總變異中分去不同劑量及不同因級對變異的影響后，剩余的變異成分，用方差（ S2）表示。對于因?qū)嶒炘O計類型的限制無法分離的變異成分，或估計某種因級對變異的影響小，可不予分離者，都并入 S2。但劑間變異必須分離。 可靠性測驗 （ 1）可靠性測驗目的：通過適當?shù)慕y(tǒng)計方法，驗證實驗結(jié)果是否符合量反應的平行線原理，是否偏離了直線性 和平行性，從而評價實驗的可靠程度。對于偏離不顯著（在一定的概率水平下）的實驗結(jié)果，認為可靠性成立時，方可按有關(guān)公式計算供試品的效價和可信限。 （ 2）可靠性測驗方法：實驗結(jié)果可靠性是以方差分析法測驗的，測驗多組均數(shù)之間的差別是否顯著。在實驗中存在著 S 和 T 的差別，直線及平行線的關(guān)系，劑量與雙碟之間的關(guān)系。通過統(tǒng)計以上各組數(shù)之間方差，以試品間、回歸、偏離平行、劑間（列）、碟間（行）的方差與誤差項（ S2）的比值（稱 F值），來確定各自的差異的顯著性程度。 可信限 可信限（ FL）標志檢定結(jié)果的精密度。 各品種的檢定方法 項下都有其可信限率的規(guī)定 。 對同批供試品重復試驗所得 n 次實驗結(jié)果（包括 FL％超過規(guī)定的結(jié)果），可按實驗結(jié)果的合并計算法算得 PT 的均值及其 FL％作為檢定結(jié)果。 二、生物檢定的常用方法 （ 60 分鐘） 質(zhì)反應的直接測定法、平行線測定法。量反應的平行線測定法。 （一）直接測定法 直接測定法：直接測得藥物對各個動物最小效量或最小致死量的檢定方法。如洋地黃及其制劑的效價測定。 xS和 xT為 S 和 T 組各只動物的對數(shù)最小致死量，它們的均值 xS和 xT為 S和 T 的等反應劑量， ns和 nT為 S 和 T 組的動物數(shù)。 1．效價計算 2．誤差 項及可信限計算 當兩批以上供試品（ T、 U）和標準品同時比較時，按（ 9）式計算 S、 T、U 的合并方差 S2。 效價 PT、 PU 則是 T、 U 分別與 S 比較，按（ 1）～（ 3）式計算。 例 1 直接測定法的微機運算（軟件運用） （二）量反應的平行線測定法 量反應：藥物對生物體所引起的反應隨著藥物劑量的增加產(chǎn)生的量變可以測量者，稱 ~，如血壓、血糖的變化值。 量反應平行線測定法要求：在一定劑量范圍內(nèi)， S 和 T 的對數(shù)劑量 X 和反應或反應的特定函數(shù) Y 呈直線關(guān)系，當 S 和 T 的活性組分基本相同時，兩直線平行。 1．實驗設計類型 （ 1）隨機 設計 （ 2）隨機區(qū)組設計 生物檢定品種的量反應檢定主要有：（ ）法；（ ）法或（ ）法、（ ）法，即 S， T（或 U）各用 2 個劑量組或 3 個劑量組，統(tǒng)稱（ k． k）或（ ）法。一般都是按（ ）法實驗設計。中國藥典平行線測定法的計算都用簡算法。 簡算法要求（ ）法實驗設計必須符合以下條件： （ 1） S 和 T 相鄰高低劑量組的比值（ r）要相等，一般 r 用 1:～ 1:， lgr=I （ 2）各劑量組的反應個數(shù)（ m）應相等。 本 節(jié) 小結(jié) ： （ 5 分鐘） 1． 直接測定法定義 2． 量反應 定義 作 業(yè) 主要 參考 資 料 1．《中國藥典》 2020 年版二部 2．《中國藥品檢驗標準操作規(guī)范》 2020 年版 3．《生物藥物分析》 2020 年版 白秀峰主編 中國醫(yī)藥科技出版社 課后自我 總結(jié)分析 《藥品生物檢定技術(shù)》教案 第 15 次課 ２學時 章 節(jié) 第七章 生物檢定統(tǒng)計法與微機運算 第一節(jié) 必備知識 第二節(jié) 實踐操作 教學目的 和 要求 。 。 。 教 學 重 點 難 點 【 重點 】 。 。 【 難點 】 微機運算實踐操作 教 學 過 程 【教學方法】 講授法、提問法、練習法 【輔助手段】 多媒體教學 【教學內(nèi)容】 2．效價及誤差計算 （ 45 分鐘） 效價及誤差計算處理步驟如下： （ 1）將反應值或規(guī)定的函數(shù)（ y）按劑量分組列成方陣表。 （ 2）特異反應剔除和缺項補足 ①特異反應剔除（隨機區(qū)組設計） ②缺項補足 缺項不得超過反應總個數(shù)的 5％。 練習 1（ ）法隨機區(qū)組設計特異剔除和缺項補足 練習 2（ ）法隨機區(qū)組設計特異剔除和缺項補足 （ 3）方差分析與可靠性測驗。 ①可靠性測驗采用 F 測驗，即實驗結(jié)果的方差分析。 將實驗結(jié)果求得的 F 值與查表 F 值比較 若大于 F（ f1,f2） 的 F 值，則 P＜ ，表示差別有非常顯著意義。 若大于 F（ f1,f2） 的 F 值，則 P＜ ，表示差別有顯著意義。 若小于 F（ f1,f2） 的 F 值，則 P＞ ，表示差別無顯著意義。 ②可靠性測驗結(jié)果判斷 （ ）法、（ ）法：回歸、劑間應非常顯著（ P＜ ）、偏離平行應不顯著（ P＞ ） （ ）法、（ ）法：回歸、劑間應非常顯著（ P＜ ）、偏離平行應不顯著（ P＞ ）、二次曲線與反向二次曲線均應不顯著（ P＞ ） （ 4）進行效價及可信限計算 （ 2． 2）法的微機運算（軟件運用） （三）實驗結(jié)果的合并計算 （ 40 分鐘） 同一批供試品重復 n 次測定，所得 n 個測定結(jié)果，可用合并計算的方法求其效價 PT 的均值及其 FL。 參加合并計算的 n 個結(jié)果應該是： （ 1）各個實驗結(jié)果是獨立的，完整的，是在動物來源、實驗條件相同的情況下，與標準品同時比較所得的檢定結(jié)果 (PT） 。 （ 2）各次檢定結(jié)果，經(jīng)用標示量或估計效價（ AT）校正后，取其對數(shù)值（ lgPT）參加合并計算。 計算時，令 lgPT=M n 次實驗結(jié)果共 n 個 M 值，按（ 35）式進行χ 2測驗 當χ 2 計算小于χ 2（ f） 查表值時，認為 n 個實驗結(jié)果均一，可按（ 37）式、（ 38）式、（ 39）式計算 n 個 M 的加權(quán)均值 M、 SM 及其 FL。 合并計算的自由度（ f ）是 n 個實驗結(jié)果的 S2 自由度之和。 ，按此 f查 t 值表（表一）得 t 值。 PT 及其可信限按（ 40）式、（ 41）式計算： FL％按（ 8）式計算。 當χ 2 計算值大于χ 2（ f） 查表值時，則 n 個實驗結(jié)果不均一，可用以下方法進行合并計算。 （ 1）如為個別實驗結(jié)果影響 n 次實驗結(jié)果的均一性，可以剔除個別結(jié)果，將其余均一的結(jié)果按以上公式進行合并計算。 （ 2）如果 n 次實驗結(jié)果的不均一性并非個別實驗結(jié)果的影響，則按（ 42）式、（ 43）式計算 n 個 M 的不加權(quán)均值 M 及其 SM，再按（ 39）式、（ 40）式、（ 41）式計算 M 的 FL、 PT 及其 FL。如洋地黃及其制劑的效價測定。 實驗結(jié)果合并計算的微機運算（軟件運用） 本 節(jié) 小結(jié) ： （ 5 分鐘） 1． 效價及誤差計算 的 處理步驟 2．可靠性測驗結(jié)果判斷 作 業(yè) 1． 簡算法要求（ ）法實驗設計必須符合的條件 2． 效價及誤差計算 的 處理步驟 3．可靠性測驗結(jié)果判斷 主要 參考 資 料 1．《中國藥典》 2020 年版二部 2．《中國藥品檢驗標準操作規(guī)范》 2020 年版 3．《生物藥物分析》 2020 年版 白秀峰主編 中國醫(yī)藥科技出版社 課后自我 總結(jié)分析 《藥品生物檢定技術(shù)》教案 第 16 次課 ２學時 章 節(jié) 第八章 毒力及異常毒性檢查 第一節(jié) 必備知識 第二 節(jié) 異常毒性檢查法 教學目的 和 要求 1． 熟悉藥品的有害物質(zhì)檢查。 2． 熟悉限度實驗。 3． 熟悉葡萄糖酸銻鈉。 4． 熟悉異常毒性檢查法的概念。 5． 掌握藥品的異常毒性試驗概念。 6． 掌握藥品異常毒性試驗試劑劑量確定方法。 7． 掌握異常毒性檢查法。 8． 掌握 葡萄糖酸銻鈉毒力檢查法。 教 學 重 點 難 點 【 重點 】 １ ． 藥品的異常毒性試驗概念。 2．藥品異常毒性試驗試劑劑量確定方法。 3．異常毒性檢查法及 SOP。 【 難點 】 異常毒性檢查法及 SOP 教 學 過 程 【教學方法】 講授法、提問法、練習法 【輔助手段】 多媒體教學 、錄像 【教學內(nèi)容】 第一節(jié) 必備知識 一、相關(guān)知識 （ 5 分鐘） 藥物雜質(zhì)來源：一是生產(chǎn)制備中產(chǎn)生，二是貯藏過程中產(chǎn)生。 雜質(zhì)檢查實質(zhì)：限度實驗。該測試物并不一定要定量測出其準確值，只是確定其是否超過限度。主要適用于藥物的毒性成分及有害物質(zhì)的檢測。 藥品的有毒雜質(zhì)及有害雜質(zhì)檢查應用： 有毒雜質(zhì)檢查：一種新藥或一種新制劑，以及一些毒性較大的藥品和生化制品，在臨床使用前； 有害雜質(zhì)檢查：在生產(chǎn)、貯藏過程中對有害雜質(zhì)作追蹤考察，及時采 取措施預防或去除。 二、毒性試驗 （ 5 分鐘） 毒性試驗分為：一般毒性試驗和特殊毒性試驗。此外，還有依賴性試驗、過敏試驗和局部刺激試驗等。一般毒性試驗包括急性毒性試驗、長期毒性試驗。特殊毒性試驗包括致突變試驗、致癌試驗、致畸試驗。 藥品的異常毒性試驗：是用穩(wěn)定劑量按指定的操作方法和給藥途徑給予規(guī)定體重的某種動物，觀察其急性毒性反應。反應的判斷以試驗動物死亡與否為終點，這實際上是一個限度試驗。在此劑量下，一般供試品不應使動物中毒致死；如果出現(xiàn)實驗動物急性中毒而死亡，則反映該供試品中含有的急性毒性物質(zhì)超過了正常水平 。本試驗又稱為異常毒性檢查法 三、藥品異常毒性試驗試劑劑量確定方法 （ 30 分鐘） 1．給藥途徑：可根據(jù)藥物的性質(zhì)、使用方法等加以選擇。 2．給藥劑量：可根據(jù)臨床人用劑量乘以一定的安全系數(shù)，然后再折算成小鼠體重的劑量。 安全系數(shù)的確定：一般治療性藥品的安全系數(shù)可定為 50～ 100，長期服用藥品的安全系數(shù)可定為 100 以上。亦可用實驗方法求出： 例：某藥品的劑量為 4ml，當劑量為 （以 ％氯化鈉注射液稀釋至），給小鼠靜脈注射時引起死亡， 減劑量再試，在 ／ 20g 沒有引