【正文】 type）：四種基因型，兩種與親代相同，兩種與親代不同，有一半發(fā)生了重組。 包括（ 3），（ 4），（ 7） 。 考慮兩對基因間是否發(fā)生了重組，用于計算兩對基因間的重組 ? 判斷 nic和 ade是獨立分配還是連鎖： 若獨立分配，則 PD：NPD=1或 ≈1 若連鎖，則 PD： NPD ﹥ 1 實際上： PD： NPD﹥﹥ 1，所以兩基因連鎖。 ? 計算著絲粒和兩基因間的 RF： RF（ 0nic)=(MⅡ 1/2) / (MⅠ +MⅡ ) 100%=1/2 (5+90+1+5)/1000 100%=%。 O nic圖距 = RF（ 0ade)=(MⅡ 1/2) / (MⅠ +MⅡ ) 100%=1/2 (90+90+1+5)/1000 100%=%。 O ade圖距 = 判定兩基因在染色體的同臂還是異臂上： +/nic +/ade 子囊數(shù) M1 M1 M2 M2 M1 M2 M1 M2 809 90 5 96 1000 經(jīng)分析，證明nic、 ade在著絲粒同一側(cè)。 為什么 RF（ 0nic)+ RF（ nicade) ≠ RF （ 0ade)? ? 在求 ade與著絲粒的重組值時，是把所有 M2的子囊相加除以 2倍的總子囊數(shù)，這樣把少量的在 ade— 著絲粒間起過交換的子囊遺漏了。例如子囊型 4，對于 +/ ade來講是屬于 M1，但我們決定了基因順序后，得知這些子囊中發(fā)生了雙交換，可是在計算 ade— 著絲粒重組值時，卻沒有把這兩次單交換計算在內(nèi)，因而使 ade— 著絲粒重組值的估計偏低。 ? nic— ade間重組值 : ? 因為 T型四分子中只有1/2重組產(chǎn)物， NPD型四分子中， 4個孢子對全部都是重組基因型，所以我們計算 nic— ade間重組值可用公式： nic— ade間重組值 =（ 1/2T+NPD）/T+NPD+PD =1/2（ 90+5+5） +（ 1+1） /1000 =% ?3個基因座位的遺傳圖如下： 已算出的 ade與著絲粒的重組值 9 .3% ， 但實際 5 . 2+5 .05=10 .25。 為什么 ? 四、染色單體干涉（ chromatid interference） 一對同源染色體 4條染色單體參與多線交換機會的非隨機性。 ? 染色體上第一個交換的發(fā)生固定后，第二個交換發(fā)生在任意兩非姊妹染色單體間的 4種可能性。如第二個交換發(fā)生在任意兩個非姊妹染色單體間的機會是相等的。 那么二線雙交換 ∶ 三線雙交換 ∶ 四線雙交換之比應該是1∶ 2∶ 1。（ 隨機的） 染色單體干擾 : ? 如果跟上面的比例有偏差，我們認為有染色單體干擾。即在兩非姊妹染色單體間發(fā)生一個交換后，會影響到相同的兩染色單體間發(fā)生第二次交換的概率，造成第二個交換發(fā)生在任意兩非姊妹染色單體間不是隨機的，這種現(xiàn)象稱為染色單體干擾。 第三節(jié) 人類基因組的染色體作圖 ? 人類的家庭成員少，世代長，又不能按計劃進行婚配，所以人類基因定位難度較大。 ? 人類基因組制圖的艱巨工作始于 1936年。開始應用傳統(tǒng)的家系分析方法進展緩慢，到 1969年為止，能確定的連鎖群數(shù)目只有 7個。 ? 70年代以來，新技術(shù)的應用，才使得這項工作有了新的進展，這些新技術(shù)包括體細胞雜交法、原位雜交法、限制性內(nèi)切酶法等，用得最多的方法還是體細胞雜交法。 ? 基因定位法包括 ： ? （ 1）基因所在的染色體 （ 2）染色體圖距。 人類基因組計劃（ human genome project, HGP） 提出的原因： 19912022， 30億。 ? 70%單拷貝，只有 10%轉(zhuǎn)錄為 mRNA，約24萬個基因 ? 30%重復序列。 一、人類基因定位方法 ?（一）家系分析法：通過分析、統(tǒng)計家系中有關(guān)性狀的連鎖情況和重組率進行基因定位的方法。 只出現(xiàn)在男性：基因定位在 Y染色體上 X連鎖基因的定位 根據(jù)伴性遺傳特點 ： 母親的基因型是否為雙雜合體 ，而母親的 X染色體上的基因組成，可以由外祖父（母親的父親）的表型得知。 1)若 X染色體沒有重組交換，則兒子中的 X染色體只有 2種類型 （ 2）若母親的 X染色體的 2個基因間發(fā)生了交換 (二 )體細胞雜交定位法 ? １克隆分布板法 ? 1) 人鼠細胞融合培養(yǎng) ? 2) 雜種細胞篩選 ? 3) 各種雜種細胞系 ? 4) 生化分析和細胞學觀察 ? 5) 觀察 ,比較分析、定位 保留的人體染色體號數(shù) 1 2 3 4 5 6 7 8 雜種細胞克隆 A B C + + + + + + + + + + + + 表 311 克隆分布法基因定位 人類染色體鑒別 ： ? 應用熒光染色法和其他特殊的染色技術(shù)，可使染色體縱長上呈現(xiàn)各種不同的分帶（ bands）。這些分帶的位置、寬狹和濃淡等隨染色體號碼的不同而不同。但就某一種分帶技術(shù)來說，每一染色體的分帶模式（ banding pattern）是高度專一和穩(wěn)定的。因而可用于人類染色體識別，追循染色體丟失過程 。 ? 基因定位 ? （ 1）定位測定：利用營養(yǎng)缺陷型或某些抗性的標記基因，在一系列獨立獲得的雜種中，保留帶有相應野生型標記基因的染色體，將基因定位在特定的染色體上。 ? （ 2）同線測定：利用人體染色體和標記基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物是否同時存在于雜種細胞來定位基因。如果兩個基因產(chǎn)物和某一條染色體有平行關(guān)系，表明它們具有同線性而應是在同一染色體上。（克隆分布板定位法） ? （ 3）區(qū)域定位：應用一系列有染色體重組的特殊克隆重把特定基因定位到染色體上的某一區(qū)域。如用染色體易位，缺失作圖。 人－鼠雜種細胞株編碼 人類 染色體號碼 A B C D E F G 1 + － － － + － － 2 － － + － － － + 3 + － + － － + － 4 － + － － － + － 5 － － － + － － + 人類基因編碼的酶 葡萄糖磷酸變位酶－1 + － － － + － － 異檸檬酸脫氫酶 － － + － － － + 肽酶 C + － － － + － － 蘋果酸氧化還原酶 － － + － － － + 磷酸葡糖酸脫氫酶 + － － － + － － 核苷磷酸化酶 － － － － － － － （三）基因劑量效應法 ? 如果某一個基因產(chǎn)物的數(shù)量與某染色體上某一片段拷貝數(shù)有明顯的比例變化關(guān)系，則可將該基因定位在這已染色體上或染色體的某一特定區(qū)段上。 （四） DNA介導的基因定位 采用已克隆基因的 cDNA探針與保留在雜種細胞內(nèi)的人染色體 DNA順序進行分子雜交，來確定克隆基因所在的染色體。 以標記的探針直接同中期染色體進行原位雜交。