核酸和核苷酸ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-04 02:31本頁(yè)面
【正文】 物化因素 (熱、酸、堿 作用下 )， DNA分子內(nèi)的氫鍵斷裂， 雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi) ，發(fā)生變性。 ?RNA僅局部呈雙螺旋結(jié)構(gòu)，其螺旋形結(jié)構(gòu)向線團(tuán)形結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化不如 DNA明顯。 ?核酸降解、變性時(shí)，其對(duì)紫外吸收增加，這種現(xiàn)象稱為增色效應(yīng) ?變性 DNA在適當(dāng)條件下 (如緩慢冷卻 )可使兩條分開(kāi)的鏈重新締合成雙螺旋結(jié)構(gòu)，這過(guò)程叫復(fù)性。復(fù)性過(guò)程產(chǎn)生減色效應(yīng) 變性與復(fù)性 上頁(yè) 下頁(yè) 章首 節(jié)首 七 .核酸的分離提取和純化 ? DNA的分離 ? RNA的分離 ? 核酸含量測(cè)定： 定磷法 紫外線吸收法 定糖法 ? 核酸的純化及其要求 上頁(yè) 下頁(yè) 章首 ? 核蛋白的提?。赫婧思?xì)胞中 DNA常和組蛋白結(jié)合以核蛋白形式存在 ， 把真核細(xì)胞搗碎后加入%NaCl和 ， 使 DNA蛋白質(zhì)沉淀 ， 而檸檬酸鈉是起抑制 DNA的降解作用 。 ? 核酸與蛋白質(zhì)的分離：利用核蛋白溶于 1mol /L NaCl的性質(zhì) ， 將其從細(xì)胞勻漿中分離出來(lái) ， 用飽和苯酚等溶劑與上述核蛋白共振 ， 冰凍離心 。 DNA溶于上層水相中 ， 變性蛋白留在酚層內(nèi) 。 在水相加入 ， 將其沉淀出來(lái) ，再以核酸酶水解以除去 RNA。 最后借助密度梯度平衡超速離心法或?qū)游鲋?， 分離 DNA。 DNA的分離 上頁(yè) 下頁(yè) 章首 節(jié)首 DNA的精制：制得的 DNA中還含少量蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，將它溶解在蒸餾水中，加入陰離子去污劑硫酸十二酯鈉進(jìn)一步作用于 DNA和蛋白，使蛋白質(zhì)與核酸分離而沉淀，通過(guò)高速離心去掉蛋白質(zhì)，在上層 DNA溶液加入 95%乙醇沉淀 DNA，經(jīng)過(guò)乙醇重復(fù)洗幾次，可得 DNA精制品。 上頁(yè) 下頁(yè) 章首 節(jié)首 ? 核蛋白的提?。簩⒓?xì)胞破碎制成勻漿，再用 /L NaCl溶液將細(xì)胞質(zhì)的核糖核蛋白體抽提出來(lái)，留下含 DNA的細(xì)胞核組織，核糖核蛋白可在 。 ? 核酸和蛋白質(zhì)的分離：含水的酚能沉淀蛋白質(zhì)，核酸和多糖則溶于水層。水層中的RNA和多糖可被乙醇沉淀，將沉淀再溶于磷酸鹽緩沖液，然后用 ?甲氧乙醇抽提 RNA，用乙醇沉淀得 RNA。 RNA的分離 上頁(yè) 下頁(yè) 章首 節(jié)首 RNA的精制： 在粗制的 RNA中加入磷酸鹽，醋酸鹽，乙二醇甲醚并攪拌，使多糖類物質(zhì)溶于水里， RNA溶于乙二醇甲醚內(nèi)，靜置分層。從上層乙二醇甲醚取出加醋酸鈉，用十六烷基三甲基溴化胺鹽使 RNA 沉淀，經(jīng)離心分離得 RNA。 上頁(yè) 下頁(yè) 章首 節(jié)首 ? 將試劑用濃硫酸或過(guò)氯酸消化，使核酸磷轉(zhuǎn)化成為無(wú)機(jī)磷酸。磷酸能與鉬酸銨反應(yīng)生成磷鉬酸銨，它在還原劑存在下，可被還原生成鉬藍(lán)，再通過(guò)測(cè)定無(wú)機(jī)磷酸測(cè)定核酸。 ? 通常 RNA平均含磷 %,而 DNA含磷 % 。這樣可從含磷量推算出核酸的含磷量。 定磷法 上頁(yè) 下頁(yè) 章首 節(jié)首 ? 利用核酸組分嘌呤環(huán)、嘧啶環(huán)具有紫外吸收的特性，在 260nm下，每 ml含 1181。g DNA的消光值 ()為 ，每 ml含 1ug RNA的消光值為 ，由未知溶液的消光值可計(jì)算出其中核酸含量。 紫外線吸收法 上頁(yè) 下頁(yè) 章首 節(jié)首 ? RNA與濃硫酸共熱會(huì)降解，生成的核糖進(jìn)而轉(zhuǎn)化為糖糠，它與地衣酚在 CuCl2或 FeCl3催化下反應(yīng)呈鮮綠色，在 670nm處呈現(xiàn)最大光吸收。 ? DNA經(jīng)加熱酸解后，水解所得的脫氧核糖轉(zhuǎn)變?yōu)?ω 羥 γ 酮戊醛，再與二苯胺生成藍(lán)色物質(zhì)。在 595nm處呈現(xiàn)最大光吸收。 ? RNA和 DNA在 20~200181。g/ml濃度時(shí)，光密度與核酸的濃度呈正比。 定糖法 上頁(yè) 下頁(yè) 章首 節(jié)首 上清液酸溶物質(zhì)(核苷 酸,寡 核苷酸)上清液脂溶性含磷物質(zhì)上清液上清液純 RNA沉渣純 DNA沉渣純 D N A ,R N A沉渣D N A ,R N A沉渣核酸制劑?為保持核酸的生物活性，分離、分析必須在溫和條件下進(jìn)行，防止過(guò)酸 、過(guò)堿、 強(qiáng)烈攪拌。 上頁(yè) 章首 節(jié)首
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