核酸和核苷酸ppt課件-資料下載頁
2025-05-04 02:31本頁面
【正文】 物化因素 (熱、酸、堿 作用下 )， DNA分子內的氫鍵斷裂， 雙螺旋結構解開 ，發(fā)生變性。 ?RNA僅局部呈雙螺旋結構，其螺旋形結構向線團形結構轉化不如 DNA明顯。 ?核酸降解、變性時，其對紫外吸收增加，這種現(xiàn)象稱為增色效應 ?變性 DNA在適當條件下 (如緩慢冷卻 )可使兩條分開的鏈重新締合成雙螺旋結構，這過程叫復性。復性過程產生減色效應 變性與復性 上頁 下頁 章首 節(jié)首 七 .核酸的分離提取和純化 ? DNA的分離 ? RNA的分離 ? 核酸含量測定： 定磷法 紫外線吸收法 定糖法 ? 核酸的純化及其要求 上頁 下頁 章首 ? 核蛋白的提取：真核細胞中 DNA常和組蛋白結合以核蛋白形式存在 ， 把真核細胞搗碎后加入%NaCl和 ， 使 DNA蛋白質沉淀 ， 而檸檬酸鈉是起抑制 DNA的降解作用 。 ? 核酸與蛋白質的分離：利用核蛋白溶于 1mol /L NaCl的性質 ， 將其從細胞勻漿中分離出來 ， 用飽和苯酚等溶劑與上述核蛋白共振 ， 冰凍離心 。 DNA溶于上層水相中 ， 變性蛋白留在酚層內 。 在水相加入 ， 將其沉淀出來 ，再以核酸酶水解以除去 RNA。 最后借助密度梯度平衡超速離心法或層析柱法 ， 分離 DNA。 DNA的分離 上頁 下頁 章首 節(jié)首 DNA的精制：制得的 DNA中還含少量蛋白質等雜質，將它溶解在蒸餾水中，加入陰離子去污劑硫酸十二酯鈉進一步作用于 DNA和蛋白，使蛋白質與核酸分離而沉淀，通過高速離心去掉蛋白質，在上層 DNA溶液加入 95%乙醇沉淀 DNA，經過乙醇重復洗幾次，可得 DNA精制品。 上頁 下頁 章首 節(jié)首 ? 核蛋白的提?。簩⒓毎扑橹瞥蓜驖{，再用 /L NaCl溶液將細胞質的核糖核蛋白體抽提出來，留下含 DNA的細胞核組織，核糖核蛋白可在 。 ? 核酸和蛋白質的分離：含水的酚能沉淀蛋白質，核酸和多糖則溶于水層。水層中的RNA和多糖可被乙醇沉淀，將沉淀再溶于磷酸鹽緩沖液，然后用 ?甲氧乙醇抽提 RNA，用乙醇沉淀得 RNA。 RNA的分離 上頁 下頁 章首 節(jié)首 RNA的精制： 在粗制的 RNA中加入磷酸鹽，醋酸鹽，乙二醇甲醚并攪拌，使多糖類物質溶于水里， RNA溶于乙二醇甲醚內，靜置分層。從上層乙二醇甲醚取出加醋酸鈉，用十六烷基三甲基溴化胺鹽使 RNA 沉淀，經離心分離得 RNA。 上頁 下頁 章首 節(jié)首 ? 將試劑用濃硫酸或過氯酸消化，使核酸磷轉化成為無機磷酸。磷酸能與鉬酸銨反應生成磷鉬酸銨，它在還原劑存在下，可被還原生成鉬藍，再通過測定無機磷酸測定核酸。 ? 通常 RNA平均含磷 %,而 DNA含磷 % 。這樣可從含磷量推算出核酸的含磷量。 定磷法 上頁 下頁 章首 節(jié)首 ? 利用核酸組分嘌呤環(huán)、嘧啶環(huán)具有紫外吸收的特性，在 260nm下，每 ml含 1181。g DNA的消光值 ()為 ，每 ml含 1ug RNA的消光值為 ，由未知溶液的消光值可計算出其中核酸含量。 紫外線吸收法 上頁 下頁 章首 節(jié)首 ? RNA與濃硫酸共熱會降解，生成的核糖進而轉化為糖糠，它與地衣酚在 CuCl2或 FeCl3催化下反應呈鮮綠色，在 670nm處呈現(xiàn)最大光吸收。 ? DNA經加熱酸解后，水解所得的脫氧核糖轉變?yōu)?ω 羥 γ 酮戊醛，再與二苯胺生成藍色物質。在 595nm處呈現(xiàn)最大光吸收。 ? RNA和 DNA在 20~200181。g/ml濃度時，光密度與核酸的濃度呈正比。 定糖法 上頁 下頁 章首 節(jié)首 上清液酸溶物質(核苷 酸,寡 核苷酸)上清液脂溶性含磷物質上清液上清液純 RNA沉渣純 DNA沉渣純 D N A ,R N A沉渣D N A ,R N A沉渣核酸制劑?為保持核酸的生物活性，分離、分析必須在溫和條件下進行，防止過酸 、過堿、 強烈攪拌。 上頁 章首 節(jié)首
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