【正文】 競爭地與固相抗體結(jié)合，經(jīng)過洗滌分離，最后結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原與待測(cè)抗原含量呈負(fù)相關(guān)。見圖 189 E E E 酶標(biāo)抗原待測(cè)抗原 E 底物 E 顯色反應(yīng) 固相 抗體 E E E 酶標(biāo)抗原 底物 顯色反應(yīng) E E E E E E 圖 競爭法測(cè)抗原示意圖 固相抗體 190 補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn) 一、原理 CFT是根據(jù)任何抗原抗體復(fù)合物可激活、固定補(bǔ)體的特性，用一定量的補(bǔ)體與致敏紅細(xì)胞來檢測(cè)抗原、抗體間有無特異性結(jié)合的一類實(shí)驗(yàn)。 參與本實(shí)驗(yàn)的成分包括 ①已知抗原（或抗體） ②待檢抗體（或抗原） ③ SRBC ④ SRBC相應(yīng)的溶血素 ⑤補(bǔ)體 191 （ Ag+Ab） +補(bǔ)體 雙方不相對(duì)應(yīng)（或缺少一方）形不成 IC 不能激活并固定補(bǔ)體 加入 SRBC和溶血素 出現(xiàn)溶血 雙方相對(duì)應(yīng)形成 IC 激活并固定補(bǔ)體 加入 SRBC和溶血素 不出現(xiàn)溶血 補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn) 192 中和試驗(yàn) 原理：特異的抗病毒免疫血清（中和抗體）和病毒作用后，使病毒失去感染易感動(dòng)物、雞胚、細(xì)胞的能力。 一種病毒只能被相應(yīng)的免疫血清所中和。 193 中和試驗(yàn)的應(yīng)用 ? 病毒株的種型鑒定 ? 測(cè)定血清抗體效價(jià) ? 分析病毒的抗原性 194 根據(jù)稀釋成分不同可分為： ? 固定病毒用量與等量一系列倍比稀釋的血清進(jìn)行中和試驗(yàn)，以血清中和抗體滴度表示；（血清中和試驗(yàn)） ? 固定血清用量與等量一系列對(duì)數(shù)稀釋的病毒進(jìn)行中和試驗(yàn)，以中和指數(shù)表示。（病毒中和試驗(yàn)） 195 例 1 NDV 9～ 11d雞胚 24～ 48h 雞胚死亡 NDV+抗血清 9～ 11d雞胚 雞胚不死亡 196 例 2 口蹄疫病毒 (FMDV) 4～ 7d乳鼠 乳鼠死亡 FMDV+抗血清 4～ 7d乳鼠 乳鼠不死亡 197 變態(tài)反應(yīng)法 ? 某些疫病在傳染過程中引起以細(xì)胞免疫為主的 Ⅳ 型變態(tài)反應(yīng)，這種變態(tài)反應(yīng)是由病原體或代謝產(chǎn)物在傳染過程中作為變應(yīng)原而引起，具有很高的特異性和敏感性。 198 ? 因此，常用變態(tài)反應(yīng)進(jìn)行動(dòng)物疫病的檢疫，例如細(xì)菌性疫病中的 結(jié)核病 、 鼻疽 、布魯氏菌病 ，病毒性疫病中的 皰疹病毒病 ，真菌性疫病中的 流行性淋巴管炎 ，寄生蟲病中的 日本血吸蟲病 等。 199 六、動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)的現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù) ? 單克隆抗體技術(shù) ? 核酸探針技術(shù) ? PCR技術(shù) ? 免疫印跡技術(shù) ? 限制性核酸內(nèi)切酶圖譜分析 ? 核酸序列分析 ? 限制性核酸片段多態(tài)性分析 200 A、單克隆抗體技術(shù) ? 一個(gè)病原體存在著許多性質(zhì)不同的抗原，在同一抗原上，有可能存在許多性質(zhì)不同的屬、種、群、型特異性抗原，采用雜交瘤技術(shù)，可以識(shí)別不同抗原或抗原決定簇的單抗，從而可以對(duì)感染性疾病和寄生蟲病進(jìn)行快速準(zhǔn)確的診斷，同時(shí)，可用于調(diào)查疫病流行情況、流行毒株或蟲體的分離鑒定，為疫病的診斷和防制提供資料。 201 免疫動(dòng)物 培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞 收集致敏的 B淋巴細(xì)胞 收集骨髓瘤細(xì)胞 細(xì)胞融合 HAT選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞 檢測(cè)篩選陽性細(xì)胞 克隆化培養(yǎng)（反復(fù) 35次） 獲得穩(wěn)定分泌 McAb的雜交瘤細(xì)胞株 McAb的制備（雜交瘤培養(yǎng)上清或誘生腹水） McAb 純化及鑒定 單克隆抗體技術(shù) 202 B、 PCR技術(shù) ? 即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，其原理是在模板 DNA、引物和四種脫氧單核苷酸存在的條件下，依賴于耐高溫的 DNA聚合酶的酶促合成反應(yīng)。 ? PCR以欲擴(kuò)增的 DNA作為模板，以與模板正鏈和負(fù)鏈末端互補(bǔ)的兩種寡核苷酸作為引物，經(jīng)過模板 DNA變性、模板引物特異性結(jié)合，并在 DNA聚合酶作用下發(fā)生引物鏈延伸反應(yīng)來合成新的模板 DNA。 203 ? 模板 DNA變性、引物結(jié)合（退火）、引物延伸合成 DNA這三步構(gòu)成一個(gè) PCR循環(huán)。每一循環(huán)的 DNA產(chǎn)物經(jīng)變性又成為下一個(gè)循環(huán)的模板 DNA。 204 PCR原理示意圖 205 PCR產(chǎn)物凝膠電泳檢測(cè) 206 （ 1）快速檢測(cè)病毒性疫病的病原 ? 用 PCR技術(shù)檢測(cè)的動(dòng)物病毒性疫病的病原有藍(lán)舌病毒、口蹄疫病毒、牛病毒性腹瀉病毒、牛白血病病毒、馬鼻肺炎病毒、惡性卡他熱病毒、偽狂犬病病毒、狂犬病病毒、非洲豬瘟病毒、雞傳染性支氣管炎病毒、雞傳染性喉氣管炎病毒、馬傳染性肺炎病毒、馬立克氏病毒、牛冠狀病毒、輪狀病毒、水貂阿留申病病毒、山羊關(guān)節(jié)炎 腦炎病毒、梅迪 /維斯納病毒、豬細(xì)小病毒、魚傳染性造血器官壞死病病毒等。 207 （ 2）快速檢測(cè)其他疫病病原體 ? 致病性大腸桿菌毒素基因、牛胎兒彎曲桿菌、牛分支桿菌、炭疽桿菌芽孢、鉤端螺旋體、牛巴貝斯蟲和弓形蟲等。 208 C、免疫印跡技術(shù) ? 免疫印跡或免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)（ immunoblotting或Western blot）是在 Southern（ 1975）創(chuàng)建的DNA印跡術(shù)（ Southern blotting）基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新型免疫生化技術(shù)。 209 ? 其原理是應(yīng)用十二烷基磺酸鈉 聚丙烯酰胺凝膠電泳（ SDSPAGE）將蛋白質(zhì)樣品分離后，通過轉(zhuǎn)移電泳或直接印漬方式原位轉(zhuǎn)印至固相介質(zhì)上，并保持其原有的物質(zhì)類型和生物學(xué)活性不變，然后應(yīng)用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行特異性檢測(cè)。 ? 由于此項(xiàng)技術(shù)具有 SDSPAGE的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高度特異性和敏感性，方法簡便易行，標(biāo)本可以長期保存和便于比較等優(yōu)點(diǎn)。 210 ? 用免疫印跡技術(shù)可定性、定量地檢測(cè)出待檢樣品中含量很低的特定病原體的抗原成分。 ? 對(duì)于一些能感染細(xì)胞而細(xì)胞病變不易觀察的病原體的檢測(cè)也很有用。 211 212 213 七、動(dòng)物檢疫處理方法 （一）檢疫處理原則 ? 除害 。通過物理、化學(xué)和其他方法殺滅有害生物，包括熏蒸、消毒、高溫、低溫輻照等方式處理。 ? 撲滅 。對(duì)檢疫不合格的動(dòng)物，依照法規(guī)，用不放血的方式宰殺，消滅傳染源。 ? 銷毀 。以化學(xué)處理、焚燒、深埋或其他有效方法，徹底消滅病原體及其載體。 214 ? 退回 。對(duì)尚未卸離運(yùn)輸工具的不合格檢疫動(dòng)物、產(chǎn)品，可用原運(yùn)輸工具退回輸出國；對(duì)已卸離運(yùn)輸工具的不合格檢疫物，在不擴(kuò)大傳染的前提下，由原進(jìn)出口岸檢疫機(jī)構(gòu)監(jiān)督退回輸出國。 ? 截留 。對(duì)旅客攜帶的檢疫物，經(jīng)現(xiàn)場檢疫認(rèn)為需要除害或銷毀的，簽發(fā) 《 出入境人員攜帶物留驗(yàn) /處理憑證 》 。 ? 封存 。對(duì)需要進(jìn)行檢疫處理的檢疫物，應(yīng)及時(shí)予以封存，防止疫情擴(kuò)散。 215 （二）入境動(dòng)物檢疫處理 現(xiàn)場檢疫處理 （ 1）對(duì)死亡的動(dòng)物應(yīng)及時(shí)移送指定地點(diǎn)做病理解剖檢驗(yàn)，并采樣送實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，死亡動(dòng)物尸體轉(zhuǎn)運(yùn)到指定地點(diǎn)進(jìn)行無害化處理并出具證明進(jìn)行索賠或其他處理。 （ 2）對(duì)有臨床癥狀的動(dòng)物，若超過半數(shù)動(dòng)物死亡，則禁止卸離運(yùn)輸工具，全群退回并上報(bào)國家出入境檢驗(yàn)檢疫局。 216 （ 3）動(dòng)物鋪墊材料、剩余飼料和排泄物等，由貨主及其代理人在檢疫人員的監(jiān)督下，做除害處理，如熏蒸、消毒、高溫處理等。 （ 4）對(duì)入境動(dòng)物做群體臨診觀察，發(fā)現(xiàn)疑似感染傳染病動(dòng)物時(shí)，在貨主或者押運(yùn)人員的配合下查明情況，立即處理。 217 隔離檢疫和實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)的檢疫處理 （ 1）發(fā)現(xiàn)入境動(dòng)物有一類傳染病、寄生蟲病，按規(guī)定做全群退回或全群撲殺、銷毀處理。 （ 2）發(fā)現(xiàn)二類傳染病或寄生蟲病，對(duì)患病動(dòng)物做退回或撲殺、銷毀處理，同群其他動(dòng)物放行至指定地點(diǎn)繼續(xù)觀察，由當(dāng)?shù)貦z驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu)或獸醫(yī)部門負(fù)責(zé)監(jiān)管。 （ 3）對(duì)經(jīng)檢疫合格的入境動(dòng)物，由口岸檢疫檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)在隔離期滿之日簽發(fā)有關(guān)單證（入境貨物檢疫檢驗(yàn)證明）予以放行。 218 （ 4）檢出的規(guī)定檢疫項(xiàng)目以外的、對(duì)畜牧業(yè)有嚴(yán)重危害的其他傳染病或寄生蟲病的動(dòng)物，由國家質(zhì)檢總局根據(jù)其危害程度做出檢疫處理決定。 （ 5）對(duì)旅客攜帶的伴侶動(dòng)物，不能交驗(yàn)輸出國（或地區(qū)）官方出具的檢疫證書和狂犬病免疫證書或超出規(guī)定限量的，做暫時(shí)扣留處理。 219 （三）出境動(dòng)物檢疫處理 ? 根據(jù)輸入國的檢疫衛(wèi)生要求或雙邊議定書或貿(mào)易合同中的檢疫要求，經(jīng)檢疫檢驗(yàn)不合格的動(dòng)物不準(zhǔn)出境，根據(jù)具體情況做出退回原產(chǎn)地或者撲殺銷毀處理，發(fā)現(xiàn)重大疫情要及時(shí)上報(bào)國家質(zhì)檢總局并向當(dāng)?shù)丶霸a(chǎn)地畜牧獸醫(yī)部門通報(bào)，及時(shí)采取措施，撲滅疫情。 220 （四）國內(nèi)動(dòng)物檢疫的處理 合格動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品的處理方法 ? 經(jīng)檢疫確定無檢疫對(duì)象的動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品屬于合格的動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品，由動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)出具檢疫證明，動(dòng)物產(chǎn)品同時(shí)加蓋驗(yàn)訖標(biāo)志。 221 1）合格動(dòng)物 A、縣境內(nèi)交易遷移的動(dòng)物，出具 《 動(dòng)物產(chǎn)地檢疫合格證明 》 。 B、運(yùn)出縣境的動(dòng)物，出具 《 出縣境動(dòng)物檢疫合格證明 》 。 222 2）合格動(dòng)物產(chǎn)品 A、縣境內(nèi)交易遷移的動(dòng)物產(chǎn)品，出具 《 動(dòng)物產(chǎn)品檢疫合格證明 》 。 B、運(yùn)出縣境的動(dòng)物產(chǎn)品，出具 《 出縣境動(dòng)物產(chǎn)品檢疫合格證明 》 。 C、驗(yàn)訖標(biāo)志。剝皮肉類（如馬肉、牛肉、羊肉、豬肉等），在其胴體或分割體上加蓋方形針碼檢疫印章；帶皮肉類，加蓋滾筒式驗(yàn)訖印章；白條禽（雞、鴨、鵝）和剝皮兔等，在其后腿（肢）上部加蓋圓形針碼檢疫印章。 223 不合格動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品的處理方法 ? 經(jīng)檢疫確定患有檢疫對(duì)象的動(dòng)物、疑似動(dòng)物及染疫動(dòng)物產(chǎn)品為不合格動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品，應(yīng)做防疫消毒和其他無害化處理； ? 無法做無害化處理的，應(yīng)予以銷毀。 224 ? 若發(fā)現(xiàn)動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品未按規(guī)定進(jìn)行免疫、檢疫或檢疫證明過期的，應(yīng)進(jìn)行補(bǔ)注、補(bǔ)檢或重檢。 （ 1）補(bǔ)注：對(duì)未按規(guī)定預(yù)防接種或已接種但超過免疫有效期的動(dòng)物進(jìn)行的預(yù)防接種。 （ 2）補(bǔ)檢：對(duì)未經(jīng)檢疫進(jìn)入流通的動(dòng)物及其產(chǎn)品進(jìn)行的檢疫。 （ 3）重檢：動(dòng)物及其產(chǎn)品的檢疫證明過期或在有效期內(nèi)有異常情況出現(xiàn)時(shí)，可重新檢疫。 225 ? 經(jīng)檢疫的陽性動(dòng)物加施圓形針碼免疫、檢疫印章，如結(jié)核病陽性牛，在其左肩胛部加蓋此章；布氏桿菌病陽性牛，在其右肩胛部加蓋此章。 ? 不合格動(dòng)物產(chǎn)品可在胴體上加蓋銷毀、化制或高溫標(biāo)志，并做無害化處理，臟器也要按規(guī)定做無害化處理。 226 各類動(dòng)物疫病的檢疫處理 （ 1）一類動(dòng)物疫病的處理 ? 當(dāng)?shù)乜h級(jí)以上地方人民政府畜牧獸醫(yī)行政管理部門（畜牧局）應(yīng)立即派人到現(xiàn)場，劃定疫點(diǎn)、