動物細(xì)胞工程教學(xué)ppt課件-資料下載頁
2025-04-13 23:39本頁面
【正文】 。 精子預(yù)處理 精子活力的提高 在 IVF中，可以通過加入一些化學(xué)物質(zhì)來刺激精子，使其活力提高。 （ 1）咖啡因 通過抑制磷酸二酯酶而導(dǎo)致 cAMP積累，可提高體外受精率，提高頂體反應(yīng)。 （ 2） PHE 是青霉胺、亞?；撬岷湍I上腺素的混合物。 （ 3）肝素 肝素能引起鈣離子進(jìn)入精子細(xì)胞而導(dǎo)致精子獲能，通常與咖啡因一起用于牛精子的體外獲能和受精，但對豬精子獲能具有抑制作用。 （ 4） 2— 氯腺苷（ 2CLA）和 2— 脫氧腺苷 (2DXA) 可刺激 cAMP的產(chǎn)量而提高精子活力。 （ 5）血小板激活因子（ PAF） 與排卵時卵泡破裂 有關(guān)。 （ 6）谷胱甘肽（ GSH） （ 7）鈣離子載體 能直接誘發(fā)鈣離子進(jìn)入精子細(xì)胞內(nèi)部，提高細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度，導(dǎo)致精子獲能。 （ 8） BSA 可除去精子質(zhì)膜中的部分膽固醇，降低膽固醇在精子質(zhì)膜中的比例，改變精子質(zhì)膜的穩(wěn)定性，導(dǎo)致精子獲能。 精卵相互作用 1）透明帶反應(yīng) 精子進(jìn)入卵子后，卵子的皮質(zhì)顆粒和卵質(zhì)膜發(fā)生融合，釋放出蛋白酶和糖苷酶，溶解透明帶上的 zp3，改變了透明帶的結(jié)構(gòu)，從而阻止多余的精子和透明帶結(jié)合。 2）頂體反應(yīng) 精子和 卵丘細(xì)胞 及 透明帶 接觸后，精子的頂體外膜和精子質(zhì)膜發(fā)生點(diǎn)狀融合，釋放出頂體內(nèi)容物的過程。 頂體反應(yīng)是受精的先決條件。頂體反應(yīng)的機(jī)理在于精子接觸到到卵丘細(xì)胞及透明帶時，卵丘細(xì)胞或透明帶上的 zp3便和精子質(zhì)膜上的受體結(jié)合，該受體是一種 Ca2+運(yùn)載蛋白，它的激活促進(jìn)了 Ca2+的內(nèi)流， 內(nèi)流的 Ca2+滅活 Na+、 K+ATP酶，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi) Na+濃度升高， H+外流，細(xì)胞內(nèi) PH升高， Ca2+結(jié)合到質(zhì)膜內(nèi)面和頂體外膜的陰離子磷脂上，引起膜磷脂破裂，促進(jìn)兩膜融合。 幾種動物的體外受精 飼養(yǎng)、 促發(fā)情、 取卵 精子采取 與獲能 注射PMSG、hCG、摘取卵巢、收集COC 取附睪尾、孵育精子、 獲能液為TTYH、KRB 受精卵 微滴培養(yǎng)、 37℃、 5%CO 3— 6h 冷凍 保存 移植 1）小鼠 2）羊 3）牛 影響體外受精的因素 1）卵母細(xì)胞的成熟度 2）精液質(zhì)量 3）受精體系（溫度、適度、氣相、光照、 PH值） 4）精卵相遇的時間 5）精卵比例 6）精卵共孵育的時間 7）肝素 8）水 9）體細(xì)胞因子 異常受精 異常受精 多精受精 單核發(fā)育 雙雌核受精 五、早期胚胎體外培養(yǎng) 培養(yǎng)液： 基本成分主要包括無機(jī)鹽、氨基酸、維生素、碳水化合物和蛋白質(zhì)等。 胚胎體外培養(yǎng)系統(tǒng)： 常規(guī)培養(yǎng)系統(tǒng)、輸卵管離體培養(yǎng)系統(tǒng)、與體細(xì)胞共培養(yǎng)系統(tǒng)。 3．培養(yǎng)方法： 卵子在受精 24h后，轉(zhuǎn)移到預(yù)先制備好的顆粒單層中繼續(xù)培養(yǎng)。一般使用微滴培養(yǎng)法。 培養(yǎng)的溫度和氣相環(huán)境： 和卵母細(xì)胞成熟的條件一樣。 5．胚胎的回收及其質(zhì)量評定： 以牛為例，整個體外受精程序，從卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)開始，經(jīng)過體外受精和體外培養(yǎng)直至受精卵發(fā)育到囊胚階段，一共經(jīng)歷 8d的時間。如定受精當(dāng)天為 0d，則受精后第 5～ 6d即可回收桑椹胚，第 7～ 8d回收囊胚。 1cell 2cell 48cell 桑椹胚 囊胚 體外受精 體外培養(yǎng) 動物 卵裂率 囊胚率 冷凍后 存活率 鮮胚移植后 的產(chǎn)仔率 牛 ８０％－９０％ ４０％－５０％ ８０％ ３０％－４０％ 羊 ８０％－９０％ ３０％－４０％ ８０％ ５０％ 豬 ９０％ ６０％－７０％ － ５０％ 發(fā)育阻滯 哺乳動物的胚胎在體外發(fā)育表現(xiàn)種間特異性的發(fā)育阻滯，即胚胎在體外發(fā)育到一定細(xì)胞周期時發(fā)育停止，不同動物的胚胎體外發(fā)育阻滯期不同。可以在培養(yǎng)基中加入某些營養(yǎng)物質(zhì)、改善培養(yǎng)條件等方法加以克服。 六、顯微受精 概念 是指精子和卵子在體外環(huán)境中，通過顯微操作儀將哺乳動物的精子注入卵母細(xì)胞，促使其在體外相互結(jié)合成為受精卵，并繼續(xù)發(fā)育的技術(shù)。該技術(shù)解除了 ZP和卵質(zhì)膜對精子的阻擋作用。這項(xiàng)技術(shù)是體外受精和顯微操作相結(jié)合的技術(shù)，故又稱為纖維操作協(xié)助受精。 按照注射精子的部位不同，分為帶下注射和質(zhì)內(nèi)注射。 顯微受精的方法 ? 卵母細(xì)胞質(zhì)內(nèi)注射（ ICSI） ? 透明帶下注射（ SUZI） ? 透明帶鉆孔（ ZD） ? 透明帶部分切口（ PZD） 帶下授精（ SUZI） 胞質(zhì)內(nèi)授精（ ICSI） 精子顯微注射體外受精技術(shù) Intracytoplasmic Sperm Injection: ICSI
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