【導(dǎo)讀】時(shí)間就是金錢，效率就是生命！唯有惜時(shí)才能成功，唯有努力方可成就！

　　

【正文】 粉囊介質(zhì)花粉，花粉囊介質(zhì)花粉在 4℃ 密封保存?zhèn)溆谩Ｒ?T作為花粉囊介質(zhì)花粉處理代號(hào)， 4個(gè)比例不同處理的花粉囊介質(zhì)花粉則分別為 T T T3和 T4。使用云 煙 8云煙 87和 K326的純花粉作為對(duì)照。 授粉方法 在煙株最佳授粉期，用不同 比例 的花粉囊介質(zhì)花粉分別對(duì)云煙 8云煙 87和 K326 的母本進(jìn)行授粉。授粉時(shí)，用棉簽粘取花粉囊介質(zhì)花粉均勻涂抹于母本柱頭上，每朵花授粉 1 次，授粉后立即套袋，掛牌標(biāo)記。每株煙授粉 200 朵花，以 10 株煙為一個(gè)重復(fù)，共 3 次重復(fù)。授粉結(jié)束 7 d 后統(tǒng)計(jì)母本煙株的坐果率，待蒴果成熟后，分重復(fù)進(jìn)行單果采收，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取 5 個(gè)蒴果統(tǒng)計(jì)單果粒數(shù)和種子千粒重。采收的蒴果經(jīng)過脫粒、篩選、復(fù)曬后稱量單株產(chǎn)量。坐果率按以下公式計(jì)算：坐果率 (%)=(結(jié)果數(shù) /授粉花數(shù) )100%。 時(shí)間就是金錢，效率就是生命！ 唯有惜時(shí)才能成功，唯有努力方可成就！ 種子發(fā)芽試驗(yàn) 在培養(yǎng)皿中墊 2 層濕潤濾紙，每個(gè)培養(yǎng)皿均勻放置 100 粒種子，加蓋。將種子置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)， 25℃ 下每天光照 12 h 發(fā)芽，發(fā)芽期間保持濾紙濕潤。從第 3 d 起每天記錄發(fā)芽種子數(shù) (以胚根長度大于等于種子長度計(jì)為種子發(fā)芽 )，連續(xù)記錄 14 d。每處理 3 個(gè)重復(fù)，每重復(fù) 100 粒種子。發(fā)芽結(jié)束后，計(jì)算種子的發(fā)芽勢、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)、平均發(fā)芽時(shí)間，測定幼苗干重等指標(biāo)。計(jì)算方法如下：種子發(fā)芽勢 (％ )=(第 7 日發(fā)芽種子數(shù)／供試種子數(shù) )100％；發(fā)芽率(％ )=(第 14 日發(fā)芽 種子數(shù)／供試種子數(shù) )100％；發(fā)芽指數(shù) GI=Σ(Gt／ Dt)； 平均發(fā)芽時(shí)間 GT(d)=Σ(GtDt)/ΣGt，式中， Gt 為在不同時(shí)間的發(fā)芽數(shù)， Dt 為發(fā)芽日數(shù)。幼苗干重測定：發(fā)芽第 14 d，取 50 株幼苗用自來水沖洗干凈，用濾紙吸干表面，然后將幼苗在 60186。C 下烘干至恒重后，稱量苗干重，精確到 mg，取其平均值。 統(tǒng)計(jì)分析 同第一章 。 2 結(jié)果與分析 花粉囊介質(zhì)花粉授粉對(duì) MS 云煙 85 坐果、種子質(zhì)量及單株產(chǎn)量的影響 由表 31 可知，處理 T1 的坐果率與對(duì)照比差異不顯著，其它處理均顯著降低了 MS 云煙 85 的坐果率；單果粒數(shù)隨著花粉囊介質(zhì)花粉中純花粉比例的下降逐漸減少，其中以處理 T1 的單果粒數(shù)最高，為 粒，與對(duì)照 ( 粒 )比未達(dá)到顯著水平，其它處理的單果粒數(shù)均顯著低于對(duì)照；從千粒重看，處理T1 的千粒重與對(duì)照比差異不顯著，其它處理的千粒重顯著高于對(duì)照。 各處理具有較高的發(fā)芽勢和發(fā)芽率，除處理 T4 的發(fā)芽率顯著低于對(duì)照外，其它處理的發(fā)芽勢和發(fā)芽率與對(duì)照比差異不顯著 (見表 31)；從發(fā)芽指數(shù)和平均發(fā)芽時(shí)間看，各處理的發(fā)芽指數(shù)和平均發(fā)芽時(shí)間與對(duì)照比差異不顯著；各處理均提高了幼苗干重，處理 T3 的幼苗干重與對(duì)照比差異不顯著，其它處理的幼苗干重與對(duì)照比差異顯著；單株產(chǎn)量以處理 T1 最高，比對(duì)照提高了 ，其它處理顯著降低了 MS 云煙 85 的單株產(chǎn)量。 時(shí)間就是金錢，效率就是生命！ 唯有惜時(shí)才能成功，唯有努力方可成就！ 表 31 花粉囊介質(zhì)花粉授粉對(duì) MS 云煙 85 坐果率、種子質(zhì)量和單株產(chǎn)量的影響 注：同列數(shù)據(jù)中不同小寫字母表示處理間差異達(dá) 5%顯著水平，下表同。 花粉囊介質(zhì)花粉授粉對(duì) MS 云煙 87 坐果、種子質(zhì)量及單株產(chǎn)量的影響 由表 32 可知， T1 處理的坐果率為 90%，與對(duì)照比差異不顯著，其它處理的坐果率顯著低于對(duì)照。采用不同處理的花粉囊介質(zhì)花 粉授粉，隨著純花粉比例的下降， MS 云煙 87 的單果粒數(shù)和單株 產(chǎn)量 均呈下降趨勢，種子千粒重呈上升趨勢 (見表 32)。處理 T1 的單果粒數(shù)、種子千粒重和單株產(chǎn)量與對(duì)照比差異均不顯著，處理 T T3 和 T4 的種子千粒重顯著高于對(duì)照，但 顯著降低了 MS 云煙87 的單果粒數(shù)和單株 產(chǎn)量 。從發(fā)芽勢和發(fā)芽率看，各處理對(duì) MS 云煙 87 的種子發(fā)芽勢和發(fā)芽率無顯著影響。 處理 T3 的發(fā)芽指數(shù)顯著低于對(duì)照，其它處理對(duì)種子的發(fā)芽指數(shù)無顯著影響；從平均發(fā)芽時(shí)間看，各處理的平均發(fā)芽時(shí)間與對(duì)照比差異不顯著；處理 T1的幼苗干重與對(duì)照比差異不顯著，其它處理 顯著提高了 MS 云煙 87 幼苗干重。 表 32 花粉囊介質(zhì)花粉授粉對(duì) MS 云煙 87 坐果率、種子質(zhì)量和單株產(chǎn)量的影響 花粉囊介質(zhì)花粉授粉對(duì) MSK326 坐果、種子質(zhì)量及單株產(chǎn)量的影響 使用不同處理的花粉囊介質(zhì)花粉 對(duì) MSK326 授粉，各處理的 坐果率與對(duì)照比差異不顯著，其中以處理 T1 的坐果率最高，為 %。單果粒數(shù)和單株產(chǎn)介質(zhì) 花粉 坐果率 /% 單果粒數(shù) /粒 /果 千粒重 /g 發(fā)芽勢 /% 發(fā)芽率 /% 發(fā)芽 指數(shù) 平均發(fā)芽 時(shí)間 /d 苗干重 / mg/50 株 單株產(chǎn)量 /g CK a a c a a a a b a T1 a a c a ab a a a a T2 b b b a ab a a a b T3 c c a a ab a a ab c T4 c d a a b a a a d 介質(zhì) 花粉 坐果率 /% 單果粒數(shù) /粒 /果 千粒重 /g 發(fā)芽勢 /% 發(fā)芽率 /% 發(fā)芽 指數(shù) 平均發(fā)芽 時(shí)間 /d 苗干重 / mg/50 株 單株產(chǎn)量 /g CK a a c a a a ab b a T1 a a bc a a ab b b a T2 b b b a a ab a a b T3 b c a a a b a a c T4 c d a a a ab a a d 時(shí)間就是金錢，效率就是生命！ 唯有惜時(shí)才能成功，唯有努力方可成就！ 量隨著 花粉囊 介質(zhì)花粉中純花粉比例的下降逐漸減少，處理 T1 的單果粒數(shù)和單株產(chǎn)量與對(duì)照比差異不顯著，其它處理的單果粒數(shù)和單株產(chǎn)量顯著低于對(duì)照 (見表 33)。 處 理 T1 的 千粒重與對(duì)照比差異不顯著，其它 處理均提高了 MSK326 的 千粒重 。 從發(fā)芽勢、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)和平均發(fā)芽時(shí)間看，各 處理對(duì)種子的 發(fā)芽勢、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)和平均發(fā)芽時(shí)間無顯著影響。處理 T2 和 T3 的幼苗干重顯著高于對(duì)照，處理 T1 和 T4 的幼苗干重與對(duì)照比無顯著差異。 表 33 花粉囊介質(zhì)花粉授粉對(duì) MSK326 坐果率、種子質(zhì)量和單株產(chǎn)量的影響 3 討論 在植物人工授粉中，純花粉中添加固體介質(zhì)輔料，主要目的是稀釋雜交用花粉，節(jié)省授粉品種花粉的用量 (宋志強(qiáng)等， 2020)。目前研究 報(bào)道中使用的固體介質(zhì)輔料主要有滑石粉、淀粉、葡萄糖粉、染色松花粉、奶粉等，關(guān)于使用花粉囊粉末作為稀釋花粉的固體介質(zhì)輔料在作物雜交授粉上的應(yīng)用尚未見報(bào)道。本研究使用花粉囊粉末作為稀釋花粉的固體介質(zhì)輔料，與煙草純花粉按一定比例混合制備成介質(zhì)花粉，研究花粉囊介質(zhì)花粉在 MS 云煙 85， MS 云煙 87和 MSK326 的授粉效果，研究發(fā)現(xiàn)，隨著花粉囊介質(zhì)花粉中純花粉比例的下降，MS 云煙 85， MS 云煙 87 和 MSK326 的單果粒數(shù)和單株產(chǎn)量呈下降趨勢，對(duì)種子質(zhì)量無明顯的影響，因此，使用花粉囊介質(zhì)花粉授粉關(guān)鍵在于選擇花粉囊介質(zhì)花粉 中的純花粉適宜比例，以保證種子的產(chǎn)量。 研究結(jié)果表明，用花粉與花粉囊粉末按 2:1 比例制備的花粉囊介質(zhì)花粉對(duì)MS 云煙 85， MS 云煙 87 和 MSK326 進(jìn)行授粉，均取得了良好的授粉效果，授粉后柱頭著粉情況好，坐果率、單果粒數(shù)、千粒重、發(fā)芽勢、發(fā)芽率、單株產(chǎn)量與對(duì)照差異均不顯著，花粉使用量節(jié)約了 %。用花粉與花粉囊粉末按 l:1:2 及 1:3 比例制備的花粉囊介質(zhì)花粉授粉，雖然提高了種子千粒重，但單果粒介質(zhì) 花粉 坐果率 /% 單果粒數(shù) /粒 /果 千粒重 /g 發(fā)芽勢 /% 發(fā)芽率 /% 發(fā)芽 指數(shù) 平均發(fā)芽 時(shí)間 /d 苗干重 / mg/50 株 單株產(chǎn)量 /g CK ab a c a a ab a bc a T1 a a c a a a a c a T2 ab b b a a b a a b T3 b c a a a ab a a c T4 ab d ab a a ab a ab d 時(shí)間就是金錢，效率就是生命！ 唯有惜時(shí)才能成功，唯有努力方可成就！ 數(shù)和單株產(chǎn)量顯著低于對(duì)照，不適宜應(yīng)用于制種生產(chǎn)。 綜上所述，用花粉與花粉囊粉末按 2:1 比例制備的花粉囊介質(zhì)花 粉授粉，授粉效果較好，在保證種子產(chǎn)量和質(zhì)量的前提下，能達(dá)到節(jié)約花粉使用量，有效降低制種成本的目的，該技術(shù)經(jīng)過進(jìn)一步完善，有望在煙草雄性不育 及 雜交制種上大面積推廣應(yīng)用。 4 小結(jié) 本研究 創(chuàng)新性地提出了同源性花粉介質(zhì)，并研究了其對(duì) 坐果、種子質(zhì)量及產(chǎn)量 等的影響，驗(yàn)證了花粉囊粉末介質(zhì)花粉的可行性，并篩選出了 用 純 花粉與花粉囊粉末按 2:1 比例制備的花粉囊介質(zhì)花粉 授粉效果 良 好 。 本研究為 花粉囊 介質(zhì)花粉在煙草雜交制種上 的研究與 應(yīng)用提供了實(shí)踐依據(jù) ， 獲得國家發(fā)明專利 1 項(xiàng) （ “ 一種固體介質(zhì)花粉及其制備方法和應(yīng)用 ”，專利號(hào)： ） ， 發(fā)表論文 1 篇（ “ 花粉囊介質(zhì)花粉在煙草雜交制種上的應(yīng)用研究 ” ， 中國農(nóng)學(xué)通報(bào) ， 2020， 27(3)： 205208.)。 時(shí)間就是金錢，效率就是生命！ 唯有惜時(shí)才能成功，唯有努力方可成就！ 第四部分 柱頭介質(zhì)花粉在煙草雜交制種上的應(yīng)用研究 在煙草花粉采集過程中，父本花朵會(huì)留有大量的柱頭，一般當(dāng)作廢棄物處理。但煙草柱頭及其分泌物中含有豐富的糖、蛋白質(zhì)、脂類、氨基酸、激素、酶等 ， 如作為花粉介質(zhì) 可以為花粉萌發(fā)提供 必要的 能量、營養(yǎng)物質(zhì)和必需的有機(jī)合成中間產(chǎn)物， 為 花粉 的萌發(fā)和花粉管的伸長 提供有利的外部條件。 本研究將探索柱頭作為花粉介質(zhì)的可行性，并尋找柱頭 介質(zhì)花粉制備的合適比例。 1 材料與方法 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)材料為云煙 8云煙 8 K32云煙 201 父母本。 煙草 花粉 介質(zhì) 制備方法 試驗(yàn)于玉溪中煙種子有限責(zé)任公司西雙版納煙草種子冬繁基地進(jìn)行。 分別 采摘 云煙 8云煙 8 K326和云煙 201的父本含蕾期至花始開期的花朵，去除花藥置于室內(nèi)通風(fēng)處涼置 24h。收集柱頭，在 30oC條件下烘干，磨碎后過 60目篩，在4oC干燥條件下密封貯藏，備用。 柱頭介質(zhì)花粉與純花粉的比較試驗(yàn) 在玉溪中煙種子有限責(zé)任公司西雙版納冬繁基地進(jìn)行大田試驗(yàn)，種植云煙87（父本） 2 畝， MS 云煙 87（母本） 10 畝。 在煙株最佳授粉期， 將制備好的云煙 87 柱頭 介質(zhì)與云煙 87 純花粉按 1:2 的重量比例混合均勻， 用棉簽粘取介質(zhì)花粉 ， 涂抹于 MS 云煙 87 柱頭上， 進(jìn)行人工授粉，以采用純花粉授粉為對(duì)照。授粉結(jié)束 7 d 后統(tǒng)計(jì)坐果率，待蒴果成熟后，進(jìn)行單果采收， 隨機(jī) 取 5 個(gè)蒴果統(tǒng)計(jì)單果粒數(shù)。 其余蒴果手工脫 粒 后采用風(fēng)選方式對(duì)種子進(jìn)行精選，去除干癟種子以及各種雜質(zhì)，晾干至種子含水量小于 %，統(tǒng)計(jì)每畝種子產(chǎn)量。隨機(jī)抽取種子于 25oC 條件下發(fā)芽，測定發(fā)芽勢和發(fā)芽率。 柱頭介質(zhì)花粉與花粉囊介質(zhì)花粉 的比較試驗(yàn) 在煙株最佳授粉期， 將制備好的 K326 柱頭 介質(zhì)與 K326 純花粉按 1:2 的重量比例混合均勻， 用棉簽粘取介質(zhì)花粉 ， 涂抹于 MSK326 柱頭上， 進(jìn)行人工授粉，以采用花粉囊介質(zhì)花粉（專利號(hào)： ）授粉為對(duì)照。 花粉時(shí)間就是金錢，效率就是生命！ 唯有惜時(shí)才能成功，唯有努力方可成就！ 囊介質(zhì)花粉的制備方法： 采集 K326 花藥，晾干 使其散粉 ， 用 50 目篩子篩出花粉，收集花粉囊于 30℃下烘干，磨碎后過 60 目篩， 將 花粉囊粉末與 K326（父本）純花粉按 1:2 的 重量比混合 均勻 ，即得到所需的 介質(zhì)花粉。 柱頭花粉介質(zhì)對(duì)花粉萌發(fā)的影響實(shí)驗(yàn) 稱取 g 制 備 好的柱頭 介質(zhì) 和花粉囊 介質(zhì) 分別放入 20 ml蒸餾水中， 不斷攪拌，于 25℃ 下浸泡 3 h， 過濾后 將浸提液置于 4℃ 冰箱內(nèi)，備用。稱取 3 份 瓊脂，分別放入 20 ml 蒸餾水中，用玻璃棒攪拌均勻后放入微波爐加熱，瓊脂完全溶解后取出，待溫度降至 35℃ 以下，分別加入 10 ml花粉介質(zhì) 和花粉囊粉末 浸提液，攪拌均勻，作為培養(yǎng)基備用。對(duì)照 加入 10 ml 蒸餾水。用膠頭滴管吸取適量培養(yǎng)基滴到載玻片上，待培養(yǎng)基凝固后，用 棉簽 分別沾取少量花粉 均勻 灑落在培養(yǎng)基上。把載玻片放