2007年研究生高級(jí)生化技術(shù)-資料下載頁(yè)
2025-01-19 09:10本頁(yè)面
【正文】 化學(xué)中的應(yīng)用 樣品與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)成分相同 K標(biāo) = K樣 比色皿規(guī)格相同 L標(biāo) =L樣 ① /② ： A標(biāo) / A樣 =C標(biāo) /C樣 C樣 = (A樣 /A標(biāo) )C標(biāo) 三 .分光光度法在生物化學(xué)中的應(yīng)用 紫外吸收法 ? 原理：共軛雙鍵 ? 優(yōu)點(diǎn)： 簡(jiǎn)單、快速、靈敏、 樣品可以回收 ? 缺點(diǎn)： 有一定的誤差（原因）； 受核酸類物質(zhì)干擾 ? 結(jié)果分析： 濃度分析： 光徑 1cm，以溶解蛋白的緩沖液為對(duì)照A280= 蛋白質(zhì)濃度（ mg/ml） = 用分光光度計(jì)法定量 DNA 1. 取 2?l提取的質(zhì)粒 DNA， 加入 98?l蒸餾水對(duì)待測(cè) DNA樣品做 1:50(或更高倍數(shù)的稀釋 )。 2. 蒸餾水作為空白 ,在波長(zhǎng) 260nm、 280nm處調(diào)節(jié)紫外分光光度計(jì)讀數(shù)至零 。 3. 加入 DNA稀釋液 ， 測(cè)定 260nm 及 280nm的吸收值 。260nm 讀數(shù)用于計(jì)算樣品中核酸的濃度 ， OD260值為 1相當(dāng)于約 50?g /ml雙鏈 DNA， 33?g /ml單鏈 ?？筛鶕?jù)在 260nm 以及在 280nm 的讀數(shù)的比值（ OD260/OD280） 估計(jì)核酸的純度 。 一般 DNA的純品 ， 其比值為 ， 低于此值說(shuō)明有蛋白質(zhì)或其它雜質(zhì)的污染 。 4. 記錄 OD值，通過(guò)計(jì)算確定 DNA濃度或純度，公式如下 : dsDNA=50 (OD260) 稀釋倍數(shù) 以上濃度單位為 ?g /ml
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