家畜人工授精ppt課件-資料下載頁
2025-01-17 17:29本頁面
【正文】 ? 冰晶很微小，所以表面能很高，微晶總是力圖合并成大冰晶 ? 一旦吸收一定的能量，冰晶就會合并成大冰晶，從而使精子受到破壞。 ? 保存過程中，即使凍精溫度只升高到 60℃ ，也可能使精子死亡 ? 凍精在解凍時(shí)也需要快速升溫，才能保證防止微晶在解凍過程中形成大冰晶 三、精液冷凍的稀釋液 ? 低溫保護(hù)劑： ? 糖類：蔗糖、乳糖、葡萄糖、果糖 ? 卵黃、奶類 ? 冷凍保護(hù)劑 ? 甘油 ? 二甲基亞砜 ? 乙二醇 ? 抗生素類：慶大霉素、青霉素、鏈霉素等 四、冷凍精液稀釋液的組成 ? 基礎(chǔ)液：由糖類和鹽類、水配制的等滲液 ? 第一液：由基礎(chǔ)液和卵黃（ 1520%）組成的低溫保存稀釋液。用于在 33℃ 下稀釋和逐步降溫。 ? 第二液：由第一液和甘油或其它防凍劑組成。甘油含量通常比稀釋后濃度高一倍。用于精液的第二次稀釋（ 24 ℃ ） 五、解凍液的配制 ? 一般采用 %的檸檬酸鈉作解凍液 ? 豬的凍精解凍液用常溫保存稀釋液 BTS ? 也可用 VB12注射液作解凍液 ? 如果解凍液中加入 2mmol的咖啡因有利于提高受胎率 六、冷凍精液的程序 精液的采集：牛羊采精可采用一次采精兩個(gè)射精量的方法 品質(zhì)檢查：精液的密度和活力都必須符合要求 稀釋前處理：羊、豬的精液在稀釋前進(jìn)行離心或清洗（羊）有利于提高解凍后活力 稀釋：可采用一次稀釋也可采用二次或三次稀釋。最常用的是二次稀釋 冷凍精液的程序 稀釋 ? 第一次稀釋：在 30℃ 溫度下，根據(jù)計(jì)算的稀釋倍數(shù)進(jìn)行第一次稀釋，放在 500毫升的燒杯中與第二液一起緩慢降溫至 25 ℃ 。 ? 第二次稀釋：在 25 ℃ 下進(jìn)行 平衡：是精液與防凍劑（甘油）相互的時(shí)間。一般 24小時(shí)。 分裝：凍精的劑型有細(xì)管（ 、）， 安瓿（ 、 5ml)、 顆粒（ ）、 袋裝等。 冷凍精液的程序 冷凍： ? 冷源：干冰（ 79 ℃ ）、液氮（ 196 ℃ ） ? 冷凍用品： ? 冷凍面：銅網(wǎng)、氟板（聚四氟乙烯）、鋁板 ? 冷凍槽：廣口液氮罐、液氮槽 ? 鋼匙、鑷子、低溫溫度計(jì) ? 冷凍方法： ? 干冰埋藏法 ? 液氮熏蒸法 ? 不同劑型冷凍方法： ? 顆粒凍精 ? 細(xì)管凍精 解凍檢查：活力 精液冷凍儀 七、顆粒凍精的制作 （一）冷凍條件 冷源：液氮或干冰 冷凍面：可以用銅網(wǎng)、聚四氟乙烯板、鋁板等 冷凍溫度： 98— 110 ℃ 液氮槽 （二）顆粒凍精制作流程 冷凍面的預(yù)冷：將冷凍面放入液氮中浸數(shù)分鐘，待不再有大量氣體放出時(shí)，取出，架在液氮面上 ，數(shù)分鐘后即可冷凍。 凍前精子活力檢查：平衡的精液應(yīng)進(jìn)行活力檢查，如果活力合格方可滴凍 滴凍：預(yù)冷至 24 ℃ 的滴管吸取精液，均勻地滴在冷凍板上，并使之間距為一個(gè)顆粒直徑。每個(gè)顆粒 顆粒凍精制制作流程 滴凍練習(xí)：每次用取樣器取 1ml精液，將其滴成 10個(gè)大小相等的顆粒。 熏蒸：一塊冷凍板滴滿后，可將冷凍板面加蓋（也可不加）。 將冷凍板浸入液氮：并用預(yù)冷后的不銹鋼勺將顆粒鏟下，倒入下面的網(wǎng)面上。 將紗布袋浸入液氮中，將一塑料漏斗口插入紗布袋中。取出液氮中的紗網(wǎng)將顆粒凍精倒入漏斗中 顆粒凍精制制作流程 取樣解凍檢查精子活力 9 、將紗布袋口抽緊，在袋口的線上作好標(biāo)記。 10 、將提漏從液氮罐中取出，放入液氮槽中，將紗布袋放入提漏中 1將提漏迅速放入液氮罐中 （三）顆粒凍精液制作要求 ? 形狀一致，不連片，大小均勻，體積 ? 無氣泡（在液氮中不漂?。? ? 解凍后活力 ? 總有效精子數(shù) 1200萬個(gè)（牛） ? 每 ml中不得檢出大腸桿菌 八、細(xì)管凍精的制作 （一）細(xì)管凍精的優(yōu)點(diǎn)： 封閉包裝，衛(wèi)生安全：保存、輸精時(shí)不與外界接觸 便于標(biāo)記 取出方便：直接用鑷子夾取 解凍方便：直接投入水浴中解凍 輸精方便：可安裝在專用的輸精槍內(nèi)輸精 （二）細(xì)管凍精的缺點(diǎn) ? 制作成本高 ? 必須進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)才有意義 （三）細(xì)管分裝 ? 常溫分裝：一次性稀釋后進(jìn)行分裝標(biāo)記，然后進(jìn)行精液降溫與平衡 優(yōu)點(diǎn)：不需要低溫操作臺；缺點(diǎn)：對精子損害較大 ? 低溫分裝：在第二次稀釋后進(jìn)行分裝標(biāo)記，然后進(jìn)行平衡，最后冷凍。 優(yōu)點(diǎn)：對精子損傷小，解凍后活力大 缺點(diǎn)：對設(shè)備要求高 （四）細(xì)管凍精的冷凍 ? 大口徑液氮罐冷凍 將平衡后的細(xì)管用毛巾擦凈，放入銅網(wǎng)上，將銅網(wǎng)降至距液氮面 10cm的高度 10分鐘后沉入液氮中，取出分裝在提漏內(nèi)，放入液氮罐中 ? 程序冷凍儀冷凍 （四）細(xì)管凍精的要求 ? 細(xì)管上要對供精者的場家、號碼、生產(chǎn)日期進(jìn)行標(biāo)記 ? 容量 ,5ml不等，牛細(xì)管凍精一般為 ? 每劑有效精子數(shù) 1000萬個(gè) ? 活力 ? 其它同顆粒凍精 （五）細(xì)管凍精的解凍 ? 將水浴溫度調(diào)整到 40 ℃ ? 將提漏提至罐口下 35cm處，用鑷子夾住細(xì)管的超聲波封口端迅速移入水浴中 ? 不斷搖動， 34秒后全部變色后取出，用手搓動使之全部解凍 （九）凍精的解凍 ? 解凍溫度：有冰水解凍， 3040 ℃ 解凍，高溫（ 5075 ℃ ）解凍，以第二種方法最常用 ? 解凍方法： ? 濕解凍法：在試管中加入 ，升溫到 3040 ℃ ，投入一粒凍精，搖動并取出 ? 干解凍法：先將試管預(yù)熱至 3040 ℃ ，投入凍精顆粒后，至融化一半時(shí)，取出加入 2030 ℃ 的解凍液 ? 細(xì)管凍精解凍：將細(xì)管從液氮罐或液氮槽中取出，投入3040 ℃ 的水中至融化一半時(shí)取出用手搓至完全融化或用體溫解凍 ? 解凍后溫度： 58℃ ? 解凍后保存：在 25℃ 下或冰瓶中可保存 12小時(shí)以上。 顆粒冷凍精液的解凍 ? 取 %的檸檬酸鈉 試管中 ? 將試管放入 40 ℃ 的水浴中預(yù)溫 1分鐘 ? 將液氮倒入廣口保溫瓶或泡沫塑料槽中 ? 將液氮罐的提漏提至罐口下 35cm處，看清標(biāo)記后，將紗布袋取出放液氮槽中 ? 將鑷子放入液氮中預(yù)冷片刻，夾取顆粒凍精后，迅速投入試管中，并搖動試管，至凍精解凍至綠豆大小時(shí)取出，搖動至全部融化。 （十）冷凍精液的保存 ? 凍精（顆粒）應(yīng)進(jìn)行標(biāo)記： ? 公畜名（號）、采精日期、容量 ? 保持液氮罐中液氮面高度 ? 接觸冷凍精液的用品都要進(jìn)行預(yù)冷 ? 在凍精進(jìn)行轉(zhuǎn)移時(shí)，應(yīng)盡可能減少在空氣中暴露的時(shí)間。如果是顆粒凍精應(yīng)先移入液氮槽中再解凍。 ? 液氮罐應(yīng)放在涼爽通風(fēng)處，避免放在高溫或通風(fēng)不暢的地方 ? 液氮罐在運(yùn)輸中應(yīng)防止暴曬和碰撞。 The end！
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