生物分離工程第八章沉析-資料下載頁
2025-01-16 11:56本頁面
【正文】 基三甲基季銨鹽溴化物 ) ? 與多糖上的陰離子形成形成季銨絡(luò)合物，降低離子強(qiáng)度，絡(luò)合物析出。 分離核酸用沉析劑 ? 酚、氯仿、十二烷基磺酸鈉等 ? 目的是使核酸和蛋白質(zhì)分離，蛋白質(zhì)變性沉淀，核酸則存在于水溶液中。 選擇性變性沉淀法 ? 利用蛋白質(zhì)、酶、核酸等生物大分子對某種物理或化學(xué)因素的敏感性差異，實(shí)現(xiàn)分離。 ? 加入變性劑 ? 選擇性熱變性 ? 選擇性酸堿變性 使用時(shí)需慎重！?。?！ 親和沉析 ? 原理： 利用蛋白質(zhì)和特定分子（配基、基質(zhì)、輔酶等）之間高度專一而設(shè)計(jì)的一種特殊選擇性的分離技術(shù)，所以沉淀原理不是依據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的差異，是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與特定分子結(jié)合，形成固相從而與雜質(zhì)分離 ? 分類： 根據(jù)親和沉淀的機(jī)理，分為 一次作用親和沉淀 （水溶性分子偶聯(lián) 2個(gè)或 2個(gè)以上的親和配基，雙配基和多配基可與含有 2個(gè)以上的親和結(jié)合部位的多價(jià)蛋白質(zhì)交聯(lián)，進(jìn)而產(chǎn)生較大的交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)而沉淀）和 二次作用親和沉淀 （先使目標(biāo)物質(zhì)和帶有配基（基質(zhì)、輔酶）的載體結(jié)合，然后改變 pH或其它條件使目標(biāo)物 配基 載體形成可逆性沉淀，從而使目標(biāo)物與雜質(zhì)分離 (CE p356)。 沉析技術(shù)的應(yīng)用 ? 蛋白質(zhì) ? 多糖 ? 皂苷 ? 杜仲中綠原酸的提取 ? 水提醇沉法（水醇法）系指在中藥水提濃縮液中，加入乙醇使達(dá)不同含醇量，某些藥物成分在醇溶液中溶解度降低析出沉淀，固液分離后使 水提液得以精制的方法。一般操作過程是：將中藥水提液濃縮至 1︰ 11︰ 2（ mL︰ g）， 藥液放冷后，邊攪拌邊緩慢加入乙醇使達(dá)規(guī)定含醇量，密閉冷藏 2448h，濾過，濾液回收乙醇，得到精制液。操作時(shí)應(yīng)注意以下問題：①藥液應(yīng)適當(dāng)濃縮，以減少乙醇用量。但應(yīng)控制濃縮程度，若過濃，有效成分易包裹于沉淀中而造成損失。②濃縮的藥液冷卻后方可加入乙醇，以免乙醇受熱揮發(fā)損失。③選擇適宜的醇沉濃度。一般藥液中含醇量達(dá) 50％ 60％可除去淀粉等雜質(zhì)，含醇量達(dá) 75％以上大部分雜質(zhì)均可沉淀除去。④慢加快攪。應(yīng)快速攪動(dòng)藥液，緩緩加入乙醇，以避免局部醇濃度過高造成有效成分被包裹損失。⑤密閉冷藏。可防止乙醇揮發(fā)，促進(jìn)析出沉淀的沉降，便于濾過操作。⑥洗滌沉淀。沉淀采用乙醇（濃度與藥液中的乙醇濃度相同）洗滌可減少有效成分在沉淀中的包裹損失。 水提醇沉法與醇提水沉法 ? 醇提水沉法（醇水法）系指先以適宜濃度的乙醇提取藥材成分，將提取液回收乙醇后，加適量水?dāng)噭颍o置冷藏一定時(shí)間，沉淀完全后濾除的方法。藥材用乙醇為溶劑提取，可避免淀粉、蛋白質(zhì)、黏液質(zhì)等成分的浸出，加水處理后可除去醇提液中樹脂、脂溶性色素等雜質(zhì)。應(yīng)用此方法要慎重，避免醇溶性有效成分因水溶性差而被一起沉淀除去 。 本章作業(yè) P63課后思考題 3及： 常用的蛋白質(zhì)沉淀方法有哪些？ 簡述鹽析的原理。 影響鹽析的主要因素有哪些？ 簡述有機(jī)溶劑沉析的原理。 簡述等電點(diǎn)沉析的原理。
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