淋巴細(xì)胞抗原受體ppt課件-資料下載頁
2025-01-15 01:24本頁面
【正文】 ? 常用骨髓瘤細(xì)胞系有： NS SP2／ 0、 X63 等。 ? 保存：防止突變、定期篩選（ 8氮鳥嘌呤） 防止支原體污染（胎牛血清） ? 融合時(shí)保證骨髓瘤細(xì)胞處于對數(shù)生長期，良好的形態(tài)，活細(xì)胞計(jì)數(shù)高于 95％ ? 融合比例 脾細(xì)胞：骨髓瘤細(xì)胞 =3： 1許多環(huán)節(jié)需要加飼養(yǎng)細(xì)胞，如：在雜交瘤細(xì)胞篩選、克隆化和擴(kuò)大培養(yǎng)過程中 ? 常用的飼養(yǎng)細(xì)胞有：小鼠腹腔巨噬細(xì)胞 ? 飼養(yǎng)細(xì)胞一般在融合前一天制備 ? 免疫脾細(xì)胞：處于免疫狀態(tài)脾臟中 B淋巴母細(xì)胞 漿母細(xì)胞。一般取最后一次加強(qiáng)免疫 3天后的脾臟。 ? 融合比例： ? 骨髓瘤細(xì)胞：脾細(xì)胞 =1： 5或 1： 10 ? 融合劑： 40%PEG（分子量 10002022） ? 融合 24小時(shí)后加 HAT培養(yǎng)液 2周后 改用 HT培養(yǎng)液 2周后 改用一般培養(yǎng)液 ? 克隆化：指將抗體陽性孔進(jìn)行克隆化。目的是將抗體分泌細(xì)胞、抗體非分泌細(xì)胞、特異性抗體分泌細(xì)胞和無關(guān)抗體分泌細(xì)胞分開。 ? 克隆化的原則：盡早進(jìn)行，反復(fù) 45次 ? 克隆化方法： 有限稀釋法 、軟瓊脂平板法、顯微克隆法 ? 陽性雜交瘤細(xì)胞應(yīng)及時(shí)凍存，防染色體丟失、變異及污染 ? 一般在雜交瘤細(xì)胞布滿孔底 1/10時(shí)，開始檢測特異性抗體，篩選出所需雜交瘤細(xì)胞系。 ? 可靠的篩選方法須在融合前建立，避免由于方法不當(dāng)貽誤篩選時(shí)機(jī)。 ? 克隆化：指將抗體陽性孔進(jìn)行克隆化。目的是將抗體分泌細(xì)胞、抗體非分泌細(xì)胞、特異性抗體分泌細(xì)胞和無關(guān)抗體分泌細(xì)胞分開。 ? 克隆化的原則：盡早進(jìn)行，反復(fù) 45次 ? 克隆化方法： 有限稀釋法 、軟瓊脂平板法、顯微克隆法 ? 陽性雜交瘤細(xì)胞應(yīng)及時(shí)凍存，防染色體丟失、變異及污染 ? 單抗生產(chǎn)的方法： ? 動(dòng)物體內(nèi)誘生法 ：小鼠腹腔注射降植丸或液體石蠟， 1周后腹腔注射雜交瘤細(xì)胞， 710天后出現(xiàn)腹水，無菌采集。 單抗純化方法： ? 鹽析 ? 凝膠過濾 ? 離子交換層析 ? 親和層析法 ? 辛酸沉淀法 ? 單抗生產(chǎn)的方法： ? 動(dòng)物體內(nèi)誘生法 ：小鼠腹腔注射降植丸或液體石蠟， 1周后腹腔注射雜交瘤細(xì)胞， 710天后出現(xiàn)腹水，無菌采集。 ? 單克隆抗體特性 ? 理化性狀高度均一，生物活性專一，只與一種抗原表位發(fā)生反應(yīng)，特異性強(qiáng)，純度高，易于實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化和大量制備 單克隆抗體在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 ? 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)診斷試劑 ? （ 1）病原微生物抗原抗體的檢測 ? （ 2）腫瘤抗原的檢測 ? （ 3）免疫細(xì)胞及其亞群的檢測 ? （ 4）激素測定 ? （ 5）細(xì)胞因子的測定 ? 蛋白質(zhì)的提純 ? 腫瘤的導(dǎo)向治療和放射免疫顯像技術(shù) 基因工程抗體與抗體庫技術(shù) ? 單抗體內(nèi)應(yīng)用和療效受限原因： ? ? ? ,難于普及應(yīng)用 ? 人雜交瘤技術(shù)未獲真正突破原因 : ? 融合率低、建株難、不穩(wěn)定、產(chǎn)量低、人體不能隨意免疫 ? 基因工程抗體：用基因工程技術(shù)改造現(xiàn)有優(yōu)良的鼠單抗基因，著眼點(diǎn)在于盡量減少抗體中的鼠源成分，但又盡量保留原有的抗體特異性。 ? 抗體庫技術(shù)：用細(xì)菌克隆取代 B細(xì)胞克隆表達(dá)抗體，不經(jīng)細(xì)胞融合，甚至不經(jīng)免疫，制備針對任何抗原的單克隆抗體。 ? 臨床上欲開展急性心肌損傷特異性標(biāo)志物 — 人心肌肌鈣蛋白 I（ cTnI）的檢測項(xiàng)目，現(xiàn)提供給你重組 cTnI抗原，請你設(shè)計(jì)可行性實(shí)驗(yàn)方案。 三 、 基因工程抗體 (geic engineering antibody) 在 DNA水平對 Ig基因進(jìn)行切割、拼接或修 飾，導(dǎo)入受體細(xì)胞表達(dá)的抗體。 人 鼠嵌合抗體 (chimeric antibody) 改型抗體 (reshaped humanized antibody) 小分子抗體 雙特異性抗體 (bispecific antibody)
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