【正文】 PCA 或其他合理的方法考察全身過敏性反應(yīng) 3）溶血性試驗：常規(guī)的體外試管法（肉眼觀察法） 疫苗的 IIII 段生殖毒性試驗 （按《藥物生殖毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》第二稿進(jìn)行） 以大鼠為實驗對象，進(jìn)行下列三段生殖毒性評價： 1）生育力與早期胚胎發(fā)育毒性試驗（ I 段） A，從交配前到受孕（成年雄性和雌性生殖功能、配子的發(fā)育和成熟、交配行為、受精） B，從受孕到著床（成年雌性生殖功能、著床前發(fā)育、著床） 2）胚胎 胎仔發(fā)育毒性試驗（ II 段） 21 C，從著床到硬腭閉合（成年雌性生殖功能、胚胎發(fā)育、主要器官形成） D，從硬腭閉合到妊娠終止（成年雌性生殖功能、胎仔發(fā)育與生長、器官發(fā)育和生長） 3）圍產(chǎn)期毒性試驗（ III 段） E，從出生到離乳（成年雌性生殖功能、幼子對宮外生活的適應(yīng)性、離乳前發(fā)育和生長） F，從離乳到性成熟（離乳后發(fā)育和生長、獨立生活的適應(yīng)能力、達(dá)到性成熟的情況） 疫苗的致突變試驗、致癌試驗（必要時） 1）致突變試驗 A，微生物回突變（ Ames）試驗 B，哺乳動物培養(yǎng)細(xì)胞（ CHL）染色體畸形試驗 C，嚙齒動物（ NIH 小鼠）微核試驗 D，小鼠顯形致死試驗（ DLT） 2）致癌試驗（必要時） A，體外短期篩選試驗，如哺乳動物細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化試驗 B，哺乳動物短期致癌試驗（有限體內(nèi)致癌試驗），如小鼠皮膚 腫瘤誘發(fā)試驗、小鼠肺瘤誘發(fā)試驗、大鼠肝轉(zhuǎn)化灶誘發(fā)試驗、雌性大鼠乳腺癌誘發(fā)試驗等 C，長期致癌試驗：大鼠的終 身 致癌試驗。 2． 技術(shù)路線 22 3． 創(chuàng)新點 1）開發(fā)出長效、安全、可逆、價廉、可接受的新型男性避孕疫苗，填補國內(nèi)和國際該領(lǐng)域的空白； 2） FSHR 多肽和 Eppin 蛋白疫苗的聯(lián)合應(yīng)用研究； 3）明確疫苗的抗生育靶點和作用機制； 4）構(gòu)建男性避孕疫苗的非臨床前研究平臺、藥理學(xué)和毒理學(xué)評價體系。 （二） 主要技術(shù)指標(biāo)（如形成的知識產(chǎn)權(quán)、技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)、新技術(shù)、新產(chǎn)品、新裝置、論文專著等數(shù)量、指標(biāo)及其水平，與國內(nèi)外 同類技術(shù)或產(chǎn)品的競爭分析，滿足項目所依托的重大工程建設(shè)或重大裝備研制的需求情況等） 1．主要研究的技術(shù)指標(biāo) 1）疫苗的制備：運用體外重組技術(shù)結(jié)合免疫吸附法和免疫印跡法表達(dá)、純化和鑒定 FSHR多肽和 Eppin 蛋白；選擇合適的佐劑、穩(wěn)定劑和防腐劑（必要時）制成疫苗； 2）疫苗的質(zhì)量控制：測定疫苗中 FSHR 多肽或 Eppin 蛋白的含量，分析疫苗中的雜質(zhì)（包括宿主蛋白），研究在不同條件下疫苗的穩(wěn)定性、比較不同批次疫苗的一致性，測定疫苗的理化性狀，運用計算機模型結(jié)合質(zhì)譜分析研究 FSHR 多肽和 Eppin 蛋白的空間結(jié)構(gòu)； 3）疫苗的免疫原性：研究動物免疫后，血清、精液、睪丸和附睪等組織中抗體的滴度及其變化，與特異性靶細(xì)胞或組織的結(jié)合能力，抗體在體內(nèi)的消減等，評價疫苗使用量和免疫途徑及間隔時間與抗體發(fā)生之間的關(guān)系。 4）疫苗的主要藥效：主要以猴為實驗對象，評價免疫后動物的精子發(fā)生、性激素水平、精液與精子質(zhì)量、性功能以及生育力等，評價疫苗可能發(fā)生的毒副效應(yīng)及安全劑量，停止免疫后動物生育能力的恢復(fù)等，分析 ED50 與抗體滴度之間的相關(guān)性； 5）疫苗的抗生育靶點和作用機制：運用細(xì)胞和分子生物學(xué)技術(shù)在體外和整體水平評價疫苗可能的作用靶點 ，與受體的結(jié)合能力，受體被阻斷后可能引發(fā)的性激素的合成與分泌、精子發(fā)生、成熟和運動能力的調(diào)控、相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)等的改變； 6）疫苗的安全性：按照國家規(guī)范程序，從一般毒性試驗和長期毒性試驗、刺激性、過敏性和溶血性試驗、生殖毒性試驗以及致突變試驗、致癌試驗等方面全面評價疫苗的安全性； 23 7） FSHR 多肽和 Eppin 蛋白疫苗的聯(lián)合應(yīng)用：在單體疫苗研究的基礎(chǔ)上，評價這兩種疫苗聯(lián)合使用的效果和安全性及可恢復(fù)性，對其使用量、免疫途徑、免疫程序等進(jìn)行分析。 2． 預(yù)期目標(biāo) 1）開發(fā)出 FSHR 多肽和 Eppin 蛋白疫苗，并提 供其完整的非臨床研究資料； 2）揭示 FSHR 多肽和 Eppin 蛋白疫苗的抗生育靶標(biāo)及其作用機制； 3）建立合適的男性避孕疫苗非臨床研究的評價體系； 4）申報國家發(fā)明專利 46 項，發(fā)表和接受高質(zhì)量 SCI 收錄論文 1520 篇，出版專題報告或相應(yīng)的學(xué)術(shù)專著 12 部。 3．?dāng)M 可獲得 的 發(fā)明 專利 1） FSHR 多肽疫苗制備工藝流程； 2） FSHR 多肽抗體檢測方法、檢測試劑盒 3） Eppin 蛋白疫苗制備工藝流程； 4） Eppin 蛋白抗體檢測方法、檢測試劑盒 5） FSHR 多肽和 Eppin 蛋白疫苗的聯(lián)合應(yīng)用方法。 4． 與國內(nèi)外同 類技術(shù)和產(chǎn)品的競爭分析 1） 開發(fā)出安全、有效、可逆的、具有自主知識產(chǎn)權(quán)的男性避孕疫苗，研究成果達(dá)國際領(lǐng)先水平。 雖然世界上其他人口大國如印度也與美國等在進(jìn)行部分男性避孕的研究工作，但目前為止尚無成熟的產(chǎn)品問世。本產(chǎn)品的研制首先立足于國內(nèi)市場，特別是已婚已生育的男性 ，估計可使用人群至少超過 1 億，因而具有極大的市場開發(fā)前景；同時將出口到其他人口大國如印度、巴西等，同時申報國際專利。 2）研究過程中將形成一整套的有關(guān)疫苗的制備、純化和鑒定、質(zhì)量分析、抗體快速檢測等技術(shù)方法，并形成完善的臨床前評價體系和評價標(biāo)準(zhǔn)；在研 究的同時，將對評價結(jié)果進(jìn)行跟蹤分析，并將發(fā)表數(shù)篇高水平 SCI 收錄論文 。 3）在研究的同時，將與相關(guān)企業(yè)緊密合作，爭取早日投放市場，造福與人類。 （三） 主要經(jīng)濟(jì)、社會、環(huán)境效益（如技術(shù)及產(chǎn)品應(yīng)用產(chǎn)業(yè)化前景，在課題實施期內(nèi)能夠形成的市場規(guī)模與效益，對保障國家安全、促進(jìn)社會可持續(xù)發(fā)展及提升我國相關(guān)產(chǎn)業(yè)競爭力的作用等） 24 在擁有 13 億人口的中國，計劃生育是基本國策，男性避孕藥有著廣闊的市場空間。男性避孕方法的發(fā)展和應(yīng)用，已使夫婦在計劃生育上增加了一個自由選擇的重要空間，有利于人們的生殖健康。迄今為止，絕大多數(shù)關(guān)于男 性避孕的試驗都把重點放在改變雄性激素的分泌水平方面，以期完全阻止精子的產(chǎn)生，如庚酸睪酮、十一睪酮。 安全、高效、可逆的 FSHR 多肽和 Eppin 蛋白男性避孕疫苗的成功研制、規(guī)?；a(chǎn)及市場推廣，將有助于解決困擾千千萬萬家庭的避孕難題， 能 帶來極大的社會及經(jīng)濟(jì)效益 ， 具有良好的市場前景 ， 尤其是占中國人口大多數(shù)的農(nóng)村人口及城市外來人口 將 是男性避孕疫苗的潛在用戶。 為了使本課題的成果成功轉(zhuǎn)化，本課題組將主要在如下兩方面采取措施：首先是技術(shù)方面，必須解決男性避孕疫苗劑型多樣性，口服與皮透型疫苗更加貼近人民群眾的需要；其次是市場推廣，本課題組擬采用專利申請之后與企業(yè)合作的方法，借助企業(yè)的生產(chǎn)平臺及銷售途徑，開展男性避孕疫苗大批量生產(chǎn)和市場推廣。 本產(chǎn)品屬高科技綠色環(huán)保產(chǎn)品，對環(huán)境不會產(chǎn)生任何影響。 （四） 課題實施中可能形成的示范基地、中試線、生產(chǎn)線及其規(guī)模 本課題屬臨床前研究階段，暫時未涉及到人類。但疫苗的制備將逐步從實驗室過度到企業(yè)，并進(jìn)行適當(dāng)?shù)呐可a(chǎn)，生產(chǎn)線所需技術(shù)簡單，以無菌、混配、定量灌裝為主，一般的小型制藥公司即可滿足。產(chǎn)品成熟后，將首先在江蘇南京、常州、無錫、蘇州等地進(jìn)行試點，并逐步形成相應(yīng)的 示范基地。在總結(jié)經(jīng)驗的基礎(chǔ)上，通過國家計劃生育網(wǎng)絡(luò)逐步將產(chǎn)品推向全國。 （五） 人才隊伍建設(shè) 1． 本課題組由來自中國、 美國、 法國的多名中青年專家組成，他們多年來從事生殖醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)、分析化學(xué)、 毒理學(xué)、藥學(xué)等學(xué)科相關(guān)研究， 項目組主要成員都擁有博士學(xué)位，都有在國內(nèi)外著名高等院所進(jìn)修、學(xué)習(xí)的經(jīng)歷， 積累了 相當(dāng) 豐厚的 研究成果和成熟的技術(shù)方法 。 他們良好的科研素質(zhì)、極大的工作熱情和敬業(yè)精神，使本課題組成為具有良好發(fā)展前景和合作精神的科研團(tuán)隊。 25 2．課題組將 加大 人才隊伍 的 建設(shè) ，尤其為年輕的學(xué)者提供更多的科研機會，放手讓他們 承擔(dān)部分重要科研任務(wù)；在進(jìn)修學(xué)習(xí)、學(xué)術(shù)交流等方面提供資助；力爭培養(yǎng)一批有發(fā)展?jié)摿?、業(yè)務(wù)強的從事男性避孕疫苗研究的學(xué)術(shù)帶頭人，并構(gòu)建合理的學(xué)術(shù)梯隊； 培養(yǎng)一批 穩(wěn)定的 從事藥物開發(fā)和 安全性 評價的學(xué)術(shù)隊伍 ，培養(yǎng)一批碩士和博士研究生，成為課題研究的后備力量。 （六） 其它應(yīng)考核的指標(biāo) 本課題集中了 生殖醫(yī)學(xué)、 免疫學(xué)、分析化學(xué)、 毒理學(xué)、藥學(xué)等 相關(guān) 學(xué)科 ，有利于這些學(xué)科的交叉與融合；同時與企業(yè)的合作，有利于理論與實際的聯(lián)系 ，對學(xué)科的發(fā)展起著積極的推動作用 。在課題研究過程中，科研人員將通過與企業(yè)的合作與聯(lián)系，加深科學(xué)研究與產(chǎn)品開 發(fā)的聯(lián)系， 并引入企業(yè)先進(jìn)的管理理念和市場開拓經(jīng)驗， 有利于 真正意義上的 產(chǎn)學(xué)研一體化。