【正文】 bration Points]，下列窗口被顯示，如圖 223。 圖 323 這個(gè)窗口包含有下列元素。 ● 譜圖 熒光強(qiáng)度的譜圖能被顯示。當(dāng)在軌跡光標(biāo)上右擊鼠標(biāo)時(shí)，對(duì)于所選擇的數(shù)據(jù)的熒光強(qiáng)度值將被加到校準(zhǔn)數(shù)據(jù)框上，從而從頂行開(kāi)始。因?yàn)椤?0”作為濃度值被進(jìn)入，它應(yīng)當(dāng)用數(shù)字鍵來(lái)改變。 ● 校準(zhǔn)數(shù)據(jù)對(duì)話(huà)框 根據(jù)所選擇的校準(zhǔn)曲線模式，在這兒進(jìn)行數(shù)據(jù)列表，表頭是濃度— 熒光溫度 或 濃度 — 比值。濃度值可通過(guò)鍵輸入來(lái)改變。 ● 波長(zhǎng) 選擇波長(zhǎng)數(shù)，按鈕“ 2”。對(duì)于數(shù)據(jù)測(cè)量保持偽裝，它僅是單波長(zhǎng)。 ● 用于移動(dòng)所顯示的圖像。 ：當(dāng)它打開(kāi)時(shí)，另一張圖像被顯示。 ：顯示當(dāng)前的圖像。 在完成數(shù)據(jù)增加之后，點(diǎn)擊 OK 按鈕。 增加的數(shù)據(jù)將進(jìn)入到標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)框內(nèi)，它在校準(zhǔn)曲線產(chǎn)生窗口中。根據(jù)增加 /編輯的數(shù)據(jù)，校準(zhǔn)曲線將產(chǎn)生。 320 FL 陽(yáng)離子校準(zhǔn)文件的存儲(chǔ)和打印 為了存儲(chǔ)新建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線文件，請(qǐng)選擇 [File]— [Save as]或點(diǎn)擊 按鈕，一個(gè)窗口被顯示，如圖 334 所示。 進(jìn)入文進(jìn)名，并點(diǎn)擊 Save，相應(yīng)的文件將以“ *.fdc”格式被存儲(chǔ)。 被存儲(chǔ)的文件用作濃度計(jì)算的公式。文件數(shù)據(jù)能被打印，它打印出標(biāo)準(zhǔn)曲線圖和數(shù)據(jù)。 對(duì)于打印的 方法，參閱 節(jié)。 321 4. 報(bào)告輸出 打印 已測(cè)量的數(shù)據(jù)能夠被打印出，可用下面描述的來(lái)兩個(gè)程序中的任一個(gè)來(lái)打印。 （ 1） 打開(kāi)數(shù)據(jù)文件，并在文件菜單中選擇打印命令?；蛘唿c(diǎn)擊 按鈕，它在工具條上。然后激活數(shù)據(jù)處理窗口的區(qū)域，將進(jìn)行打印。通過(guò)點(diǎn)擊文件菜單中的打印預(yù)覽，打印的內(nèi)容會(huì)完整的顯示出來(lái)。 （ 2） 在數(shù)據(jù)菜單中選擇報(bào)告命令，或點(diǎn)擊 按鈕，它在工具條上。打印預(yù)覽的窗口出現(xiàn)，然后點(diǎn)擊打印。這個(gè)程序的打印項(xiàng)目必須通過(guò)準(zhǔn)備菜單中的報(bào)告標(biāo)簽來(lái)選擇。 注意：如果在打印紙上沒(méi)有打印出 重復(fù)測(cè)量、覆蓋等的參數(shù)，打印的方向應(yīng)當(dāng)從豎直的改變?yōu)樗降摹? 41 數(shù)據(jù)傳送到 Microsoft(R) Excel 上 已測(cè)量的數(shù)據(jù)能夠傳送到 Microsoft(R) Excel 工作表上，執(zhí)行程序如下。 （ 1） 打開(kāi)準(zhǔn)備窗口并選擇報(bào)告標(biāo)簽，顯示如圖 43 所示。 選擇傳送的內(nèi)容（峰值表和數(shù)據(jù)表，在波長(zhǎng)掃描的場(chǎng)合下），并把檢查標(biāo)記放在“ Use Microsoft(R) Excel”的題頭上，點(diǎn)擊 OK。 （ 2） 點(diǎn)擊 （報(bào)告）按鈕， Microsoft(R) Excel 將自動(dòng)啟動(dòng)并閱讀數(shù)據(jù)。從現(xiàn)在開(kāi)始，控制被移交 到 Microsoft(R) Excel 上。 42 （ 3） 使用 Microsoft(R) Excel 的擴(kuò)展碼，數(shù)據(jù)能夠被存儲(chǔ)選擇[File]— [Save Copy As]并進(jìn)入文件名。 （ 4） 關(guān)閉 Microsoft(R) Excel。一個(gè)窗口顯示如圖 46 所示，也關(guān)閉這個(gè)窗口。初始化數(shù)據(jù)處理窗口出現(xiàn)。 43 把譜圖粘貼到 Microsoft(R) Word 上。 在創(chuàng)建報(bào)告中，譜圖可直接被粘貼。使譜圖數(shù)據(jù)處在積極狀態(tài)下（通過(guò)點(diǎn)擊譜圖），并從編輯菜單中選擇拷貝指令。然后打開(kāi)Microsoft(R) Word，并從編輯菜單中選擇粘貼指令。 因此，譜圖能夠粘貼在 Microsoft(R) Word 文件中，比值計(jì)算的結(jié)果和均值也能在相同的程序中粘貼。當(dāng)你右擊被貼的譜圖，并選擇“ FL Calcium Scan Object”，如圖 47 所示，可打開(kāi)數(shù)據(jù)處理窗口，允許改變刻度值等。 注意：當(dāng)比值和校準(zhǔn)曲線一個(gè)都沒(méi)有時(shí)，（ *.fdc）譜圖就不能粘貼，所設(shè)定的標(biāo)記表也不能粘貼。 44 當(dāng)粘貼 FL 鈣掃描時(shí)： 右擊被粘貼的譜圖，如圖 48 所示。然后選擇“ FL Calcium Scan Object” ，數(shù)據(jù)處理窗口打開(kāi)，允許刻度改變等。 當(dāng)粘貼原文時(shí)： 在報(bào)告標(biāo)簽上為打印設(shè)置的項(xiàng)目，除了譜圖外，將被傳遞。一個(gè)窗口被顯示，如圖 49 所示。 45 當(dāng)粘貼圖形時(shí)： 一個(gè)窗口被顯示，如圖 410 所示。 鼠標(biāo)右擊，并選擇 [Grouping]— [Reset group]。它允許分離目標(biāo)，加上變化的譜線密度和 /或改變字體的規(guī)格，如圖 411 所示。 46 數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換成 ASCⅡ 碼文本 這個(gè)程序有一個(gè)文本轉(zhuǎn)換功能，它把數(shù)據(jù)處理文件變成其它的電子數(shù)據(jù)表格程序，數(shù)據(jù)能轉(zhuǎn)換成下列數(shù)據(jù)文 本。 ● JCAMPDX 文件（ *.dx） ● ASCⅡ 文件（ *.txt） ● Graph Metafile (*.wmf) 注意： 1. 把經(jīng)歷的項(xiàng)目轉(zhuǎn)換成 JCAMPDX 文件，包括日期 /時(shí)間，分析方法和數(shù)據(jù)表。 2. 把經(jīng)歷的項(xiàng)目轉(zhuǎn)換成 ASCⅡ 文件，包括在準(zhǔn)備窗口上的報(bào)告標(biāo)簽上的那些選擇。 3. 把經(jīng)歷的項(xiàng)目轉(zhuǎn)換成 Graph Metafile 圖文文件，它和粘貼的圖形一樣，如前面所示。 1. 打開(kāi)數(shù)據(jù)處理窗口。 2. 點(diǎn)擊文件菜單中的 Save As 指令。 3. 一個(gè)窗口被顯示，如圖 412 所示。選擇“ ASCⅡ Text(*.txt)”作為文件形式，然后指定文件夾以存儲(chǔ)該文件。 47 4. 進(jìn)入文件名并點(diǎn)擊 Save。 48 附錄 為了給試驗(yàn)設(shè)定測(cè)量條件，下列儀器條件必須確定。 ● 掃描時(shí)間 ● 周期時(shí)間 ● EX 狹縫 ● EM 狹縫 ● 光電倍增管電壓 這個(gè)附錄解釋如何安排儀器條件以獲得最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 掃描時(shí)間和周期時(shí)間的設(shè)定 為了得到更好的測(cè)量結(jié)果，盡可能獲得許多數(shù)據(jù)點(diǎn)是有利的。在測(cè)量期間數(shù)據(jù)點(diǎn)數(shù)的收集是由下列圖表確定的：掃描時(shí)間，周期時(shí)間和測(cè)量的波長(zhǎng)數(shù)。 這些因素的關(guān)系能夠用公式 1 來(lái)表達(dá)。 ( ??掃 描 時(shí) 間 ） （ 數(shù) 據(jù) 設(shè) 定 的 數(shù) 目 ） （ 最 大 的 數(shù) 據(jù) 點(diǎn) ）（ 實(shí) 際 周 期 時(shí) 間 ） …… 公式 1 掃描時(shí)間：樣品測(cè)量中的掃描時(shí)間。 有效輸入范圍： 60— 7200 秒 周期時(shí)間：為一次掃描所有的測(cè)量波長(zhǎng)所占據(jù)的時(shí)間周期。周期時(shí)間在 至 秒之間。 數(shù)據(jù)設(shè)定的數(shù)目：這是當(dāng)前所選擇的波長(zhǎng)數(shù)。它經(jīng)過(guò)儀器標(biāo)簽來(lái)選擇，選擇 [Edit]— [Method]，它就能出現(xiàn)。例如，當(dāng)為每 2 個(gè)試劑設(shè)定 2 個(gè)波長(zhǎng)時(shí)，那么測(cè)量的波長(zhǎng)數(shù)就是 4。 最大的數(shù)據(jù)點(diǎn)：儀器收集數(shù)據(jù)點(diǎn)的最大數(shù)目，它是 8008 個(gè)。 附 1 從理論上講，采集的數(shù)據(jù)點(diǎn)越多，所獲得的結(jié)果就越好。選擇周期時(shí)間和掃描時(shí)間在下面解釋。 ● 實(shí)際周期時(shí)間的檢查 ● 掃描時(shí)間的檢查 實(shí)際周期時(shí)間的檢查 為了給測(cè)量選擇最優(yōu)化的條件，實(shí)際周期時(shí)間需要首先檢查。周期時(shí)間表示，一次掃描時(shí)間所有測(cè)量波長(zhǎng)的時(shí)間段。對(duì)于測(cè)量熒光強(qiáng)度所需的總的時(shí)間段是這樣的，它由每個(gè)測(cè)量波長(zhǎng)的分析時(shí)間和從一個(gè)測(cè)量波 長(zhǎng)轉(zhuǎn)換到另一個(gè)波長(zhǎng)所需的時(shí)間，直到在下一個(gè)周期時(shí)間內(nèi)達(dá)到第一測(cè)量波長(zhǎng)。 例如，當(dāng)選擇 4 個(gè)波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)量時(shí)，掃描的時(shí)間周期如下圖所示。 在這個(gè)例子中，波長(zhǎng)符號(hào) WL 應(yīng)當(dāng)采取下列方式。 WL1： EX1/EM1/試劑 1 WL2： EX2/EM2/試劑 1 WL3： EX1/EM1/試劑 2 WL4： EX2/EM2/試劑 2 附 2 符號(hào) t 代表各時(shí)間段 的和，即各段數(shù)據(jù)采集和其它控制的時(shí)間和波長(zhǎng)轉(zhuǎn)換時(shí)間之和。例如： T12 表示在波長(zhǎng) WL1 時(shí)的數(shù)據(jù)采集和其它控制所需時(shí)間和從 WL1 轉(zhuǎn)到 WL2 所需時(shí)間之和。在所有波長(zhǎng)測(cè)量之后，波長(zhǎng)將從WL4 返回道 WL1。在這個(gè)例子中，周期時(shí)間等于 t12， t23， t34， t41 之和，如公式 2 所示。 周期時(shí)間（ t） = t12 + t23 + t34 + t41 ………… 公式 2 即使一個(gè)周期時(shí)間通過(guò)儀器標(biāo)簽設(shè)定了，但是，對(duì)于 F2500 的實(shí)際的周期時(shí)間是隨著設(shè)定的測(cè)量的波長(zhǎng)值的變化而變化。所選擇的周期時(shí)間可能 小于 F2500 完成一個(gè)周期的最小時(shí)間。在這種情況下， F2500 會(huì)自動(dòng)地以最小的周期時(shí)間取代分析者所規(guī)定的周期時(shí)間。 例如，假設(shè) F2500 完成一個(gè)周期掃描的時(shí)間為 秒，盡管分析者已經(jīng)規(guī)定了 秒的周期時(shí)間。在這個(gè)例子中，測(cè)量將執(zhí)行 秒的周期時(shí)間。如果分析者選擇的周期時(shí)間大于儀器性能的最小周期時(shí)間，那么前者時(shí)間將被使用。 掃描時(shí)間的檢查 一旦掃描時(shí)間被檢查，為測(cè)量結(jié)果的最適宜的掃描時(shí)間通過(guò)公式 1 獲得 。 ( ??掃 描 時(shí) 間 ） （ 數(shù) 據(jù) 設(shè) 定 的 數(shù) 目 ） （ 最 大 的 數(shù) 據(jù) 點(diǎn) ）（ 實(shí) 際 周 期 時(shí) 間 ） …… ..1 例 如，最小的周期時(shí)間是 秒（在一個(gè)試劑和 2 個(gè)波長(zhǎng)測(cè)量條件下），最合適的掃描時(shí)間由下式得出。 2 8 0 0 80 .7 ??（ 掃 描 時(shí) 間 ） 28 02 .8?（ 掃 描 時(shí) 間 ） 在細(xì)胞內(nèi)陽(yáng)離子測(cè)量模式中，掃描時(shí)間的進(jìn)入僅是整數(shù)，這意味著通過(guò)設(shè)定掃描時(shí)間為 2802 秒時(shí)，最大數(shù)目的數(shù)據(jù)點(diǎn)能夠被采集。 附 3 光電倍增管電壓和狹縫的設(shè)定 熒光強(qiáng)度的范圍會(huì)隨著光電倍增管的電壓以及 EX/EM 狹縫的變化而變化。首先，在細(xì)胞內(nèi)陽(yáng)離子測(cè)量模式中設(shè)定初始條件，并檢查其結(jié)果。如果，在初 始條件下，不能獲得滿(mǎn)意的結(jié)果，那么，光電倍增管電壓和 EX/EM 狹縫寬度應(yīng)當(dāng)按下列所述變化。 對(duì)于降低熒光強(qiáng)度的范圍： ● 在每個(gè)給定條件下，檢查測(cè)量結(jié)果，如下所述。 1. 減小激發(fā)光狹縫寬度。 激發(fā)光側(cè)狹縫寬度由 10nm 減小到 5nm，這將減小測(cè)量的熒光強(qiáng)度，減小 1/3。 2. 同時(shí)減小激發(fā)光和發(fā)射光狹縫的寬度。 同時(shí)將激發(fā)光和發(fā)射光狹縫的寬度由 10nm 減小到 5nm，熒光強(qiáng)度將減小 1/10。 3. 減小光電倍增管電壓 使光電倍增管電壓由 700V 下降到 400V，熒光強(qiáng)度將減小 1/69。 4. 減少樣品管中的細(xì)胞數(shù) ，減少被測(cè)細(xì)胞的數(shù)量將減小離散光。 對(duì)于升高熒光的范圍： ● 在每個(gè)給定的條件下，檢查測(cè)量結(jié)果。 1. 加寬發(fā)射光側(cè)狹縫寬度 使發(fā)射光側(cè)狹縫寬度由 10nm 加寬到 20nm，熒光溫度將增加到三倍。 2. 使用帶有固定鏡的試管 在樣品侖內(nèi)按章 2 個(gè)鏡子，熒光溫度將增加到 2 倍。帶有固定鏡的試管，它與日光恒溫比色池固定架相兼容。它帶攪拌器（ S/N 2500346） 為了防止因?yàn)榧ぐl(fā)光能量而使熒光溫度下降，執(zhí)行測(cè)量時(shí)，首先用窄的狹縫和增加光電倍增管的電壓，直到獲得有效的靈敏度。 附 4